凝血酶原时间测定(PT)手工法与仪器法测定的比较

凝血酶原时间测定(PT)手工法与仪器法测定的比较

齐绍伟

齐绍伟

（哈尔滨市红十字中心医院黑龙江哈尔滨150076）

【摘要】目的：探讨采用手工法与仪器法对凝血酶原时间测定的比较。方法：选取正常体检者和我院门诊及住院的肝炎患者和口服华法林患者，枸橼酸钠抗凝血浆样品各20份样品进行凝血酶原时间测定。结果：PT精密度结果比较，采用仪器法与手工法重复对同一混合血浆测定，结果表明精密度比较，仪器法高于手工法。对三组不同方法测定的PT结果进行比较，健康体检者与肝炎患者采用仪器法与手工法无显著差异P>0.05。口服华法林组两种方法对比仪器法与手工法差异显著具有统计学意义P<0.05。结论：仪器法以纤维蛋白转变瞬间出现的浊变为测定终点信号,不损伤纤维蛋白的形成,灵敏度较高，测定凝血酶原时间使用仪器检测可以提高正确性和精确度。

【关键词】凝血酶原时间测定(PT)；手工法；仪器法测定

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）09-0299-02

血浆凝血酶原时间（PT）测定是临床血液学检验的常规检测项目，是外源性凝血途径的筛选性试验主口服华法林抗凝药物治疗监控的首选实验室指标[1]。为提高检验质量和质控水平，对仪器法和手工法对比观察分析如下。

1.标本来源与方法

1.1标本来源

选取2016年1月—2017年12月期间，健康体检者20例、肝炎患者20例，口服华法林患者20例。

1.2标本采集

用硅化或塑料注射器抽取空腹静脉血2.7ml，缓缓注入含0.109mol/L的枸橼酸钠溶液0.3ml的硅化或塑料试管中，充分均匀。以2000～2500g，离心15分钟，收集上层贫血小板血浆，并在24小时内完成试验。正常对照血浆：选择正常健康男性和女性各10例，年龄在18～45岁。无妊娠、月经期、哺乳期和口服避孕药的妇女，采取的血浆冰冻干燥保存或-80℃保存。

1.3试剂及器材

0.109mol/L枸橼酸钠溶液（含二分子结晶水的枸橼酸钠32g/L）。凝血活酶试剂：市售商品，应标有ISI、批号及有效期。冻干者应按说明书加指定的缓冲稀释剂复溶。0.025mol/L氯化钙溶液：（目前有些商品试剂已将凝血活酶液与氯化钙液混合好，可不必另配CaCl，液）。正常及异常对照血浆[2]。配制试剂用水必须符合1级纯水的标准。塑料试管、塑料注射器、秒表、恒温水浴箱、移液管。采用上海通用仪器公司生产TYXN-91智能血液凝集仪。

1.4测定方法

1.4.1手工法（1）取PT凝血活酶冻干品一支，加入2.2ml蒸馏水轻摇溶解。（2）测定温度36.5～38.5℃，上述各试剂及被测血浆，均应预温至此一温度，但凝血活酶试剂预温不可超过30分钟，血浆预温一般不宜超过10分钟。（3）所用试管及加样器等接触血浆的器具均为塑料或硅化玻璃管。（4）取塑料试管1支，加入待测血浆和组织凝血活酶浸出液各0.1ml，混匀后置37℃水浴预温。加入0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml（氯化钙液也应预温在37℃水浴中），立即混匀并开动秒表：试管仍浸于水浴中，至约10秒钟时，自水浴中取出，在明亮处不断轻轻倾斜试管，记录至液体停止流动所需要的时间。每次测定二管，按平均数报告。本试验的最后混合液其pH应为7.2～7.3，大部分商品凝血活酶试剂均用含缓冲液的溶液配制。（5）每批均同时做正常和异常对照，方法应与测定标本完全相同。

1.4.2仪器法按照智能血液凝集仪操作，严格按仪器说明书操作。

1.5统计学处理

采用SPSS19.0统计学软件进行数据处理，采用平均值±标准差即（x-±s）表示，组间均数比较用t检验,P＜0.05为具有统计学意义。

2.结果

2种方法PT精密度结果比较，采用仪器法与手工法重复对同一混合血浆测定，仪器法为13.5，s为0.30，cv2.2%；手工法为15.2，s为0.66，cv4.4%。结果表明精密度比较仪器法高于手工法。

对三组不同方法测定的PT结果进行比较，健康体检者20例，仪器法检测PT结果（11.73±0.36），手工法（12.96±0.71）（P＞0.05）；肝炎患者20例，仪器法测定（15.42±1.43），手工法（16.03±1.60）（P＞0.05）；口服华法林患者20例，仪器法测定（18.12±2.43），手工法（23.43±3.75）（P＞0.05）；健康体检者与肝炎患者采用仪器法与手工法无显著差异P＞0.05。口服华法林组两种方法对比，仪器法与手工法差异显著，具有统计学意义P＜0.05。

3.讨论

血浆凝血酶原时间测定（PT）反映血浆中凝血因子I、Ⅱ、V、Ⅶ、X和凝血酶原水平的试验，是外源性凝血系统功能的过筛试验。此外，常利用本试验对口服抗凝剂治疗进行监控。主要检测原理，在37℃保温下，受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（兔脑、人脑、胎盘、肺组织等浸出液）和适量的钙离子后，测其凝固时间即为PT。

PT测定通常用于出血性疾病的病情观察和出血及手术时应补何种凝血因子的检查，也用于检查肝合成维生素K依赖因子（Ⅱ、Ⅶ、X）是否减少，是维生素K缺乏、肝病的一项检查指标；用于缺血性心脏病（如心肌梗死）和人工瓣膜使用者，在应用双香豆素等口服抗凝剂进行抗凝治疗时的监控项目[3]。

血液和抗凝剂（0.109mol/L的枸橼酸钠）9:1的比例一定要准确。抽血要顺利，不能混入组织液，不应有气泡。避免溶血，抗凝要充分。采血后宜在1小时内完成检测，置4℃冰箱保存不应超过4小时，-20℃下可放置2周，-70℃下可放置6个月。本试验较凝血时间敏感，重复性好，故作为出血性疾病的常规筛选试验。水浴温度控制在（37±1）℃，过高或过低均会影响结果。由于不同来源、不同制备方法的组织凝血活酶对结果影响很大，造成结果可比性很差，特别影响判断治疗效果。

【参考文献】

[1]刘锦峰.仪器法测定凝血酶原时间的标准化[J].武警后勤学院学报(医学版),2004,13(2):109-111.

[2]刘永兰,李清芹.全自动血栓与止血分析仪配套凝血酶原时间测定试剂与国产手工试剂的比较[J].医学检验与临床,2005,16(3).

[3]叶朗.血浆凝血酶原时间测定的方法比较[J].海南医学,2003,14(3):56-56.