高乌甲素内控质量标准研究

高乌甲素内控质量标准研究

袁才英1翟登辉2

1.甘肃兰药药业有限公司甘肃兰州730070；2.广东药科大学中药学院广东广州510006

摘要：目的修订高乌甲素内控质量标准。方法依据文献［1］［2］测定高乌甲素含量，对含量和熔点范围进行修订。结果高乌甲素含量（按干燥品计算）提高至不得少于95.0%，熔点修订为“不得低于215℃”。结论修订后的高乌甲素内控质量标准，不仅较好的控制中间体提取工艺，而且解决了氢溴酸高乌甲素原料存在的问题，达到新版氢溴酸高乌甲素公示标准的要求。

关键词：高乌甲素；内控质量标准；水解产物；高乌头

毛茛科植物高乌头（AconitumsinomontanumNaKai.）具有祛风、除湿和散瘀消肿等功效，早先用于抗风湿。高乌甲素（Lappaconitine）系从高乌头中分离得到的一种二萜类生物碱—拉巴乌头碱［3］，是生产非成瘾性镇痛药氢溴酸高乌甲素的中间体。由于氢溴酸高乌甲素原料存在：疗效个体差异性较大；原料纯度较差；生产提取工艺落后，生产周期长；原工艺所用辅料不能有效除去有些生物碱杂质，并且毒性较大，对工人健康有害；有些工艺参数制定不合理，导致原料在生产和贮存过程中容易变色；原料提取率低等问题。本实验通过修订高乌甲素内控质量标准，优化中间体提取工艺，不仅能够有效控制中间体质量，而且提高了氢溴酸高乌甲素纯度，达到新版氢溴酸高乌甲素公示标准的要求。

1仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪：日本岛津LC-10ADVP泵，SPD-M10AVP二极管阵列检测器，CLASS-VP/LC色谱工作站。

1.2试药高乌甲素（甘肃兰药药业有限公司）；氢溴酸高乌甲素对照品（中国药品生物制品检定所，批号100289-201013，含量95.7%）；地西泮（国家麻醉品实验室，批号1230-9601）。

2性状

2.1本品按干燥品计算，含拉巴乌头碱C32H44N2O8不得少于95.0%；本品为白色或类白色结晶或结晶性粉末；无臭、味苦；本品几乎不溶于水，微溶于醚、醇，易溶于三氯甲烷。

2.2熔点：本品的熔点（中国药典2010年版二部附录ⅥC）不得低于215℃，熔融时同时分解。

2.3比旋度：精密称定本品适量，加三氯甲烷溶解并稀释成每1ml中含7mg的溶液，依法测定（按《中国药典》2010年版二部附录ⅥE），比旋度为+26O~+29O。

3鉴别

3.1取本品水溶液或稀盐酸溶液，加1滴碘化铋钾试液，产生桔红色沉淀。

3.2取本品适量，加甲醇制成每1ml中含20μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录ⅣA）测定，在224nm、252nm、311nm的波长处分别有最大吸收。

3.3取本品适量精密称定，加甲醇制成每1ml中含4mg的溶液，按薄层色谱法（按《中国药典》2010年版二部附录ⅤB）试验，吸取上述溶液20μl，点于硅胶G薄层板上，以甲醇-二氯甲烷-二乙胺（6∶14∶0.5）为展开剂，展开后晾干，在254nm紫外灯下观察，如显杂质斑点，不得多于1个。

4检查

4.1干燥失重：取本品，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得过1.0%（中国药典2010年版二部附录8L）。

5含量测定［1］［2］

照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD）测定。

5.1色谱条件和系统适用性试验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.1mol/L磷酸二氢钠-甲醇（28﹕72）为流动相，检测波长为252nm。理论板数按氢溴酸高乌甲素峰计算应不低于1500，氢溴酸高乌甲素和内标物质峰的分离度应符合要求。

5.2内标溶液的制备：取地西泮，加甲醇制成每1ml中含25mg的溶液，作为内标溶液。

5.3对照品溶液的制备：取氢溴酸高乌甲素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释成每1ml中含1mg的溶液，精密量取2ml与内标溶液1ml置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

5.4供试品溶液的制备：取本品适量（约40mg），精密称定，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml与内标溶液1ml置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

5.5测定法：取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按内标法以峰面积计算，测定值除以转盐系数（1.17），即得。

6讨论

6.1采用文献方法直接测定高乌甲素含量，测定结果良好，高乌甲素中间体含量（按干燥品计算）提高至“不得少于95.0%”（未与非水滴定法测定结果做比对试验），熔点由原来的“不得低于205℃”修订为“不得低于215℃，熔融时同时分解”。

6.2文献报道［4］从高乌头工业分离髙乌甲素后的“下脚料”中，共分得27个单体成分，本人认为个别单体成分可能是提取中酸化和碱化操作过程中产生的水解产物，比如N-去乙酰髙乌甲素等。

6.3通过考察甘肃永登县和青海互助县、平安县、乐都县、民和县等地所产的高乌头的生长、分布以及产量的调查，对上述各产地采集到的样品依照文献方法［5］进行高乌甲素的含量测定，结果分别为：9.90‰、8.09‰、7.48‰、10.51‰、13.55‰。为公司收购高质量的中药材高乌头和按照GAP要求选择种植基地提供依据，进而为制定高乌头的指纹图谱，形成从中药材中提取原料药的产业化生产提供试验依据。

6.4国家药典委员会于2015年5月14日公示了氢溴酸高乌甲素新质量标准（征求意见稿），对原标准进行了极大的提升，原生产工艺粗放式操作提取的中间体产品，不能生产出符合新公示标准的氢溴酸高乌甲素。本实验所有样品［6］来自于氢溴酸高乌甲素提取工艺优化改进，新型提取设备使用后的中间体产品，采用HPLC法测定含量，结果达到预期目标。高乌甲素内控质量标准修订后，能够很好地控制生产过程和保证产品质量，说明本公司氢溴酸高乌甲素提取工艺研究取得突破性进展。

参考文献：

［1］袁才英，位海强，杨青，等.HPLC法改进氢溴酸髙乌甲素含量测定方法［J］.广东药学，2003，13（2）：7-9.

［2］王践玲，袁才英，于武高，等.氢溴酸髙乌甲素质量标准研究［J］.内蒙古中医药，2013，32（13）：109-110.

［3］蒋山好，朱元龙，朱任宏.中国乌头的研究ⅩⅩ.赣皖乌头的研究［J］.药学学报，1982，17（4）：288-292.

［4］彭崇胜，王锋鹏，王建忠，等.两个新的双去甲二萜生物碱高乌宁碱丁和高乌宁碱戊的结构研究［J］.药学学报，2000，35（3）：201-203.

［5］袁才英，位海强，杨青，等.高乌头质量标准的研究［J］.中草药，2002，33增刊：81-82.

［6］高晓燕，袁才英.氢溴酸髙乌甲素提取工艺简报［J］.中国医药指南，2013，11（12）：475.