联合EB病毒DNA载量、VCA-IgA及EA-IgA在鼻咽癌早期诊断的价值

联合EB病毒DNA载量、VCA-IgA及EA-IgA在鼻咽癌早期诊断的价值

韦艳艳1农海清1薛莲2

（1广西钦州市灵山县人民医院广西钦州535400）（2广西河池市人民医院广西河池547000）

【摘要】目的：探讨联合EB病毒DNA载量、VCA-IgA及EA-IgA在鼻咽癌早期诊断的应用价值。方法：选取2014年1月—2015年1月经我院病理确诊的120例鼻咽癌患者，采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定血浆EBV-DNA，酶联免疫法（ELISA）测定血清VCA-IgA及EA-IgA。比较分析三项指标单独及联合检测时对鼻咽癌的阳性检出率。结果：VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA三项指标联合检测时，敏感度及约登指数分别为98.33%、84.04%，明显高于单独检测的敏感度及约登指数，差异有统计学意义（χ2值分别为6.248、13.561，P均＜0.05）；在鼻咽癌各分期中EBV-DNA的阳性检出率差异有统计学意义（P＜0.05），三项指标联合检测时对各临床分期鼻咽癌的阳性率均可达100.00%。结论：EB病毒DNA载量、VCA-IgA及EA-IgA联合检测可有效提高各临床分期鼻咽癌的阳性率，且检测结果互补性较强，有较好的临床诊断价值。

【关键词】鼻咽癌；VCA-IgA抗体；EB病毒

【中图分类号】R739.6【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）13-0198-02

鼻咽癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，是头颈部最常见的恶性肿瘤，多项研究表白EB病毒感染与鼻咽癌有密切的关系，临床上较难对早期鼻咽癌做出诊断。有研究表明[1]显示应用荧光定量PCR检测EBV-DNA的操作简单，准确率较高，但各家报道的检出率不尽相同。目前，在广西绝大部分医院实验室采用的是EBVVCA-IgA及EA-IgA检测，但是检出率并不高[2]。本文采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定血浆EBV-DNA，酶联免疫法（ELISA）测定血清EBVVCA-IgA及EA-IgA，评估将上述三项指标联合应用可否能提高对早期鼻咽癌患者的诊断价值。现报道如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

2014年1月—2015年6月经我院病理确诊的120例鼻咽癌患者，年龄24～71岁，中位年龄38岁。根据2008年鼻咽癌分期标准[3]，Ⅰ期23例，Ⅱ期30例，Ⅲ期31例，Ⅳ期36例，Ⅰ、Ⅱ期为早期，Ⅲ、Ⅳ期为晚期。

1.2抗体检测方法

EBVVCA-IgA及EA-IgA检测试剂盒采用德国IBL公司的ELISA试剂盒，血清稀释度为1:100，严格根据试剂说明书步奏进行操作。酶标仪为美国BIO-RAD伯乐公司680型全自动酶标仪。抗体水平用相对吸光度值表示，即以标本吸光度值（OD值）除以诊断界值(cut-off值)，若待测血清OD值/cutoff值大于1.0判断为阳性；待测血清OD值/cutoff值小于或等于1.0判断为阴性。

1.3EBV-DNA载量检测

实时荧光定量PCR仪为ABI公司制造，PCR相关试剂及淋巴细胞分离液购自中山大学达安基因股份有限公司。用EDTA抗凝管采集静脉血1ml加入1ml无菌生理盐水，另取一5ml已加500μl淋巴分离液，取已稀释全血1ml缓缓加入，以水平离心机2000rpm/min离心5min，取中间白细胞层，置于离心管12000rpm/min离心10min，弃上清，加入DNA提取液震荡溶解，1000C干浴10min，再12000rpm/min离心10min，上清即为模板。PCR检测：PCR反应管中加入2μlDNA模板提取液，8000rpm/min离心数秒放入荧光定量PCR检测仪样品槽。循环条件为：930C2min，930C45s，550C2min，共40个循环。反应结束后，用计算机将样本和标准曲线对比，计算出反应体系中待测标本中DNA的拷贝数。以试剂说明书中明确的EBV-DNA载量≥500copies/ml为阳性。

1.4统计学方法

应用SPSS17.0统计软件对数据进行分析。计数资料采用百分率表示，率的比较采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。检测指标的评估采用受试者工作特征曲线（ROC）分析，分别计算各检测指标的特异度、灵敏度及约登指数。

