实时荧光核酸恒温扩增技术在不孕育龄妇女病原体检测中的应用研究

实时荧光核酸恒温扩增技术在不孕育龄妇女病原体检测中的应用研究

周璐蔡筠谢建生

周璐蔡筠谢建生（深圳市妇幼保健院中心实验室518028）

【摘要】目的研究深圳地区不孕育龄妇女沙眼衣原体（Ct）和解脲支原体（Uu）感染情况以及与不孕症的相关性。方法随机选取本院就诊的581例不孕妇女和162例正常妊娠妇女，取尿液样本进行Ct和Uu实时荧光核酸恒温扩增技术的检测。结果研究组Ct和Uu阳性率分别为24%和33%；对照组阳性检出率为8%和3%，两组间差异有显著性；CT：χ2=18.91P<0.05;UU：χ2=15.63P<0.05;Ct+Uu：χ2=6.7P<0.05。结论女性生殖道Ct和Uu的感染是引起不孕的因素；实时荧光核酸恒温扩增技术是一种简便、快速、经济的病原体的检测技术。

【关键词】沙眼衣原体解脲支原体不孕症实时荧光核酸恒温扩增

【中图分类号】R319【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）21-0055-02

沙眼衣原体（Ct）和解脲支原体（Uu）感染是常见的性传播疾病，也是女性生殖道感染的主要原因，近期的研究显示这两种病原体的感染与不孕症的发病率有较大相关性。为了解深圳地区育龄妇女不孕症患者中Ct和Uu的感染状况，本研究随机选取了581例由于不孕症前来就诊的育龄妇女作为研究对象，采用以实时荧光核酸恒温扩增技术（SimultaneousAmplificationandTesting,SAT）开发的Ct和Uu核酸检测试剂盒（RNA恒温扩增）进行检测，查找病因，为不孕症进一步的诊断及治疗提供实验室依据，现将研究结果汇报如下。

1对象与方法

1.1研究对象

选择2012年3月-2013年3月间在深圳市妇幼保健院妇科门诊就诊的女性不孕患者581例，年龄25-46岁，平均年龄为33.6岁；不孕时间为3-10年,平均为5.3年；为研究组，所有患者都排除男方因素，妇科检查后排除先天性因素。选择同一时间在妇科门诊进行人工流产女性患者162例为对照组，年龄21-40岁，平均年龄为31.5岁。

1.2标本采集

用于核酸检测的尿标本采集，采集标本前2小时内不排尿。收集首段尿样约1ml，与1ml样本保存液（SAT试剂盒组分）混匀，-20℃保存，CT-SAT,UU-SAT检测待用。

1.3主要仪器及试剂

CT-SAT和UU-SAT试剂盒由上海仁度生物科技有限公司提供，PCR试剂盒由深圳匹基生物工程有限公司提供。实时荧光核酸扩增仪为美国ABI公司的ABI7300型定量PCR仪。

1.4检测方法

尿液标本从冰箱取出，平衡至室温同时行CT-SAT和UU-SAT检测，按照试剂盒说明书进行操作。检测结果根据实时荧光信号的出现时间和强度，结合阳性对照、阴性对照和界值参考品对检验结果进行判定。

1.5统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件包进行统计学分析，结果以率表示，采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

不孕组妇女的Ct阳性检出率为（24%），明显高于对照组的8%（P<0.01）；不孕组的Uu阳性检出率为33%，也高于对照组的10%（P<0.01）见表1。

表1不孕组与对照组CT和UU感染结果

3讨论

最新研究报道发现，由CT和UU引起的泌尿生殖道感染呈现出迅速上升的趋势。而此类感染可能与女性不孕不育、早产、胎儿宫内死亡等疾病相关[1,2]。由于其发病率高，流行广泛，对人体的健康造成了极大危害，已经成为严重的公共卫生问题。由CT和UU引起的泌尿生殖道感染，主要通过性接触传播，大多数为隐匿性感染，没有特殊的表现，在临床上常常被漏诊[3]。传统的检测方法例如涂片、培养、免疫学等，都存在检出率低、周期较长、特异性差等缺点，给诊断和治疗带来困难，因此，需要选择选择敏感特异的诊断方法。SAT是一种结合RNA恒温扩增技术和实时荧光检测技术的新型检测技术。本次研究采用的CT-SAT和UU-SAT检测试剂盒应用磁珠法提取核酸，对患者尿样标本进行检测，与传统的PCR方法相比，SAT检测的是病原体的RNA，只有活菌中才存在RNA片段，因此该法能排除残留DNA对检测结果的影响[4]。此外从标本采样的角度，传统方法需采取泌尿生殖道分泌物，取样过程较痛苦，SAT采用尿液这种非侵入性的标本，也具有较大的临床应用价值。是临床检测CT和UU的实用、可靠的方法。

支原体、衣原体是存在于人类生殖系统中的病原微生物，主要侵犯泌尿生殖道黏膜上皮，可引起生殖器的慢性炎症[5]。该种炎症不管有无症状都可导致宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎等妇科疾病，因而导致女性不孕[6]。其导致不孕的机制可能与以下因素有关[7]：病原体减低了精子的数量活力；由于炎症使输卵管黏膜上皮细胞受到损伤；病原体诱导了相应的变态反应等因而导致不孕。

本研究首次采用SAT技术对深圳地区不孕妇女的尿液样本进行了CT和UU的检测，SAT检测技术具有特异性好、灵敏度高、可用于用药后的检测和判愈等优点。本研究利用尿液标本进行检测，与以往研究方法相比更加简便快速经济。检测结果显示：581例不孕患者尿液CT阳性有137例（24%），UU阳性有191例（33%），混合感染有71例（12%），研究组CT、UU阳性率均明显高于对照组，且差异有统计学意义（P<0.01），实验结果与以往研究相符。该研究一方面说明衣原体、支原体在不孕女性生殖道感染中占重要位置，孕前应积极预防和治疗CT、UU的感染，并将其列为常规检测项目，从而提高CT、UU感染所致不孕症的治愈率。另一方面，从方法学上来看，SAT技术在临床应用中表现出诸多优点，为CT、UU的实验室诊断提供了新的采样方式和检测方法[8]是一种值得推广的检测技术。

参考文献

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[8]王宝玺，朱学骏，倪安平，等.细胞培养、连接酶链反应和六种聚合酶链反应试剂盒检测沙眼衣原体的比较研究[J].中华皮肤科杂志，2001，343：181-183.