不同方法检测肠道病毒71型l9M抗体在手足口病诊断中的意义

不同方法检测肠道病毒71型l9M抗体在手足口病诊断中的意义

朱萍

湖南省湘西州龙山县人民医院湖南龙山416800

【摘要】目的：观察分析不同方法检测肠道病毒71型（Humanenterovrus71，EV71）免疫球蛋白M（ImmunoglobuIinM，IgM）抗体在手足口病（HFMD）诊断中的意义。方法：选取我疾控中心2014年2月～2016年2月收集的80例手足口病儿作为观察组，选取同时期80例非手足口病患儿作为对照组，采用免疫层析法（ICA）、酶联免疫吸附法（ELISA）对肠道病毒71型IgM抗体进行检测。结果：80例手足口病患儿中，ELISA检出EV71lgM抗体阳性率20.00％，ICA检出阳性率21.25％，ICA、ELISA在对照组患儿中均未出现阳性（P<0.05）；ICA和ELISA检出阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：在手足口病诊断中，可通过ELISA、ICA法对肠道病毒71型IgM抗体检查确诊，但检测结果为阴性者，不能排除手足口病可能性，需密切结合临床表现进行诊断。

【关键词】手足口病；肠道病毒71型；IgM抗体；ELISA；ICA

手足口病（HFMD）是儿科临床常见疾病之一，是一种传播速度较快的传染病，其发病原因与肠道病毒有关，常见的肠道病毒为柯萨奇病毒A16型（CoxA16）、肠道病毒71型（EV71）手足口病表现为口痛、低热、厌食、手、足、口腔等出现小疱疹等，治疗不及时或不当，可引起肺水肿、心肌炎、呼吸衰竭等并发症，严重时危及患儿生命[1]。肠道病毒71型感染是导致手足口病患儿死亡的主要原因之一，对肠道病毒71型进行检测，可帮助临床医师掌握患儿病情，为疾病早期诊断、治疗提供依据，降低并发症发生率[2]。本文收集了80例手足口病患儿和80例非手足口病患儿临床资料，探讨酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫层析法（ICA）对EV71型IgM抗体检测的意义，报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

收集我中心2014年2月～2016年2月80例手足口病患儿临床资料，将其作为观察组，男性47例，女性33例，年龄6个月～6岁，平均年龄（3.4±0.3）岁；病程1-7d，平均病程（2.5±1.2）d，结合临床症状，符合手足口病诊断标准。选取同时期我中心排除的手足口病患儿80例作为对照组，男性48例，女性32例，年龄7个月～7岁，平均年龄（3.2±0.4）岁；病程1～6d，平均病程（2.6±1.3）d。本组研究经我院伦理委员会批准，经患儿家长签署知情。

1.2试剂

由北京万泰生物药业股份有限公司提供相关试剂，包括EV71IgM抗体ICA检测试剂盒，ELISA检测试剂盒。

1.3评价指标

全部患儿清晨空腹接受血液采集，采集静脉外周血2ml，常规方法离心后分离血清标本，用于EV71lgM抗体检测。（1）ELISA法。严格按照说明书进行操作，取标准品和待测标本50μL，置入反应孔，加入50μL生物素，标记抗体，振荡后均匀混合，在37℃环境下孵育1h。去除孔内液体，采用洗涤液洗涤4次，加入80μL亲和链霉素-辣根过氧化物酶，振荡后均匀混合，在37℃环境下孵育半个小时，洗涤液洗涤4次，加入50μL底物A、B，振荡混合，37℃下孵育15min。加入终止液50μL，450nm波长处，对各孔光密度值（0D值）进行测定，根据标准曲线计算出待测标本EV71IgM抗体水平，并根据说明书，判断出阳性或阴性。（2）ICA法。严格按照试剂盒说明书操作，结合判断标准，若对照区出现条带，测试区未出现，判断为阴性；测试区和对照区均出现条带，判断为阳性；对照区和测试区均未出现条带，或测试区出现条带，对照区未出现，说明测试无效，需重新检测。

