HPLC法测定注射用头孢唑肟钠中聚合物的含量

HPLC法测定注射用头孢唑肟钠中聚合物的含量

李明杰路华美封春香张明法

李明杰路华美封春香张明法（山东罗欣药业股份有限公司276017）

【摘要】目的：建立测定头孢唑肟钠中聚合物的含量的高效液相色谱法。方法：：色谱柱为葡聚糖凝胶G-10柱，流动相A为pH7.0的0.025mol/L磷酸盐缓冲溶液；流动相B为水,流速约为1.5ml/min,检测波长为254nm。结果：头孢唑肟钠在8.048～72.43μg/ml浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。结论：该法简便、准确、灵敏、重现性好，可满足头孢唑肟钠中聚合物的含量的质量控制需要。

【关键词】HPLC法头孢唑肟钠聚合物含量

头孢唑肟(ceftizoxime)是由日本藤泽药品研究所开发的新型第三代头孢菌素，具有广谱、耐酶、高效与低毒等优点，临床疗效好，副作用少，对多种革兰阳性菌和革兰阴性菌产生的β-内酰胺酶(包括青霉素酶和头孢菌素酶)稳定,在组织和体液中分布良好,特别是在肾、前列腺、胆汁、胆囊和腹水中分布可达很高浓度且可通过血脑屏障，临床主要用于呼吸道感染、尿路感染、腹腔感染、盆腔感染、败血症、皮肤软组织感染、骨和关节感染、脑膜炎等，对青霉素族、氨基糖苷类及大环内酯类以及某些头孢菌素药物不能控制感染时，改用本药仍有效。

1仪器与试剂

1.1仪器

梅特勒XS105电子天平，岛津SPD-20A高效液相色谱仪，大连依利特葡聚糖凝胶G-10色谱柱，岛津ShimadzuLcsolution色谱工作站。

1.2试剂

头孢唑肟对照品(中国药品生物制品检定所，批号130508—200301，含量：99.4％)。蓝色葡聚糖2000（中国药品生物制品检定所）；头孢唑肟钠(山东罗欣药业股份有限公司生产，批号：101001、101002、101003)。水为注射用水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱以葡聚糖凝胶G-10(40～120μm)为填充剂,不锈钢柱（内径1.4cm，柱高度40cm）。流动相A为pH7.0的0.025mol/L磷酸盐缓冲溶液[0.025mol/L磷酸氢二钠溶液-0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（65：35）；流动相B为水,流速约为1.5ml/min,检测波长为254nm。

2.1.1流动相考察

2.1.1.1流动相为A、B

分别以流动相A、B为流动相，取0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液200μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定。

图A流动相A中蓝色葡聚糖峰

FigAThepeakofSephadexinmobilephaseA

流动相A理论板数按蓝色葡聚糖峰计算为1245，不低于700，拖尾因子为0.881，小于2.0。见图A。

图B流动相B中蓝色葡聚糖峰

FigBThepeakofSephadexinmobilephaseB

流动相B理论板数按蓝色葡聚糖峰计算为907，不低于700，拖尾因子为0.781，小于2.0。见图B。

结果表明：在两种流动相系统中，蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值（A/B）1.065，在0.93～1.07之间。

2.1.1.2流动相为B

以流动相B为流动相，取对照溶液200μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；以流动相A为流动相，取供试品溶液200μl，注入液相色谱仪。

结果表明：对照溶液主峰保留时间（流动相B）与蓝色葡聚糖2000峰（流动相B）保留时间的比值为1.022，在0.93～1.07之间。供试品溶液中聚合物峰保留时间（流动相A）与蓝色葡聚糖2000峰（流动相A）保留时间的比值为1.02，在0.93～1.07之间。

2.1.1.3流动相为A

以流动相A为流动相，精密量取供试品溶液200μl，注入液相色谱仪，进行测定。

结果表明：聚合物峰与主峰分离度（聚合物峰高与聚合物峰-主峰的峰谷高之比）符合规定。

2.1.2系统适应性试验

分别以流动相A、B为流动相，取0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液200μl，注入液相色谱仪，理论板数按蓝色葡聚糖峰计算均应不低于700，拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93～1.07之间，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值均应在0.93～1.07之间。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200μl，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0%。结果见表1

表1聚合物测定系统适应性试验结果

结果表明：峰面积的相对标准偏差为0.31%，小于5.0%。

2.2对照品溶液的制备

取头孢唑肟对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备

取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.4蓝色葡聚糖2000溶液的制备

取蓝色葡聚糖2000适量，制成每1ml中含0.1mg蓝色葡聚糖2000溶液。

2.5线性关系考察

取头孢唑肟对照品约20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1、3、5、7、9ml，分别置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液各200μl，分别注入色谱仪，用流动相B为流动相，记录峰面积。以峰面积对浓度作曲线，并计算回归方程及相关系数，

回归方程：A＝106867×C（μg/ml）-85822；相关系数：R＝0.9998

结果表明：头孢唑肟在8.048～72.43μg/ml浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

3讨论

《中国药典》2010年版采用凝胶色谱自身对照外标法定量测定β-内酰胺类抗生素中的聚合物，参照《中国药典》2010年版二部同类品种聚合物的测定方法,建立头孢唑肟钠聚合物的测定方法。实验结果表明，用本法测定头孢唑肟钠的聚合物含量，其理论板数、拖尾因子、进样精密度,分离度均符合有关规定,样品溶液8小时内稳定性试验结果良好。本法简便，灵敏，准确，适用于头孢唑肟钠的质量分析检验。

参考文献

[1]蔡姗英.β-内酰胺类抗生素在Superdexpepide凝胶过滤色谱柱上的色谱行为[J].中国抗生素杂质,2002,27（3）:157.

[2]余泽民.头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶中高分子杂质的含量测定[J].中国抗生素杂志,2000,25（5）,348.