ＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ法测定龙芪溶栓胶囊中黄芪甲苷的含量

ＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ法测定龙芪溶栓胶囊中黄芪甲苷的含量

蔡群１孔令洋２王建２张翠平３

蔡群１孔令洋２王建２张翠平３（１．济宁市第一人民医院山东济宁２７２００２）（２．济宁市食品药品检验检测中心山东济宁２７２０００）（３．枣庄矿业集团中心医院山东枣庄２７７８００）【中图分类号】Ｒ４７３．５【文献标识码】Ａ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０７－０００６－０２

【摘要】目的：建立ＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ法测定龙芪溶栓胶囊中黄芪甲苷的含量。方法：以乙腈．水（３６：６４）为流动相，蒸发光检测器条件漂移管温度为８０℃，气体流速：２．０ｍＬ／ｍｉｎ。结果：黄芪甲苷进样量在２．３４～１１．７２μｇ（ｒ］０．９９８６）范围内与峰面积积分值成线性关系，回收率为１００．１０％。结论：本方法有简便，准确，稳定，灵敏度高，，可用于该药的质量质量控制方法。

【关键词】蒸发光散射检测器龙芪溶栓胶囊黄芪甲苷【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅｉｎＬｏｎｇＱｉｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃｃａｐｓｕｌｅｂｙＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｂｅ．ｗａｔｅｒ（３６：６４）；ｔｈｅｄｒｉｆｔｔｕｂｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ８０℃．Ｔｈｅｇａｓｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ２．０ｍＬ／ｍｉｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅｗａｓ２．３４～１１．７２μｇ（ｒ］０．９９８６），ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ１００．１０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅｉｎＬｏｎｇＱｉｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃｃａｐｓｕｌｅ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ＥＬＳＤＬｏｎｇＱｉｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃｃａｐｓｕｌｅＡｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ_______龙芪溶栓胶囊是中西医结合复方制剂，由从地龙、黄芪等传统中药中提取的具有高活性有效成分，再辅以具有行气通络、活血化瘀的中药组成。龙芪溶栓胶囊具有双向调节作用，即可抑制体内亢进的血栓形成趋势，又可促进已形成的血栓溶解，从而不影响机体的凝血功能，不会造成出血倾向。黄芪总苷可明显增加冠脉血流量，扩张冠脉血管，增加冠状静脉窦血氧含量，降低心肌耗氧指数，改善心肌供血供氧。

本文主要以ＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ为分析手段，研究建立了龙芪溶栓胶囊中黄芪甲苷的定量分析方法，并为此类中药的质量控制提供依据。

１实验部分１．１仪器和试剂戴安Ｐ６８０Ａ液相色谱仪，ＰＬ．ＥＬＳ２１００检测器，ＳＡＲＴＯＲＩＵＳ２１４Ｓ电子天平。黄芪甲苷对照品（批号１１０７８１．２００６１３），供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供。龙芪溶栓胶囊（规格：０．２ｇ／粒，济宁华能制药厂生产；生产批号分别为１５０１０１１５０１０２１５０１０３），乙腈、甲醇为色谱纯，氨水、正丁醇为分析纯。

２试验和结果２．１色谱条件与系统适应性试验乙腈．水（３６：６４）为流动相，流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，Ｋｒｏｍａｓｉｌ１００．５Ｃ１８２５０×４．６ｍｍ色谱柱，柱温３０℃，蒸发光散射检测器的条件：漂移管温度８０℃，气体流速：２．４Ｌ／ｍｉｎ。

２．２对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥至恒重的黄芪甲苷对照品９．３８ｍｇ，置２０ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（浓度为：０．４６９ｍｇ／ｍＬ）。

２．３供试品溶液的制备精密称取混合均与的本品内容物３ｇ，置１５０ｍｌ具塞锥形瓶中，精密加入甲醇５０ｍＬ，称定重量，加热回流１ｈ，室温下放冷，再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液２５．００ｍＬ蒸干，残渣加水２０ｍＬ使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取５次，每次２０ｍＬ，合并正丁醇提取液，用氨水洗涤３次，每次１５ｍＬ，弃去氨水溶液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至１０ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀用微孔滤膜（０．４５μｍ）滤过，即得。

