天南星的HPLC指纹图谱研究

天南星的HPLC指纹图谱研究

关键词：天南星；指纹图谱；高效液相色谱法

HPLCfingerprintofＡrisaemaerubescens

Objective:TostudytheHPLCfingerprintofArisaemaArisaema.TheHPLCmapwasdetectedbyHPLC.Chromatographiccolumn:DiamosilC18(250mm*4.6mm,5micron);mobilephase:0.05mol/Lammoniumacetateaceticacidbuffer(pH6.5,A)-acetonitrile(B),gradientelutionprocedureasshowninTable2;detectionwavelength254nm;flowrate:1mL/min;injectionvolume:10muL.Witharginineasthereference,10batchesofmedicinalmaterialsweredrawnupbyHPLC,andthesimilarityevaluationsystemofchromatographicfingerprintoftraditionalChinesemedicine(2012edition)wasusedtodeterminethecommonpeak.RESULTS:Therewere16commonpeaksintheHPLCchromatogramsof10batchesofmedicinalmaterials,andthesimilaritieswereallgreaterthan0.90.CONCLUSION:ThefingerprintcanbeusedtoevaluatethequalityofRhizomaArisaemae,andthestudycanprovidereferenceforfurtherdevelopmentandutilization.

KEYWORDS：Ａrisaemaerubescens；fingerprint；HPLC

天南星为天南星科植物天南星Ａrisaemaerubescens(Wall.)Schott、异叶天南星ＡrisaemaheterophyllumBL.或东北天南星ＡrisaemaamurenseMaxim.的干燥块莲。为秋、冬二季茎叶枯萎时采挖，除去须根及外皮，干燥而得[1]。天南星味苦、辛，性温，归肺、肝、脾经。具有燥湿化痰、祛风止痉、散结消肿的功效[2,3]，临床多外用于顽痰咳嗽、风痰眩晕、中风痰壅、口眼歪斜等症的治疗[4,5].天南星活性成分主要为凝集素、皂苷、氨基酸、生物碱等［6,7］。其中，氨基酸具有参与机体多种代谢及调节中枢神经、大脑,调节肌肉，促进细胞分裂，促使伤口复原，增强免疫功能等作用，其质量高低也一定程度代表了天南星的质量水平。目前天南星的研究主要集中在炮制技术[8]、农药残留[9]、鉴别[10]等方面，对其质量控制研究较少。因此本研究采用HPLC方法测定天南星样品的图谱，并通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版）软件对其进行指纹图谱研究，为天南星的质量评价和进一步开发利用提供参考。

1.材料

1.1仪器

WatersE2695型HPLC仪（美国Waters公司），包括2489紫外可见光检测器、2695四元梯度洗脱的溶剂输送系统，2695四通道在线真空脱气机，Empower色谱工作站；ML204电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ5200B型超声波清洗器（昆

山市超声仪器有限公司）；TGL-10C高速离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2试剂

精氨酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：140685-201506）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.3药材

试验所用药材购于不同药材市场，经单位科室人名职称？？？鉴定为真品，天南星样品来源见表1.

2.方法与结果

2.1色谱条件[11]

色谱柱：DiamosilC18（250mm×4.6mm，5μｍ）；流动相：0.05mol/L醋酸铵醋酸缓冲液（pH6.5，A）-乙腈（B），梯度洗脱；检测波长254nm；流速：1mL/min；进样量：10μＬ；柱温：30℃。梯度洗脱程序见表2。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液取精氨酸对照品适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液，制成精氨酸质量浓度为0.8g/L的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液精密称取天南星样品粉末约1g，精密加入0.1mol/L盐酸20mL，称定质量，超声（功率：250W，频率：40kHz）处理30min，放冷至室温，加0.1mol/L盐酸补足减失的质量，滤过，取续滤液，12000r/min离心10min，取上清液，即得。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验取“2.2.2”项下供试品溶液（编号：S6）适量，以“2.1”项下色谱条件进样，连续测定6次，以精氨酸峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，16个共有峰相对保留时间的RSD均小于2%（n＝6），相对峰面积的RSD均小于3％（n＝6），表明本方法精密度良好。

2.3.2稳定性试验取“2.2.2”项下供试品溶液（编号：S6）6份，分别于室温下放置0、2、4、8、12、16、20、24h时以“2.1”项下色谱条件进样，每一时间点测定1次，共测定8次，以精氨酸峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，16个共有峰相对保留时间的RSD均小于1%，相对峰面积的RSD均小于3％（n＝8），表明供试品溶液室温放置24h内基本稳定。

