肠缺血再灌注损伤对Rho激酶影响及法舒地尔保护研究

肠缺血再灌注损伤对Rho激酶影响及法舒地尔保护研究

王震东

王震东

（鄂尔多斯市中心医院内蒙古鄂尔多斯017099）

【中图分类号】R45【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）08-0052-02

1.引言

肠缺血后再灌注（I/R）损伤是指在肠缺血一段时间后又突然恢复供血而出现组织器官损伤，常见于创伤性休克、外科手术、器官移植、烧伤、冻伤和血栓等血液循环障碍。目前研究发现肠缺血后再灌注（I/R）自由基生成增多，而Rho激酶的活化能够诱导氧自由基的生成以及法舒地儿为Rho激酶抑制物。近年来研究发现肠缺血还不足以导致组织损伤，而是在缺血一段时间后突然恢复血供再灌注后，出现肠细胞功能代谢障碍及结构破坏加重。由此，肠I/R损伤的发生机制及防治一直是近年国内外学者研究的重点。

2.材料与方法

2.1一般资料

实验动物雄性健康SD大鼠120只，体重250～300g。

2.2仪器与试剂

盐酸法舒地尔注射液购自天津红日药业股份有限公司（批号：1010251)；CytC免疫组化抗体购自SANTACRUZ公司（批号：k1069）；caspase-3免疫组化抗体购自BioworldTechnology公司（批号：360749），二抗及DAB显色剂由北京中杉公司提供。

2.3样品的前处理

无创小血管夹夹闭健康雄性SD大鼠肠系膜上动脉(superiormesentericartery，SMA)1h、再灌注2h，建立肠缺血再灌注损伤（I/R）模型作为实验组研究对象。其中，法舒地尔干预组为建立I/R模型前20min加入法舒地尔浓度分别为7mg/kg，11mg/kg，15mg/kg进行预处理。

2.4实验方法

用实验分为三组：正常对照组、（I/R）模型组、法舒地尔干预组。运用Westernblot法分别检测缺血1h，灌注2h灌注3h的Rho激酶功能活化标志物MYPT1的磷酸化水平。测定小肠组织中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性，NF-κB，髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性，白细胞浸润程度，ATP合成，羟自由基以及血清中肌酸激酶-B(creatinekinase-B，CK-B)水平。此外，光镜下观察病理石蜡切片肠组织，如肠粘膜细胞，肠粘膜绒毛的血管的形态学改变。

2.5统计学处理

实验结果的数据均用SPSS15.0统计软件包进行统计学处理，统计方法采用方差分析、卡方检验（P<0.05）。

3.结果

肠缺血再灌注(I/R)损伤

大鼠镜下肠缺血再灌注损伤形态学改变

4.讨论

研究发现肠缺血再灌注损伤主要因素不是缺血本身，而是恢复血液供应后，过量的自由基攻击这部分重新获得血液供应的组织内的细胞造成的，并证实肠缺血再灌注I/R不仅可以引起肠道局部损害，严重时还能因为肠粘膜屏障的破坏使得肠内细菌、内毒素向肠外组织器官移位，进而导致全身炎症反应等全身性并发征，从而导致多脏器功能不全综合征以及多脏器进行性衰竭[3]。

黄嘌呤氧化酶（xanthineoxidase，XO）及其前身为黄嘌呤脱氢酶（xanthinedehydrogenase，XD），二者主要存在毛细血管内皮细胞内。正常时XD占90%，XO只占10%。

由于缺血组织出现O2?-，OH?的清除能力障碍，当自由基过量产生时，人体的防御机制遭到破坏，机体则不能迅速排除过量的自由基，因此它们成为有害物质进而促使损伤。

中性粒细胞被激活时耗氧量显著增加，其摄入O2的70%～90%在还原型辅酶Ⅱ氧化酶（NADPHoxidase）和还原型辅酶Ⅰ氧化酶（NADHoxidase）的催化下，接受电子形成氧自由基，以杀灭病原微生物。另外组织缺血可激活补体系统，或经细胞膜分解产生多种具有趋化活性的物质，如C3片段、白三烯等，吸引、激活中性粒细胞。再灌注期间组织重新获得氧供应，激活的中性粒细胞耗氧显著增加，产生大量氧自由基，称为呼吸爆发（respiratoryburst）或氧爆发（oxygenburst），可损伤组织细胞。[5]

此外，有研究发现低氧可能是通过激活Rho/Rho激酶信号通路，Rho激酶信号通路诱导自由基的产生，由此再次形成更大量的自由基，加重组织的损伤。

5.存在问题与进展

综上所述，肠缺血后再灌注（I/R）损伤后，Rho激酶引发氧化应激，诱导生成氧自由基，促进炎细胞黏附，损伤血管内皮，引发动脉粥样硬化与血栓形成等症状。临床上应用Rho激酶抑制剂法舒地尔能有效缓解肠的损伤。

但是，在了解肠缺血后再灌注（I/R）损伤的同时，目前仍存在一系列临床上的问题需要解决：诸如（1）小肠缺血再灌注导致损伤的程度才决定用药（2）肠缺血再灌注肺损伤机制复杂，其发生和发展与Rho激酶的激活的关系，但在实验设置时还有其他的因素仍需进一步研究排除（3）法舒地尔预处理对肠缺血再灌注导致的肺损伤有保护作用，探讨这种保护作用与Rho激酶的抑制的关系。

结合肠缺血后再灌注（I/R）损伤与Rho激酶的关系和临床病理指标进行分析，可以以法舒地尔作为更准确提供肠缺血后再灌注治疗的依据。

【参考文献】

[1]ElbirtKK，BonkovskyHL.Hemeoxygenase:recentadvancesinunderstandingitsregulationandrole[J].ProcAssocAmPhysicians，1999，111(5):438-447.

[2]宋路线徐迎新.大黄对小肠上皮细胞ICE基因mRNA表达水平的影响[J].中国危重病急救医学.

[3]SuttnerDM，SridharK，LeeCSetal.ProtectiveeffectstransientHO-1overexpressiononsusceptibilitytooxygentoxicityinlungcells[J].AmPhysiolLungCellMolPhysiol，1999，276(20):L443-L451.

[4]MainesMD.Thehemeoxygenasesystemanditsfunctionsinthebrain[J].CellMolBiol，2000，46(3):573-585.

[5]DoreS，GotoS，SampeiKetal.HO-2actstopreventneuronaldeathinbrainculturesandfollowingtransientcerebralischemia[J].Neuroscience，2000，99(4):587-592.

[6]张延龄.在鼠小肠缺血再灌注损伤中FK506和环孢菌素A抑制内皮素-1的生成[J].国外医学.创伤与外科基本问题分册，1999，20(3):187.