人免疫球蛋白静脉注射变性后的毒性及作用机理研究

人免疫球蛋白静脉注射变性后的毒性及作用机理研究

孙敬英

七台河市人民医院黑龙江七台河154600

摘要：目的：静脉注射人免疫球蛋白变性后的毒性作用机理进行分析研究。方法：对来源不同的人免疫球蛋白采用静脉注射的毒性作用进行比较，分析毒性致死作用机理及主要原因。结果：人免疫球蛋白变性后可由血细胞凝集，造成心脑缺血甚至迅速死亡，该产品由不同厂家生产的热稳定性具有一定的差异。结论：人免疫球蛋白变性后具有致死性毒性，在运输保管中应控制好温度，以免由于高温导致药品发生变性。

关键词：人免疫球蛋白；静脉注射；毒性机理

1.前言

免疫球蛋白属于具有抗体活性的一种糖蛋白，随着血浆分离技术的不断发展，1970年产生了静脉注射人免疫球蛋白。主要是将血浆中的特异性抗体成分从健康人血中提取出来，近年来在原发性免疫缺陷、自身免疫、严重感染及炎症等疾病治疗中得到广泛应用。Ig是蛋白质，很多因素都会造成其变性。免疫球蛋白静脉注射变性后对机体的毒性作用还没有报道过，因此，针对其毒性作用机理及主要原因进行分析。

2.材料

2.1实验动物及试剂样品

20克小鼠20只，2.5千克新西兰家兔9只。免疫球蛋白1、2、3号样品由同厂家同批号生产，分别来自医院库房、中心药房及生产厂家库房，4号样品为另一厂家生产的同种产品。1、3、4号样品无色透明，2号样品淡黄色透明，在外观上1、3、4号样品流动性优于2号样品，具有较高的粘稠度。

取健康成年女性15毫升的新鲜血液，置入锥形瓶中振摇10分钟成为脱纤血液。添加10倍的0.9%氯化钠溶液后摇匀，按照1400转/分钟进行15分钟离心，将上清液除去，红细胞沉淀后再用0.9%氯化钠溶液10倍量按照上述方法洗涤4次，直到上清液消失红色。采用0.9%氯化钠溶液与所得红细胞形成2%红细胞混悬液备用。

3.方法及结果

3.1样品毒性实验

随机将小鼠平均分为4组，将0.3毫升未经处理的1、2、3、4号样品经尾静注。尾静脉注射2号样品后的小鼠发生呼吸困难、四肢抽搐、眼球发白等情况，迅速死亡。之后立即麻醉剖检，相对于正常小鼠麻醉后解剖，该小鼠肝脏瘀血面积较大，心房迅速收缩，心室不规律收缩，1、3号样品没有发生任何症状正常存活。

将家兔随机平均分为3组，按照4毫升/千克剂量将未经处理的1、2、3号样品分别经耳缘静注。静注4毫升2号样品的家兔发生呼吸困难、四肢抽搐、瞳孔扩散等情况，未注射完药品即死亡。

3.2人免疫球蛋白变性后的主要特点及毒性作用

受变性因素作用影响，天然蛋白质的高级结构产生异常变化，进而导致丧失生物功能及改变理化性质的现象被称为变性。蛋白质变性后称为变性蛋白质，X射线、紫外线、表面张力及震荡剧烈等物理因素，有机溶剂、酸、碱、重金属盐等化学因素都会导致蛋白质变性。作为蛋白质的人免疫球蛋白也可因以上原因导致变性。

本研究采用最常见的硝酸变性和热变性方法对正常免疫球蛋白样品分别进行变性处理，由于蛋白受强酸作用可迅速变性，大部分蛋白超过60摄氏度也可导致其变性，因此选择70摄氏度和100摄氏度，对其变性后的毒性作用进行观察。分别取4份1.5毫升的1号样品，将0.8摩/升硝酸溶液添加到每管中，放置2小时后对人免疫球蛋白在硝酸变性后的变化特征进行观察。1号样品随着不断增加硝酸量，流动速度减慢，不断增大粘稠度。流动十分缓慢，具有最高的粘稠度。但硝酸变性法对静注人免疫球蛋白变性后未发现产生可见的颜色变化，而且采用1.5毫升的4份生理盐水加入硝酸作为对照组。每只小鼠尾静脉注射0.3毫升后，0.8摩/升硝酸加入超过100微升的两组动物立即发生呼吸困难、四肢抽搐、眼球发白等情况，类似于上述给小鼠尾静注2号样品射后的情况。而小鼠尾静注硝酸生理盐水溶液即使不足120微升也未发生死亡，表明该毒性主要是因硝酸引起的人免疫球蛋白变性造成的，并不是硝酸毒性引起的。

将1、3、4号样品各分为2份，在70摄氏度和100摄氏度下分别进行半小时孵育，等到样品达到室温后，对人免疫球蛋白在高温变性后的变化特征进行观察。3样品孵育后都显示出淡黄色，并增大了粘稠度。各样品经70摄氏度进行1小时孵育后，1、3样品可观察到淡黄色染色变换，4号样品颜色比1、3号样品浅，经过100摄氏度高温半小时孵育后，1、3号与2号样品具有相似的表观性状，4号样品显示出淡黄色变化，但在高温变性条件下该药品未产生沉淀、凝集等情况。对小鼠尾静注0.3毫升样品，1、3号样品经70摄氏度孵育1小时都使小鼠死亡，4号样品只有1只小鼠死亡，药品给完后其它4只小鼠都有精神萎靡表现，第2天精神状态好转。1、3、4号样品经100摄氏度孵育半小时使小鼠死亡，产生与2号样品一致的呼吸困难、四肢抽搐、眼球发白等表现。

4.讨论

人免疫球蛋白静注变性后可导致动物不超过1分钟死亡，变性后蛋白未观察到沉淀或聚集，硝酸变性样品在外观上颜色不变，只增加粘稠度，样品高温变性的颜色显示出向淡黄色变化，缓慢摇动时能够发现增大粘稠度，其它方面与正常药品不存在差异，所以难以在外观上对药品变性进行判断，而且对静注蛋白变性后的毒性作用关注较少，产生误操作导致难以挽回的后果，应提高对蛋白类药品变性后静注安全性的重视。对人免疫球蛋白的保存应保持低温，以免造成药品变性而引发毒性，对生命安全构成严重威胁，其进入血液后迅速介导血细胞凝集是造成动物迅速死亡的作用机理。

5.结语

综上所述，人免疫球蛋白变性后具有致死性毒性，在运输保管中应控制好温度，以免由于高温导致药品发生变性，进而发挥人免疫球蛋白在临床治疗中的重要作用。

参考文献：

[1]刘晋华，李冬梅.免疫球蛋白在防治感染中的作用及不良反应[J]，中国医院药学杂志，2016.5

[2]孟昭鹏.静注免疫球蛋白并非安全[J]，传染病信息，2014.3

[3]张智，徐葛林.静脉注射用免疫球蛋白治疗的新用途[J]，国外医学，2017.11

[4]嵇月红，田兆嵩.静脉用免疫球蛋白临床应用的副作用[J]，中国输血杂志，2016.8

作者简介：

孙敬英（1970-），女，黑龙江巴彦人，大学本科学历，主任药师，研究方向：药学。