高效液相色谱测定富马酸喹硫平血清药物浓度

高效液相色谱测定富马酸喹硫平血清药物浓度

戴宇斌张国荣

戴宇斌张国荣（嘉兴市康慈医院浙江桐乡314500）

【摘要】目的建立一种高效、满足临床血清药物浓度监测需求的富马酸喹硫平血清药物浓度的高效液相色谱法。方法选用HypersilODS2色谱柱（5μm，4.0mm×150mm），流动相为乙腈-水-四甲基乙二胺（21：29：0.2），加入冰醋酸调节pH值至5.8，流速1.0mL?min-1，紫外检测波长254nm，满标吸光度值（AUFS）=0.005，柱温40℃。结果富马酸喹硫平、内标地西泮与血清中的杂质能较好分离，峰面积与其浓度在20～960ng?mL-1的范围内呈良好线形关系（r=0.9993）。相对回收率97.0%～99.3%，提取回收率76.9%～82.1%，日内RSD为3.1%～6.3%，日间RSD为2.1%～5.9%，最低检测限浓度为10ng?mL-1。结论本方法具有较高的专属性、灵敏度、准确性，保留时间短，适用于临床患者血清药物浓度监测。

【关键词】富马酸喹硫平血清药物浓度高效液相色谱紫外检测

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）28-0027-02

富马酸喹硫平(quetiapinefumarate)，商品名思瑞康(Seroquel)、启维。是一种新型非典型抗精神病药，化学名11-{4-[2-(2-羟乙氧基)乙基-1-哌嗪基]}二苯骈(b，f)(1，4)硫氮杂卓富马酸盐(2：1)。化学结构与氯氮平片、奥氮平片相似，属二苯硫氮卓类衍生物。主要作用于5-HT2，D1，D2及D4受体，对精神分裂症疗效肯定，不良反应轻，安全性好。与传统的抗精神病药物相比，由于与5-HT2受体亲和力较D1及D2受体强，且5-HT/DA受体结合之比大于2，不但对精神分裂症阳性症状有效，对阴性症状同样有效。同时具有改善认知功能，无明显嗜睡、流涎、抗胆碱能作用，锥体外系不良反应(EPS)发生率低，无粒细胞减少等优点[1-3]。

目前富马酸喹硫平已广泛用于治疗精神分裂症，以及双相情感障碍的躁狂发作。但由于其治疗窗浓度范围比较窄（126～350ng?mL-1）[4]，且其血清药物浓度个体性差异较大，因此本文旨在建立一种高效、快速的方法，测定其浓度为临床合理用药提供参考信息，制定个体化给药方案。

1仪器与试药

1.1仪器日本岛津高效液相色谱仪，包括LC-10ATVP溶剂输送泵，SPD-10AVP紫外检测器，CTO-10ASVP柱温箱。浙大智达N2000色谱工作站，宁波科生KS-218超声波发生器，上海医科大学仪器厂XW-80A漩涡混合器。

1.2试药富马酸喹硫平对照品由湖南洞庭药业股份有限公司提供，纯度为99.5%。内标地西泮由浙江医药股份有限公司提供，纯度>99%。乙腈为色谱纯，四甲基乙二胺、冰醋酸、氢氧化钠、乙醚均为分析纯，水为经0.45μm微孔滤膜负压过滤的超纯水。

2方法

2.1色谱条件

大连依利特HypersilODS2色谱柱（5μm，4.0mm×150mm）；流动相为乙腈-水-四甲基乙二胺（21：29：0.2），加入冰醋酸调节pH值至5.8；流速1.0mL?min-1；紫外检测波长254nm；满标吸光度值（AUFS）=0.005；柱温40℃；进样量20μL。

2.2对照品与内标溶液配制

精密称取富马酸喹硫平对照品适量，以甲醇为溶剂配制成浓度为160μg?mL-1的对照品储备液，临用时用甲醇稀释成所需浓度。以甲醇为溶剂配制成20μg?mL-1的内标储备液，临用时用甲醇稀释成所需浓度。

2.3血清样本预处理

取血清样品0.5mL（加入对照品的空白血清或服用药物的患者血清），加入稀释成1μg?mL-1的内标液20μL，加1.0mol?L-1的氢氧化钠溶液0.2mL，振荡混匀，加入0.5mL0.45μm微孔滤膜负压过滤的超纯水，振荡混匀后加入乙醚4.0mL，漩涡振荡2min，放于通风橱内静置20min，准确吸取上层乙醚层3.5mL，50℃水浴蒸干，残渣加入流动相150μL溶解，取20μL进样分析。

2.4标准曲线制备

以甲醇为溶剂对富马酸喹硫平对照品储备液进行稀释，分别吸取20μL稀释后的对照品储备液加入0.5mL空白血清中，使血清药物浓度分别为20，40，80，160，320，640，960ng?mL-1，进行预处理后依次进样。

3结果

3.1色谱行为

在上述色谱条件下，富马酸喹硫平、内标的保留时间分别为5.5min、6.4min，与血清中其他杂质分离度较好，见图1。

图1空白血清（A）、患者血清+内标（B）、

对照品+内标（C）色谱图

1.富马酸喹硫平2.内标地西泮

3.2标准曲线

以对照品与内标的峰面积比值为X，对照品浓度为Y，进行线性回归，得到的回归方程为Y=36.143X–4.906，r=0.9993。在20～960ng?mL-1的浓度范围内呈良好线形关系。其最低检测限（S/N≥3）为10ng?mL-1。

3.3精密度与回收率

在空白血清中分别加入稀释后的富马酸喹硫平对照品储备液及内标液，使对照品浓度分别为40,160,640ng?mL-1，配置各5份。依次进样，求得以上低、中、高3种浓度的日内精密度、日间精密度以及相对回收率。以相应对照品溶液直接进样，求得提取回收率。结果见表1。

表1富马酸喹硫平的精密度测试及回收率

4讨论

乙醚具有一定的吸湿性，在萃取过程中会吸入血清中的大量杂质，以及少量的血清，对色谱柱造成较大的污染。同时还会造成乙醚与血清之间分层模糊，给吸取上层乙醚造成困难。延长静置时间至30min，也未得到显著的效果。因此可在萃取时加入0.5mL经微孔滤膜负压过滤的超纯水。空白血清中的脂蛋白在解冻时容易产生絮状沉淀物，吸入这些沉淀物会在漩涡过程中出现乳化现象。

使用本方法测定服用富马酸喹硫平的住院患者100余例，测定其清晨谷浓度，未发生有其他药物干扰现象，日剂量在25mg～800mg之间的患者，除小部分个体差异较大的之外，血清药物浓度随日剂量的加大而升高，但与患者的年龄、性别不存在明确的相关性。

采用高效液相色谱、液质联用等方法测定富马酸喹硫平血清药物浓度的方法在国内外已有报道，但大多数方法对仪器要求高、成本昂贵。血清样本预处理上多采用固相萃取法，萃取过程复杂。色谱条件上流动相配制成分较多，且大多使用磷酸盐缓冲液，或采用梯度洗脱法。保留时间大多在8～14min之间[5-8]。本方法在样本预处理上为简单的碱化与乙醚一次萃取，流动相组成简单，色谱柱柱压也较低，保留时间较短。

同时，本方法专属性、灵敏度、准确性较高，且对仪器、试剂等要求不高、使用成本低，适用于临床患者的血清药物浓度监测。

参考文献

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