２．４阴性对照溶液的制备取处方中除去黄芪的其他药味，按处方比例制成缺黄芪的阴性对照样品。取阴性对照样品３ｇ，同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

２．３线性关系的考察精密吸取上述对照品溶液（浓度为：０．４６９ｍｇ／ｍＬ）５μＬ、１０μＬ、１５μＬ、２０μＬ、２５μＬ，分别注入高效液相色谱仪，测得峰面积积分值。

以黄芪甲苷的进样量的对数值为横坐标，峰面积积分值对数值为纵坐标，绘制标准曲线。

得回归方程为Ｙ］１．２５３７Ｘ＋０．３０３９，ｒ］０．９９８６结果表明黄芪甲苷进样量在２．３４～１１．７２μｇ范围内与峰面积积分值成线性关系。

２．４精密度试验取黄芪甲苷对照品溶液（浓度为：０．４６９ｍｇ／ｍＬ）２０μＬ，连续进样５次，测得峰面积的对数值分别为３．２０、３．１９、３．２０、３．２０、３．１９，ＲＳＤ为０．８％，表明仪器精密度良好。

２．５稳定性试验取２．３项下的供试品溶液，取２０μＬ进样测定，在０～２４ｈ内进样６次（０，２，４，８，１２和２４ｈ），测得峰面积分别为１４．９７，１４．８６，１４．９３，１５．１０，１４．６８，１４．７３。求得ＲＳＤ为１．１％，测试结果表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。

２．６重复性试验取本品，按正文所述供试品溶液制备方法，平行制备６份供试品溶液，按上述测定方法及条件测定重复测定６份，分别计算含量，黄芪甲苷的平均含量为２．２６ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０．３％，表明本品在２４ｈ内重复性良好。

２．７加样回收率试验精密称取已知含量为２．２６ｍｇ／ｇ的样品（批号为１４０１０２）约１．５ｇ，共６份，分别精密加入浓度为０．０６０ｍｇ／ｍＬ黄芪甲苷对照品２５ｍＬ与甲醇２５ｍＬ，按正文含量测定方法依法测定，分别计算回收率，结果表明方法的回收率良好。

２．８专属性试验分别精密吸取对照品溶液２０μＬ，供试品溶液及阴性对照溶液各２０μＬ，注入液相色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱保留时间相同的位置上，有相应色谱峰，而阴性对照色谱中无相应色谱峰。

说明处方中其他药味对测定结果无干扰。

２．９样品测定按正文所述方法，对３批样品进行测定。

表１黄芪甲苷含量测定结果样品批号平均装量／ｇ平均含量（ｍｇ／粒）

１５０１０１０．２０１１０．４４

１５０１０２０．２０４２０．４６

１５０１０３０．２０５８０．４２

３．讨论

３．１本文在对样品提取过程中的正丁醇用量和次数进行了考察，试验结果证明水饱和的正丁醇振摇提取５次（每次２０ｍＬ）和正丁醇饱和的氨试液洗涤３次（每次１５ｍＬ）效果较好。其中正丁醇饱和的氨试液洗涤的溶剂量和次数对黄芪甲苷的含量有很大影响，洗涤溶剂的量不宜过大，次数不宜过多。

３．２ＥＬＳＤ检测器经过近几年的发展使用，使其在测定黄芪甲苷上得以普及。笔者经过反复试验发现该法灵敏度高，分离度好，干扰少，前处理简便，回收率高，重现性好，适合于龙芪溶栓胶囊的质量分析工作。

参考文献［１］张明生，周亚军．龙芪柔胶囊中黄芪甲苷的含量［Ｊ］．中国药业，２００６，１５（１６）２６［２］马涵涛；沈新伦；杜雄军ＨＰＬＣ．ＥＬＳＤ法测定补心气口服液中黄芪甲苷的含量［Ｊ］；中国药房；２０１２，２３（３６）：３４４４．３４４５