两种不同模式洗板机对ELISA法检测HBsAg结果比较

两种不同模式洗板机对ELISA法检测HBsAg结果比较

徐志强钱迎芬肖晓晨

徐志强钱迎芬肖晓晨

（江苏昆山市第四人民医院检验科江苏昆山215331）

【摘要】目的比较两种不同模式洗板机（水平式和立式）对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板技术对检测结果的影响。方法对61例临床确诊为HBsAg阴性和31例临床确诊为HBsAg阳性的标本，经随机排列，用同一批号HBsAg试剂进行检测，分别用手工洗板、anthosfluido水平式洗板机、基波全自动快速立式洗板机洗板，后由酶标仪判读结果（OD值≥0.105为阳性），对阴性数、阳性数进行分析。结果anthosfluido洗板机洗板5次，假阳性达12例,与标本原始结果相比较（χ2=6.93，p<0.01）有差异；基波全自动快速立式洗板机洗板1次，假阳性1例,与标本原始结果相比较（χ2=0.51，p>0.05）无差异；手工洗板5次，假阳性4例，与标本原始结果相比较（χ2=2.12，p>0.05）无差异。两种模式洗板机洗板方式对ELISA法检测HBsAg结果（χ2=7.69，p<0.01）有差异。结论在ELISA方法检验当中，立式洗板机比水平式洗板机在洗板时增加了蒸馏水冲洗和脱水的过程，减少了污染和残留，结果更加可靠。

【关键词】水平式洗板机立式洗板机ELISAHBsAg

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）10-0052-02

酶联免疫吸附试验(ELISA)来做乙型肝炎表面抗原(HbsAg)定性实验是目前实验室最经济、最普遍的试验诊断方法[1]。ELISA操作简单，灵敏度和特异性高，但在操作中影响结果的因素也很多。涉及标本的收集、保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面[2]，尤其洗板是一项极重要的环节，决定着本次实验能否成功，洗板次数不够或洗涤不干净会造成假阳性的出现[3]，洗板次数过多容易将结合的抗原或抗体洗掉造成假阴性的出现，因此洗板的充分性和洗板后的残留是关键，将直接影响显色[4]。现在市面上有两种洗板机，一种是常规方式板块平放的水平式洗板机，一种是板块竖放的立式洗板机。本文对这两种洗板模式的洗板机洗板对ELISA检测结果的影响进行分析，现报道如下：

1资料与方法

1.1资料

HBsAg阴性标本：61例临床确诊为HBsAg阴性的非脂血、无溶血的健康成年人静脉血清标本；HBsAg阳性标本：31例临床确诊为HBsAg阳性的非脂血、无溶血的成年人静脉血清标本。

1.2试剂

乙型肝炎表面抗原（酶联免疫法）试剂盒由英科新创（厦门）科技有限公司生产；HBsAg室内质控由康彻思坦生物提供。

1.3仪器

anthosfluido8孔水平式洗板机由奥地利生产；基波全自动快速立式洗板机由郑州基波新科技有限公司生产；TECANMagellanforF50酶标仪由瑞士帝肯生产。

1.4方法

对61例临床确诊为HBsAg阴性和31例临床确诊为HBsAg阳性的标本，经随机排列，用同一批号HBsAg试剂进行检测，检测过程中，严格按照试剂盒说明书操作。分别用手工洗板、anthosfluido水平式洗板机、基波全自动快速立式洗板机洗板，后由酶标仪判读结果（OD值≥0.105为阳性），对阴性数、阳性数进行分析。

1.5统计学方法

采用SPSS13.0统计软件。

2结果

2.1标本原始结果与不同洗板方式对ELISA法检测HBsAg结果比较详见表1。anthosfluido洗板机洗板5次，假阳性达12例；基波全自动快速立式洗板机洗板1次，假阳性1例；手工洗板5次，假阳性4例。由表1可看出基波立式洗板机洗板的假阳性要少；anthosfluido水平式洗板机与标本原始结果相比较有差异（χ2=6.93，p<0.01）；基波立式洗板机（χ2=0.51，p>0.05）和手工洗板（χ2=2.12，p>0.05）与标本原始结果无差异。

表1标本原始结果与不同洗板方式对ELISA法检测HBsAg结果比较

3讨论

ELISA法测定中影响因素较多[5]，在试验中，洗板的目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯对蛋白质的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，而在洗涤时应将这些非特异性吸附的干扰物质洗涤下来[6]。如果洗涤不充分，残留在微孔板上的酶标抗体中的酶会使后来加的无色底物液变成有色产物产生了非特异性显色反应，出现假阳性的结果。因此，洗板是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视。

洗涤有手工洗板和洗板机洗板两种。手工洗板是在每次温育后，将反应液吸出或甩干，然后用缓冲液洗涤2～3次，拍干，洗板机洗板是将上述手工操作改由洗板机进行。使用水平式洗板机的缺点是每次洗板后不能拍干，有较多的液体残留，洗涤不彻底，特别在最后一次，如有酶结合物的非特异性吸附，将使空白值升高，非特异性显色增高，造成“花板”现象，洗板过度会造成部分与固相结合的抗原脱离，从而影响检测的灵敏度，使标本检测的OD值降低，这样会引起OD值正好在“灰区”或弱阳性结果的漏检[7]；有时血清标本可能析出不完全，有纤维蛋白的缠绕或因盐类沉积，经常堵塞清洗头，使之清洗不到位或使清洗液溢出，造成交叉污染[8]。立式洗板机采用立式反冲清洗原理，直接将废液排入指定容器，避免了盐类沉积，解除了堵孔问题；采用离心脱水原理对微孔板进行脱水，解决了微孔板内液体残留的问题。从而一次性全自动快速连续的完成了水平式洗板机所需用的二步工作,不仅缩短了清洗时间，提高工作效率，而且无须人工拍板，极大提高了工作人员的安全性。

有文献报道：洗完板时，应充分扣干反应孔[9]，每孔洗液残余量<3μL时,才能保证酶标检测结果的正确性[10]。本次实验中，作者特意最后没有把水平式洗板机洗的板块扣干，导致假阳性数量比往常要多；三种洗板方式假阳性的OD值均稍微高出临界值（C.O.），在日常工作中，对于稍微高出临界值（C.O.）的结果我们会结合临床和其它乙肝四项作出最终结果的判断。

参考文献

[1]谭立明.ELISA法检测的影响因素及其对策[J].实验与检验医学,2013,31(4):300.

[2]王璐．ELISA法检验乙肝标志物影响因素的探讨[J].医学理论与实践,2012,25(4):451．

[3]王静.ELISA快速法检测HBsAg时手工洗板和洗板机洗板的结果比较[J].中国医药导报,2010,7(9):69.

[4]刘守珠.酶联免疫吸附实验(ELISA)测定的影响因素探讨[J].健康必读,2012,11(9):97.

[5]徐君霞.ELISA两步法两种洗板方法检测HBsAg结果的分析[J].医学信息,2012,25(12):255.

[6]刘辉,李山,潘润存.免疫学检验[M].人民卫生出版社,2010:110.

[7]卢振，汪海.酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒标志物的影响因素及存在问题[J].检验医学与临床,2011,8(2):256.

[8]王惠萍.医用洗板机在操作应用中的几点体会[J].吉林医学,2010,31(2):204.

[9]徐新蓉,龚国富,马萍.ELISA检测过程中影响因素及防控措施分析[J].国际检验医学杂志,2013,34(1):112～113.

[10]窦广刚,高纯.汇松PW—960型全自动酶标洗板机的临床评估.实用医技杂志,2011,18(1):84.