2.3.3重复性试验精密称取天南星样品（编号：S6）适量，以“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，共6份，再以“2.1”项下色谱条件进样，每份测定1次，共测定6次，以精氨酸峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，16个共有峰相对保留时间的RSD均小于2%，相对峰面积的RSD均小于3％（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.4HPLC指纹图谱的生成及相关分析

2.4.1HPLC指纹图谱的生成取10批天南星样品各适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再以“2.1”项下色谱条件进样，每批测定1次，共测定10次，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版）对10批天南星样品的HPLC图谱进行分析，得HPLC指纹图谱。10批天南星样品HPLC叠加指纹图谱见图1，天南星样品的HPLC对照指纹图谱见图2。

2.4.2相似度分析采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版），以天南星样品HPLC对照指纹图谱为参照，进行整体相似度评价。结果显示，13批药材样品相似度为0.924～0.999，表明药材样品批间差异较小，质量较稳定性。10批天南星样品相似度评价结果见表3。

2.4.3共有峰的设定及指认10批天南星样品有16个共有峰，通过与对照品比对指认6号峰为精氨酸，由于其峰面积较大，且为所有天南星样品共有，故设定其为参照峰（S）；计算其他峰相对于6号峰的相对保留时间和相对峰面积。10批天南星样品色谱共有峰相对保留时间、相对峰面积见表4，表5。

3.讨论

中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它以中药化学成分系统理论为基础上，主要用于评价中药材以及其制剂质量的真实性、优良性和稳定性[12]。中药为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药所含化学成分的种类与数量，进而对药材料质量进行整体描述和评价。

本指纹图谱结果，10批天南星样品的HPLC图谱有16个共有峰，相似度均大于0.90；经验证，10批天南星样品的HPLC图谱与对照指纹图谱具有较好的一致性。表明各批天南星质量相对稳定，差异性不大。各共有峰相对保留时间的RSD较小，即差异较小，表明不同批的天南星样品化学成分种类基本相似；与相对保留时间比较，相对峰面积的RSD较大，即差异较大，表明不同批的天南星样品中各成分间的含量比例差异较大，这可能是由于天南星样品的不同基源或其不同栽培地理环境导致的，其原因有待进一步探究[13]。

综上所述，该指纹图谱结果可用于天南星的质量评价，该研究可为进一步开发利用提供参考。

参考文献

[1]中国人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].2015年版.北京：中国科学技术出版社.2015:57.

[2]王国强．中国中草药汇编[M].北京：人民卫生出版社，2014：341.

[3]刘利平,魏升华.贵州天南星属药用植物资源分布及民族应用研究[J].亚太传统医药,2017,13(24):17-19.

[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草：第八册［M］．上海：上海科学技术出版社，1999：7652．

[5]王吉安,宋欣伟.宋欣伟运用半夏天南星治疗痹证经验介绍[J].新中医,2017,49(12):199-201.

[6]徐皓．天南星的化学成分与药理作用研究进展［J］．中国药房，2011，22（11）：1046－1048．

[7]李春娜,刘洋洋,李朋收,等.东北天南星化学成分及药理作用[J].吉林中医药,2015,35(03):293-296.

[8]林坤河,韦建华,邓超澄,吴余燕.炮制对天南星化学成分及药理作用的影响研究概况[J].广西中医药,2018,41(4):73-75.

[9]周筠,余敏灵,陈文秋.一测多评法测定天南星中的3种残留农药[J].华西药学杂志,2018,33(4):421-424.

[10]黄雍,刘梦娇,张琴,张裕民,张志国,杨磊.半夏与虎掌南星、天南星的鉴别研究[J].湖南中医药大学学报,2018,38(4):406-409.

[11]王星，池玉梅，康安.超高效液相色谱-串联质谱法定性和高效液相色谱法定量分析天南星中氨基酸成分[J].色谱，2014,32（12）：1326-1332.

[12]汪海斌,石岩,李芳,等.中药黄芪指纹图谱的研究进展[J].中国药房，2017,28(33):4749-4752.

[13]曹爱华.影响山西恒山蒙古黄芪药材中无机元素含量的环境因素分析[J].中医学报，2018，33（1）：111-114.