多种抗生素及联合应用对耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性研究

多种抗生素及联合应用对耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性研究

魏强英

平江县第一人民医院静脉配置中心西药学414500

【摘要】目的分析多种抗生素及联合应用对耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌（KPN）的体外抗菌活性研究。方法选取20株分离自2015年1月~2017年1月我院临床住院患者中的多重耐药KPN菌株，采用改良Hodge实验检测其是否产碳青霉烯酶，采用抗菌药物敏感实验测定多黏菌素对各菌株的最低抑菌浓度（MIC），进一步采用棋盘法对多黏菌素MIC中介的KPN检测多种抗身素联合应用的MIC值，计算∑FIC值并对协同作用进行判断。结果5株对多粘菌素药敏实验中介的菌株单独用药试验结果表明：1株对CN敏感，4株对CN耐药；5株均对IPM、FEP以及SCF耐药；在本研究所使用的联合用药4种组合中，以SCF+IPM具有显著的协同作用，其余均未见。结论多种抗生素及联合应用对耐碳青酶烯酶类肺炎克雷伯菌，具有较好的协同作用，因此能够对提高临床疗效，有效降低药物不良反应、延缓细菌耐药性具有重要临床意义。

【关键词】碳青霉烯酶；肺炎克雷伯菌；多种抗生素及联合应用；体外抗菌活性

[Abstract]objective：toanalyzetheantimicrobialactivityofKPN（KPN）byvariousantibioticsandcombinedapplications.Methodsselect20strainsisolatedfromfromJanuary2015toJanuary2017inourhospitalclinicalpatientswithmultipledrugresistanceintheKPNstrains，modifiedHodgeexperimenttotestwhethertheproducecarbonalkeneenzyme，usingantibacterialdrugsensitiveexperimentdeterminationslimemoldselementofmanydifferentstrainsofminimumbacteriostaticconcentration（MIC），bythemethodofboardandmoreslimemoldselementMICmediationKPNtestingavarietyofcombinedMICvalueoftheresistanceofthebodyelement，∑FICvalueandthecalculatedforjudgment.Resultstheresultsshowedthat1plantwassensitivetoCNand4wereresistanttoCN.5strainsofIPM，FEPandSCFresistance；Inthecombinationof4combinationsusedinthisstudy，SCF+IPMhassignificantsynergisticeffectandtherestisnotseen.Conclusionmanykindsofantibioticsandthejointapplicationofresistancetocarbonblackenzymeenzymespneumoniaklebsiellabacteria，hasgoodsynergy，canthereforetoimprovetheclinicalcurativeeffect，reducetheadversedrugreactions，slowbacterialdrugresistancehasimportantclinicalsignificance.

[Keywords]carbapenase；Klebsiellapneumoniae；Multipleantibioticsandcombinedapplications；Invitroantibacterialactivity

随着临床上对于抗生素类药物的广泛使用，使得院内感染致病菌的抗药效也随着提升，严重制约了患者的恢复和健康。其中最具有代表性也是最常见的就是肺炎克雷伯菌，尤其是近年来随着碳青霉烯类药物治疗多药耐药肺炎克雷伯菌的滥用，使得耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌的呈现大比例升高[1]。为此本文试就利用多种抗生素及联合应用对耐碳青酶烯酶类肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性展开研究观察，现报告如下。

1材料与方法

1.1菌株

连续收集本院2014年1月-2017年1月临床分离的18株非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。上述菌株提取自该时间段内本院住院患者标本，其中咽拭子2份、导管1份、尿液1份以及痰液14份。

1.2仪器与试剂

法国生物梅里埃公司生产的VITEK-32AUTO微生物系统及鉴定卡、美国bio-rad公司生产的水平电泳仪和凝胶成像分析系统、中国大连保生生物生产的PCR仪、英国Oxoid公司生产的抗菌药物纸片M-H琼脂、中国安图生物公司生产的哥伦比亚血平板、日本辉瑞制药提供的多粘菌素、中国深圳信立泰药业有限公司生产的庆大霉素和头孢吡肟、中国辉瑞制药公司生产的头孢哌酮-舒巴坦以及美国MerckSharp＆DohmeCorp生产的亚胺培南。

1.3方法

1.3.1菌株鉴定

本研究严格按照全国临床检验操作的要求和步骤进行采集标本的细菌分离鉴定流程进行，同时使用法国生物梅里埃公司生产的VITEK-32AUTO微生物系统及鉴定卡完成鉴定。

