标本溶血对免疫荧光干式定量法测定超敏C反应蛋白的影响

标本溶血对免疫荧光干式定量法测定超敏C反应蛋白的影响

刘云识罗婷婷黎宇

刘云识罗婷婷黎宇（广西医科大学第四附属医院检验科广西柳州545005）

摘要：目的探讨标本溶血对免疫荧光干式定量法测定超敏C反应蛋白的影响。方法筛选本院各类急性炎症患者的血标本，采用i-CHROMATMReader免疫荧光分析仪对这些血标本进行溶血前和溶血后的超敏C反应蛋白的检测，观察不同程度的溶血对该检测项目的影响状况。结果标本轻度溶血组的超敏C反应蛋白测定值与对照组的测定值相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；标本重度溶血组的超敏C反应蛋白测定值与对照组的测定值相比较，差异具有统计学意义（P<O.05）。结论重度溶血可对超敏C反应蛋白的测定结果造成一定的影响，为确保标本的检验质量，应尽量避免使用溶血标本进行检测。

关键词：溶血；免疫荧光法；超敏C反应蛋白；影响

Objective：ToinvestigatetheeffectofhemolysisdeterminationofHigh-SensitiveC-reactiveproteinontheimmune-fluorescencemethod.Methods：thescreeningofallkindsofacuteinflammationinpatientswithbloodsamplesweredetectedbyHigh-SensitiveC-reactiveproteinReaderfluorescenceanalyzeri-CHROMATMhemolysisonthesebloodsamplesbeforeandafterhemolysis，observetheinfluenceofdifferentdegreesofhemolysisonthetestitems.Results：comparedwiththecontrolgroupvaluedeterminationofthevalueHigh-SensitivityC-reactiveproteindeterminationweremildhemolysisgroup，thedifferencewasnotstatisticallysignificant（P>0.05）；setthevalueanddeterminationofcontrolgroupcomparedwiththevaluesmeasuredwereHigh-SensitiveC-reactiveproteininseverehemolyticgroup，thedifferencewasstatisticallysignificant（P<O.05）.Conclusion：theseverehemolysisdeterminationresultsofHigh-SensitivityC-reactiveproteinhasacertainimpact，inordertoensurethequalityoftestspecimens，shouldtrytoavoidtheuseofhemolysisweredetected.

【Keyword】：hemolysisimmunofluorescencemethodsupersensitivityC-reactiveproteineffectseffect

C-反应蛋白（CRP）由肝细胞合成，是急性时相反应极灵敏的指标，可作为心血管疾病的独立危险因素[1]，也可作为临床用于诊断、治疗和监控各种疾病感染、组织损伤和炎症变化的敏感指标[2-3]。临床选用免疫荧光干式定量法检测超敏C反应蛋白的原因是源于此方法具有操作简便，检测用时短，结果的准确率和敏感性高的特点。可广泛适用于门、急诊的急救需求[4]。在实际检验工作中，我们常会遇到一些标本测定的结果与临床表现不符的现象，影响临床医生对患者病情的诊断。究其原因可发现用于检测该项目的这类标本常伴有不同程度的溶血，而溶血是否会对超敏C反应蛋白的检测造成影响，本文将针对这一情况做实验，意在观察溶血对免疫荧光法检测CRP的影响情况。

1.材料与方法

1.1一般材料和溶血分级

1.1.1一般材料：选取2017年9月至10月份至我院就诊并诊断为各类疾病急性炎症患者标本200例，其中男性100例，女性100例。所选标本排除溶血、脂血、黄疸等状况，所有检测均按实验要求完成，避免因放置时间、外界污染物等因素干扰检测结果。

1.1.2溶血分级：人为将溶血程度分级为轻度溶血（Hb1.0~10.0g/l）、中度溶血（Hb10.1~20g/l），重度溶血（Hb20.1~30g/l），由于人为制造溶血，溶血程度较难把控，所溶标本的溶血的血浆Hb浓度均可控制在轻度溶血和重度溶血范围，故此次实验只适用于轻度溶血和重度溶血的范围。

1.2仪器和试剂：检测仪器为韩国BoditechMEDInc.生产的i-CHROMATMReader免疫荧光分析仪，所用试剂及反应所需反应物件均为厂家配套产品；离心机为北京北洋BY-600A型低速离心机；溶血定量观察所用仪器为日本希森美康全自动血液分析仪XN-3000.试剂为厂家提供的配套产品。