1.4统计学方法

详细收集两组患儿研究所得数据，在SPSS19.0统计学软件包中对计量资料、计数资料处理分析，前者通过（x±s）描述，后者采用（n％）表示，正态分布数据经t检验，组间数据比较经卡方检验，P<0.05，则表示差异具有统计学意义。

2结果

在80例手足口病患儿中，ELISA检出EV71IgM抗体阳性者16例，阳性率为20.00％；非手足口病患儿，ELISA未检出阳性，两组患儿比较差异显著（P<0.05）。ICA检出EV71IgM抗体阳性者17例，阳性率为21.25％，非手足口病患儿中，ICA未检出阳性，两组患儿EV71tgM抗体阳性率差异具有统计学意义（P<0.05）。ICA和ELISA检出EV71IgM抗体阳性率比较无明显差异（P>0.05），详情见表1。

3讨论

手足口病是小儿常见传染病，感染后存在2-7d潜伏期，感染初期对病毒具有一定的免疫力，存在隐性感染率。虽然引起小儿手足口病的病毒包括CA16和EV71，但EV71在手足口病病原学中占有重要的地位。EV71病毒感染性非常强，在短期内科导致大范围流行，无法控制病情，给临床诊断、治疗带来了挑战。目前临床对手足口病缺乏特效治疗方案，早期诊断和治疗可有效预防和控制手足口病发生。因此早期检出EV71感染情况，并筛查出阴性感染，可帮助医师制定科学合理的治疗方案，减轻患儿痛苦，改善预后[3]。

过去病原学检查是诊断手足口病的金标准，但此方法对实验技术、要求较高，检测周期长，灵敏度较低，操作繁琐，可能延误病情，影响临床诊断和治疗。随着临床检测技术的发展，逆转录聚合酶链反应（PT-PCR）是诊断EV71感染的常见方法，但此方法假阴性、假阳性事件较多；荧光定量PCR（FQ-PCR）对EV71检查，可降低假阴性率和假阳性率，提高检查敏感性和特异性，但FQ—PCR检查仪器昂贵，对检查环境要求高，在基层医疗机构应用受限[4]。

免疫层析法（ICA）是近几年兴起的一种快速诊断技术，其检测原理为：将特异抗体固定在硝酸纤维素膜上，将其浸入样品中，样品中相应抗原与抗体发生特异性结合，表现出一定颜色，进而实现特异性免疫诊断。酶联免疫吸附法（ELISA）是酶免疫测定技术中应用最广的，操作简便，对检查设备、环境要求不高，合适基层医院推广。从本组结果来看，ICA对观察组

患儿EV71。lgM抗体检出阳性率为21.25％，ELISA检出阳性率为20.00％，均高于对照组患儿0.00％（P<0.05），且ICA和ELISA检出阳性率比较无明显差异，说明两种方法均能检出EV71型ZgM抗体阳性，为临床疾病诊断、治疗提供专业参考。但针对检出结果为阴性者，应结合临床症状进行诊断，提高诊断准确率，积极治疗，改善预后。

参考文献：

[1]曾嫦，林祥伟，黄宇泽等．汕头市手足口病肠道病毒71型IgM抗体水平检测分析[J].中国校医，2014，28（9）：685-686，688．

[2]杜昆.不同方法检测肠道病毒71型l9M抗体在手足口病诊断中的意义[J].检验医学与临床.2014（3）：328-329

[3]潘锦华.罗建辉.杨国清等.肠道病毒71型IgM抗体在手足口病诊断中的临床应用价值研究[J].实验与检验医学.2015.（1）：72-74

[4]彭兰芬.张少丰.付文金等.肠病毒EV71-IgM抗体与核酸检测在手足口诊断中的价值[J].中国热带医学，2011.11（3）274-275