解热清淋胶囊质量标准研究

解热清淋胶囊质量标准研究

陈骞1潘媛铭2

陈骞1潘媛铭2

（1广西南宁市疾病预防控制中心530028;2广西中医药大学第一附属医院530022）

【摘要】目的建立解热清淋胶囊的质量标准。方法建立解热清淋胶囊方中的头花蓼、半边莲的TLC鉴别，建立高效液相色谱法测定头花蓼中的槲皮素含量的方法。结果槲皮素进样量在0.0216～0.4316mg范围内进样量与峰面积线性关系良好，相关系数r=0.9999，平均加样回收率为98.90%。结论建立的方法操作简便、稳定、重复性好，适用于解热清淋胶囊的质量控制。

【关键词】解热清淋胶囊质量标准槲皮素头花蓼半边莲

【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）30-0131-03

【ABSTRACT】Objective：ToestablishthequalitystandardforJiereqinglinCapsules.Methods:TLCwasusedtoidentifyPolygonumcapitatum、HerbaLobeliaeChinensis.ThequercetinofPolygonumcapitatumwasdeterminedbyHPLC.RESULTS：Thecalibratedlinearcurveofquercetinwasintherangeof0.0216～0.416μg（r=0.9999）.Theaveragerecoverywas98.90%.CONCLUSION:Themethodissimple,stable,goodrepeatability,suitableforthequalitycontrolofJiereqinglinCapsules.

【KeyWords】JiereqinglinCapsulesqualitystandardquercetinPolygonumcapitatumHerbaLobeliaeChinensis

解热清淋胶囊是由头花蓼、半边莲等中药组成的制剂。具有清热解毒，利尿通便的功效。临床用于治疗湿热蕴结，小便黄赤，淋漓涩痛之症，尿路感染，肾盂肾炎鉴见上述证候者[1]。头花蓼为蓼科蓼属多年生草本植物的全草，又名太阳草、石莽草、四季红等，为少数民族地区常用药。半边莲又名急解索、米田、米草等，为桔梗科植物半边莲的全草。为了更好地控制本品质量，我们建立了头花蓼、半边莲的薄层鉴定，并利用高效液相色谱法对头花蓼中的槲皮素进行了含量测定。具体研究如下：

1仪器与试药

1.1仪器日本岛津公司LC-20A高效液相色谱仪；SPD-20A紫外检测器；威玛龙色谱工作站；必能信超声（上海）有限公司B2200S超声仪；日本岛津公司AEL-200电子分析天平。

1.2样品与试药槲皮素对照品：由中国药品生物制品检定所提供（批号：100081-200907，供含量测定用）。

清热解淋胶囊样品及缺药材的阴性对照品均为实验室制备。甲醇为色谱纯，磷酸、盐酸为分析纯，水为重蒸水。

2薄层色谱鉴别

2.1头花蓼的薄层鉴别：取本品内容物1g，研细，加丙酮20ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，滤渣加甲醇1ml使溶解作为供试品溶液。另取缺头花蓼药材的阴性对照样品1g，同法制成阴性对照溶液。继续取头花蓼对照药材1g同法制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VIB）试验[2]，吸取供试品溶液5～10ml，对照品溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸（5：4：0.6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁试液。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性无干扰。

2.2半边莲的薄层鉴别：取本品内容物5g，研细，加醋酸乙酯30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取半枝莲对照药材粗粉1g，加水煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约20ml，加醋酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再取缺半枝莲的阴性样品5g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液各10ml、对照药材溶液2ml，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（8:2:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本法重现性好，阴性无干扰。

3槲皮素的含量测定

3.1色谱条件色谱柱：kromasilC18柱（4.6×250mm，5mm）；流动相：甲醇-0.034mol/L磷酸溶液（43:57）；流速：1.0ml/min；检测波长：360nm；柱温：室温；进样量为10ml。理论塔板数按槲皮素峰计，应不低于5000，样品中槲皮素和杂质峰的分离度大于1.5且阴性无干扰。

3.2供试品溶液的制备取本品内容物适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇-25%盐酸（4：1）的混合溶液30ml，置水浴中加热回流1小时，迅速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3.3线性关系的考察

标准曲线的制备精密称取槲皮素对照品10.79mg，置50ml容量瓶中，加甲醇-25%盐酸（4：1）混合溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取0.5、1、2、5、10ml，分别置50ml容量瓶中，加甲醇-25%盐酸（4：1）混合溶液稀释至刻度,摇匀，分别作为对照品溶液，按拟定的色谱条件分别进样测定。以槲皮素对照品进样量（mg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制线性关系图，得回归方程为：