1.3检测方法将选取的血标本按超敏CPP规范要求测定所得数据组设为对照组；将用带针头的注射器抽打1至2次的标本至轻度溶血后所测得的数据组设为轻度溶血组；将用带针头的注射器反复抽打10次以上的标本至重度溶血后所测得的数据设为重度溶血组。所有标本操作均使用i-CHROMATMReader免疫荧光分析仪测定超敏C反应蛋白浓度并记录所有数据；然后用带针头的注射器轻微抽打所选标本1-2次使其发生轻度溶血，离心后取血浆在XN-3000检测并确定标本溶血是在轻度溶血范围后，测量超敏C反应蛋白的浓度并记录所有数据；再将所有发生轻度溶血的血标本用带针头的注射器继续反复抽打10次以上，离心后取血浆在XN-3000检测并确定标本溶血是在重度溶血范围后测量超敏C反应蛋白的浓度并记录所有数据。最终将轻度溶血和重度溶血时所测得标本数据与正常标本时所测得的数据做比较，观察其差异情况。实验操作均严格按照厂家提供的使用说明书和检验科制定的SOP文件执行。

1.4统计学处理：比较正常标本与轻、重度溶血后各组数据之间的差异。实验数据以均数（±）标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验。

2.结果

轻度溶血组与对照组检测结果比较，P>0.05，其差异不具有统计学意义；重度溶血组与对照组检测结果比较，P<0.05，其差异具有统计学意义。如下表一所示：

3.讨论

本文实验结果表明：轻度溶血组与对照检测结果比较，P>0.05，其差异不具有统计学意义，重度溶血组与对照结果比较，P<0.05，其差异具有统计学意义。重度溶血标本的超敏C反应蛋白的测定值明显低于溶血前的测定值，由此可见，重度溶血可影响免疫荧光法超敏C反应蛋白的测定结果。

严重溶血的标本是如何影响免疫荧光干式定量法超敏C反应的检测目前尚不能从试剂厂家提供的说明书或者各类在线网络学术资料获悉。而溶血因素干扰免疫荧光法测定各类项目常见的原因分析主要有以下几种：第一种原因为当标本发生严重溶血时，红细胞膜破裂，红细胞中的血红蛋白释放出来，使反应混合物颜色背景变暗，阻碍了仪器比色的光路传导和透射，使仪器光路接收器对检测光线接收的识别力和敏感性下降，从而使仪器接收到的信号减弱，导致结果偏低；第二种原因为标本溶血时红细胞被破坏，细胞中的内液释放进入血液中，标本中血浆量增多，目标检测物浓度被稀释，在加样量相同的情况下，溶血标本的目标检测物含量较未溶血时的含量低。样品标本在与试剂发生结合反应后，仪器显示溶血后标本的结果较未溶血时的结果偏低；其三标本发生严重溶血时，血液中可能释放出可以与抗体发生交叉反应的抗原，同时标本中又有抗原存在，使测试带上的复合物积聚增多，荧光抗体的信号强度增大，至使实验结果偏高。通过实验结果可以看出，免疫荧光法测定CRP在溶血状态下受到影响的原因符合第二种情况。

综上所述，重度溶血标本对超敏C反应蛋白的测定有显著影响，致实验结果减低，可能会造成临床一些低值临界标本的漏诊，耽误临床诊断。如何减少或避免溶血对免疫荧光干式定量法测定超敏C反应蛋白的影响，就成为相关医务工作者都需要注意的问题：对于护理人员而言，应规范操作采血，尽量避免各类易造成标本溶血的失误性操作；对于运送标本的工作人员而言，避免标本在采集运送过程人为因素造成溶血；对于实验室而言，如若标本在上机前发现溶血，应及时与临床沟通，建议重抽。若不能重抽血标本，应标注好备注提醒临床注意。

参考文献

[1]尹一兵，倪培华，刘新光等.临床生物化学检验技术[M]．第l版．北京：人民卫生出版社．2015．90．

[2]高阅春，李全，何继强等.超敏C反应蛋白水平与冠心病严重程度及预后的相关性研究[J].中华实用医药，2012，3B：840-843

[3]张晓慧，李光韬，张卓莉等.C反应蛋白与超敏C反应蛋白的检测及临床意义[J].中华临床免疫和变态反应杂志，2011，05（1）：74-77

[4]邓芳梅，林晓文，李德发.i-CHROMATMREADER免疫荧光分析仪性能评价[J].国际检验医学杂志，2012，33（5）：107-109