1.3.2药敏试验

本研究按照第25版的CSLI操作标准以及药品说明书配置相应的抗菌药物和肉汤，并按照宋国蓉[2]等文献的标准采用K-B纸片扩散法对多粘菌素对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度进行判定。其中质控菌株选用的是大肠埃希菌ATCC25922，最终筛选出5株对多粘菌素药敏实验中介的菌株。对挑选出的菌株分别进行单药最低抑菌浓度和联合用药最低抑菌浓度测定。其中单药分别是庆大霉素（CN）、亚胺培南（IPM）、头孢哌酮-舒巴坦（SCF）以及头孢吡肟（FEP）；而联合用药采用的是微量棋盘法，并将单药进行以下组合：CN+IPM、多粘菌素（CST）+IPM、SCF+IPM和FEP+IPM。

1.3.3改良Hodge试验

将大肠杆菌ATCC25922的菌悬液利用无菌生理盐水调整到0.5麦氏浊度，再按1：10稀释后接种到M-H琼脂平板，待5～10min后将厄他培南纸片置于平板中心，并用接种环挑取3～5个待测菌株自纸片边缘向平板边缘划线，长度以2.0～2.5cm为宜。35°孵育16～20h。观察结果，若接种线与大肠埃希菌ATCC25922的抑菌环出现朝向抑菌圈内增强生长现象则视为阳性，否则视为阴性。

1.4观察标准及判定

联合用药的药敏指数（∑FIC）=FIC-A+FLC-B。其中FIC-A表示当B药物存在时，A药物的最低抑菌浓度与单独使用A药物的最低抑菌浓度比值，FLC-B表示当A药物存在时，B药物的最低抑菌浓度与单独使用B药物的最低抑菌浓度比值。其中∑FIC≤0.5表示两种药物具有协同作用，∑FIC＞0.5但≤4表示无关作用，∑FIC＞4表示拮抗作用。

2结果

2.1单药最低抑菌浓度测定结果

5株对多粘菌素药敏实验中介的菌株单独用药试验结果表明：1株对CN敏感，4株对CN耐药；5株均对IPM、FEP以及SCF耐药；结果见表1。

表1单药最低抑菌浓度测定结果

3讨论

由于临床以及患者对抗生素类药物以及免疫抑制剂的滥用，导致临床上具有多重耐药性的肺炎克雷伯菌成为当前致死性院内感染的重要病原菌，尤其是容易使患者出现或导致菌血症以及医院获得性肺炎等疾病，尤其当重症监护病房患者罹患并发生爆发流行后，极易引起患者死亡，如何降低或有效控制此类病菌是目前临床治疗和合理用药亟待解决的关键问题，因此本研究的开展具有针对性和指导性。

研究[3]表明耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制具有多样性，其中最重要的机制便是其能够水解碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC），而KPC对目前临床几乎所有的碳青霉烯类以及β-内酰胺类药物，从而导致药物失效。多黏菌素的药理机制是通过对细胞外膜磷脂的破坏，从而达到提高细胞壁通透性并导致细胞死亡的杀菌作用，临床也证实多数革兰氏阴性杆菌对多粘菌素敏感。

相关临床研究[4]表明通过两种或两种以上的抗生素联合应用能够显著提高药物的抗菌活性。这在本研究中也得到了证实，本研究表2结果显示SCF+IPM具有显著的协同作用，我们分析这可能是由于作为β-内酰胺酶抑制剂的舒巴坦，一旦被耐碳青霉烯酶的水解酶水解后，会与其发生不可逆的复合反应，从而达到抑制其水解酶活性的作用[5]，促使β-内酰胺类抗菌药物和作用靶位青霉素结合，使其正常发挥杀菌作用，因此表现出较为明显的协同作用。

综上所述，多种抗生素及联合应用对耐碳青酶烯酶类肺炎克雷伯菌，具有较好的协同作用，因此能够对提高临床疗效，有效降低药物不良反应、延缓细菌耐药性具有重要临床意义。

参考文献：

[1]赵晓杰，邓丽华，施德仕，等.耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究[J].中华医院感染学杂志，2015，25（17）：3851-3853.

[2]宋国蓉，吴晓燕，冯雪君.耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌体外抗菌活性分析[J].中国微生态学杂志，2016，28（5）：524-527.

[3]曹慧玲，舒钊彻，杨琳，等.亚胺培南与舒巴坦联合应用对多重耐药肺炎克雷伯菌的体外试验研究[J].实用医学杂志，2016，32（3）：475-478.

[4]靳颖，王俊妨，刘冀琴，等.产KPC酶肺炎克雷伯菌9株的药敏试验结果分析[J].中国感染与化疗杂志，2015，15（3）：257-259.

[5]吕继芳，郑焙文，张静，等.耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和耐药基因分析[J].中国抗生素杂志，2016，41（5）：356-361.