结肠癌干细胞的筛选及其耐药性研究

结肠癌干细胞的筛选及其耐药性研究

封梅

哈尔滨市阿城区人民医院黑龙江哈尔滨150300

摘要：目的：对结肠肿瘤干细胞的筛选及耐药性进行了探讨。方法：收集了我院从2015年12月到2016年12月间50例结直肠疾病患者的标本，将结肠癌细胞在特定微环境下培养,分析结肠癌细胞形态变化与分化程度的关系,及其与干细胞特性的关系,并筛选干细胞样肿瘤细胞,了解不同结肠癌干细胞的耐药性。结果：观察到在7.7％溃疡性结直肠炎患者、14.7％结直肠息肉患者和58.0％结直肠癌患者的标本中结肠癌干细胞存在较高的耐药性，在结直肠癌患者中，高耐药性的患者比低耐药性的患者显示出更短的总生存期和无病生存期。结论：对结肠癌干细胞的深入研究,有可能会从全新的角度去阐明结肠癌发生、发展的机制,从而为结肠癌的诊断、治疗提供一种新的思路。

关键词：结肠癌干细胞;筛选;耐药性

Screeninganddrugresistanceofcoloncancerstemcells

Abstract:Objective:Toinvestigatethescreeninganddrugresistanceofcoloncancerstemcells.Methods:collectedinourhospitalfromDecember2015toDecember2016,50caseswithcolorectaldiseasespecimens,thecoloncancercellswereculturedinspecificmicroenvironment,analysisofrelationshipbetweencolorectalcancercellmorphologicalchangesanddifferentiation,anditsrelationshipwiththecharacteristicsofstemcells,andscreeningofstemcellliketumorcells,understandtheresistancecellsofdifferentnodethecancerstem.Results:observedin7.7%patientswithulcerativecolitis,14.7%patientswithcolorectalpolypsand58%patientswithcolorectalcancerspecimensofcoloncancerstemcellshaveahighresistanceinpatientswithcolorectalcancer,highresistancethanpatientswithlowdrugresistancepatientsshowedashorteroverallsurvivalanddisease-freesurvival.Conclusion:itispossibletoelucidatethemechanismofcoloncancerdevelopmentfromanewpointofview,soastoprovideanewapproachforthediagnosisandtreatmentofcoloncancer.

Keywords:tumorstemcells;screening;drugresistance

结肠癌是危害人类健康的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。研究认为,肿瘤血管对肿瘤的生长和转移具有重要作用,抗血管生成治疗已成为肿瘤治疗重要手段,但临床报道部分病人抗血管生成治疗效果不佳,甚至促进肿瘤进展。本研究将结肠癌细胞在特定微环境下培养,分析结肠癌细胞形态变化与分化程度的关系,及其与干细胞特性的关系,并筛选干细胞样肿瘤细胞,对结肠肿瘤干细胞的耐药性进行了探讨。

1.资料与方法

1.1一般资料

收集了我院从2015年12月到2016年12月间50例结直肠疾病患者的标本，其中包括22例溃疡性结直肠炎患者、23例结直肠息肉患者和5例结直肠癌患者。

1.2方法

筛选过程。采用干细胞球培养法筛选结肠癌干细胞时,要取生长状态良好的结肠癌细胞制成单细胞悬液并计数,取单个细胞放入肿瘤干细胞培养基中悬浮培养,每天晃动几次,防止细胞贴壁,待细胞球变大,亮度降低,结构变松散时用酶消化传代,取亲本及传代后细胞放入孔板中培养后,计算成球率。HCT-116细胞和Colo205细胞在含血清培养液中贴壁生长。分选后的EpCAM+CD44+HCT-116细胞和EpCAM+CD44+Colo205细胞在无血清培养液中悬浮生长，逐渐由单个细胞扩增形成轮廓清晰的肿瘤干细胞球，将所得到的第一代肿瘤干细胞球解离传代后仍能得到形态相同的细胞球。将无血清培养得到的第2代肿瘤干细胞球改用含血清培养液培养，可见肿瘤干细胞球贴壁生长，且肿瘤干细胞球周围逐渐游离出单个肿瘤细胞，最后肿瘤干细胞球消失，形成贴壁生长的单层肿瘤细胞。

耐药性研究。经实验证实,结癌干细胞对传统化学治疗药物比一般的肿瘤细胞具有更强的耐受性。处于静止期或慢周期状态是成体干细胞的一个重要特点,研究表明肿瘤干细胞也大多处于静止状态,并参与了肿瘤的耐药、复发和转移。在本研究中，采用MTT比色实验法比较EpCAM＋CD44＋结肠癌干细胞和结肠癌细胞对三种结肠癌治疗常用的化疗药物丝裂霉素、顺铂和5-氟尿嘧啶的敏感性。

2.结果

观察到在7.7％溃疡性结直肠炎患者、14.7％结直肠息肉患者和58.0％结直肠癌患者的标本中结肠癌干细胞存在较高的耐药性，在结直肠癌患者中，高耐药性的患者比低耐药性的患者显示出更短的总生存期和无病生存期。

3.讨论

结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率在我国仅次于胃癌和食道癌，位于消化道恶性肿瘤的第三位。结肠癌的预后较好，根治术后5年存活率可达50%以上。但由于大多数结肠癌患者术后肿瘤容易复发、转移，且复发转移后的肿瘤往往产生多药耐药性使得肿瘤对多种化疗药物耐受，导致化疗失败，最终引起患者死亡。因而寻找一种新的有效的结肠癌治疗方法仍是当前结肠癌治疗中亟待解决的问题。传统的肿瘤研究理论认为：所有的肿瘤细胞都具有无限增殖的潜能，肿瘤的发生发展是全部肿瘤细胞共同增殖的结果。但近年来的研究发现，并不是所有的肿瘤细胞都具有无限增殖能力，肿瘤的发生发展是由肿瘤组织中一小部分具有干细胞特性的肿瘤干细胞决定的。肿瘤干细胞具有和干细胞相似的自我更新能力和多向分化潜能，能够在体内外无限分裂增殖并能产生不同分化类型的子代细胞。目前已经从白血病、脑肿瘤、乳腺癌、肺腺癌和前列腺癌等多种肿瘤中分离出了肿瘤干细胞。许多研究已证实在包括结肠癌在内的多种实体瘤中存在肿瘤干细胞,它与结肠癌的复发、转移和治疗耐受有着密切的联系。虽然癌干细胞在肿瘤细胞总数中只占很小比例,但是在肿瘤的起源、发展、转移以及复发等方面均有重要的作用。本研究对结肠肿瘤干细胞的筛选及耐药性进行了探讨。

综上所述，从结直肠癌前病变到肿瘤的表达水平是逐渐增加的。它可能在结直肠癌的发展中扮演癌基因的作用，可能作为结直肠癌预后潜在的生物标志物。对结肠癌干细胞的深入研究,有可能会从全新的角度去阐明结肠癌发生、发展的机制,从而为结肠癌的诊断、治疗提供一种新的思路。

参考文献：

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