2.结果

2.1三项指标单独检测时，敏感度以EBVVCA-IgA最高（97.50%），特异度以EBVEA-IgA最高（95.23%）；单独应用EBV-DNA，其敏感度在VCA-IgA与EA-IgA之间，特异度均不及上述两者；三项指标联合检测时，敏感度及约登指数分别为98.33%、84.04%，明显高于VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA单独检测的敏感度及约登指数，差异有统计学意义（χ2值分别为6.248、13.561，P均＜0.05），特异度（76.19%）介于单独检测的特异度之间。具体数值见表1。

2.2EBV各检测指标在鼻咽癌不同临床分期的阳性率：EBVVCA-IgA及EA-IgA在鼻咽癌各分期中的阳性检出率差异无统计学意义（P均＞0.05）；EBV-DNA在鼻咽癌各分期中的阳性检出率差异有统计学意义（χ2=10.089，P＜0.05）；三项指标联合检测时在各期鼻咽癌中至少一项检测结果为阳性的概率均为100.00%，具体数值见表2。

3.讨论

据世界卫生组织的粗略估计，世界上80%左右的鼻咽癌发生在我国[4]，广西是我国鼻咽癌高发地区之一。有研究报道[5]鼻咽癌Ⅰ期患者的5年生存率是98%、Ⅱ期5年生存率是85～90%、Ⅲ～Ⅳ期5年生存率是37～55%，所以早期诊断、早期治疗对提高鼻咽癌患者5年生存率即为重要。诸多流行病学及分子生物学研究资料表明EB病毒与鼻咽癌发生具有有密切的关系[6]，使鼻咽癌早期诊断率从20～30%提高到80～90%。VCA、EA的相应抗体检测对鼻咽癌有高度的特异性，并提示抗体阳性者应定期复查。EBV-DNA定量检测对鼻咽癌的诊断、治疗效果的观察和复发的诊断有非常重要的意义[7]。

本研究对120例鼻咽癌患者血清VCA-IgA与EA-IgA抗体及EBV-DNA载量进行检测，以探讨以上三项指标联合应用时对早期鼻咽癌的诊断价值。结果发现敏感度以VCA-IgA最高（97.50%），特异度以EA-IgA最高（95.23%）[8]。但EA-IgA对早期鼻咽癌诊断敏感性较差，诊断作用不如VCA-IgA敏感[9]。故单独使用VCA-IgA容易导致误诊；单独使用EA-IgA易导致漏诊[10]。单独应用EBV-DNA，其敏感度在VCA-IgA与EA-IgA之间，特异度均不及上述两者。三项指标联合检测时，敏感度为98.33%，明显高于VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA单独检测的敏感度，差异有统计学意义（P＜0.05），说明三项指标联合检测时可提高鼻咽癌的阳性检出率，且约登指数为80.04%，也明显高于单独检测的约登指数，差异有统计学意义（P＜0.05）。约登指数越大，真实性愈大，说明三项指标联合检测时其结果的靠性优于单项检测。

本研究发现EBV-DNA在鼻咽癌各分期中的阳性检出率差异有统计学意义（P＜0.05），既分期越晚，EBV-DNA阳性检出率越高，说明肿瘤分期与EBV-DNA阳性检出率存在相关性，这可能与患者体内肿瘤的负荷变化有关。VCA-IgA、EA-IgA在鼻咽癌各分期中的阳性检出率无统计学差异，故其阳性率对鼻咽癌临床分期的判定无参考意义。当三项指标联合检测时对各临床分期鼻咽癌的阳性率均可达100.00%，明显提高了肿瘤的阳性检出率。若三项指标均为阳性时则提示其鼻咽癌风险非常高，应高度怀疑鼻咽癌，若其中两项为阳性，且滴度（或载量）持续上升，则应定为鼻咽癌高危人群，应定期复查、持续随诊可有效发现早期鼻咽癌。

综上所述，VCA-IgA与EA-IgA抗体及EBV-DNA三项指标联合检测可有效提高各临床分期鼻咽癌的阳性率，且检测结果互补性较强，有较好的临床诊断价值。但由于各单位所用检测方法、检测试剂盒、阳性判断标准等因素不一致，各单位报道的结果不尽相同，本研究结果只适用于本单位参考。

【参考文献】

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