Y=4106098X-1258.5(r=0.9999)

结果表明：当进样量在0.0216～0.4316mg范围内时，槲皮素进样量与峰面积线性关系良好。见表1，线性关系图见图1。

表1槲皮素线性关系试验结果

图1槲皮素进样量和峰面积的线性关系图

3.4精密度试验对同一供试品溶液，连续5次进样，5次测定结果的平均值为：0.222mg/g，RSD为0.81%（n=5）。见表2。试验结果表明，本法的精密度良好。

表2槲皮素精密度试验结果

3.5重复性试验对同一批（120301批）供试品溶液，平行测定6份，6份测定结果的平均值为：0.222mg/g，RSD=1.05%(n=6)。见表3。结果表明，本法的重复性较好。

表3槲皮素重复性试验结果

3.6稳定性试验对同一供试品溶液（120301批），在0，1，2，4，10，12和24小时时分别测定1次，见表4。结果槲皮素含量的平均值为0.224mg/g。RSD=1.40%（n=7），试验结果表明，在24小时内，被测物稳定。

表4槲皮素稳定性试验结果

3.7回收率试验精密称取线性关系下的对照品贮备液5ml置500ml容量瓶中，加甲醇-25%盐酸（4：1）混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密称取样品（槲皮素含量为0.222mg/g）约0.25g，平行取6份样，分别精密加入上述槲皮素对照品溶液25ml，按供试品制备方法提取、测定，计算回收率，结果平均回收率为98.90%，RSD=1.04%（n=6）符合定量分析的要求，详见表5。

表5槲皮素回收率测定结果

3.8阴性干扰试验取缺头花蓼的阴性样品0.5g，按供试品溶液项下的方法提取，测定。结果阴性无干扰。

3.9样品测定按供试品项下的测定方法对4批样品进行含量测定，结果见表6。经测定4批样品的含量分别为：

表6样品测定结果

4讨论

4.1头花蓼全草具有清热解毒、利尿通淋、活血止痛功效，可用于治疗肾盂肾炎、尿道结石、跌打损伤。含有槲皮素、24-羟基二十四烷-3-酮、29-羟基二十九烷-3-酮、没食子酸等成分[3]。建立的头花蓼薄层鉴别方法重现性好，阴性无干扰。为使更为全面、准确地控制解热通淋胶囊的质量，本研究增加槲皮素的含量测定指标，并进行了方法学研究，建立的含量测定方法简便、准确、重现性好、专属性强，可作为解热通淋胶囊的质量控制指标。

4.2在槲皮素的含量测定时，流动相选择曾参考了《中国药典》2010年版一部中“银杏叶”下的“总黄酮苷”[含量测定]项及相关文献使用的流动相为甲醇-0.4%磷酸（50：50）但达不到基线分离，经反复试验和调试，最终采用了甲醇-0.034mol/L磷酸溶液（43：57）作为流动相进行分析，结果槲皮素和相邻峰可达到基线分离；对于提取条件的选择，参照了《中国药典》2010年版一部中“银杏叶”下的“总黄酮苷”[含量测定]项下供试品溶液制备方法及相关文献[4]。以甲醇溶液作溶剂，采用了加热回流的提取方法，并对不同时间段的提取的槲皮素的含量进行了测定试验对比，结果见表7：

表7提取方法对比

从上表可见，从节约时间与能源考虑，选择加热回流1小时即可基本提取完全，故最后选定提取条件为：取本品内容物适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇-25%盐酸（4：1）的混合溶液30ml，置水浴中加热回流1小时，迅速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

4.3本品中半边莲所含成分主要为生物碱，具有利尿作用[5]。在进行TLC研究时，曾参照相关资料[6]对方中的半边莲进行了薄层鉴定:取本品粉末3g，置100ml分液漏斗中，加等量浓氨水润湿，放置1h，加5倍量氯仿振摇，氯仿提取液用适量1mol/L硫酸夜萃取，在硫酸萃取液中加氨水碱化并加氯化钠饱和，加5ml氯仿萃取，得氯仿萃取液作为供试品溶液。另取缺半边莲的阴性对照样品3g，同法制成阴性对照品。再取半边莲对照药材同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VIB）试验[2]。吸取上述三种溶液各5～10ml，分别点于同一氧化铝板上，以氯仿-乙醇（98.75：1.25）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试剂显色。供试品色谱中，在与对照药材相同的位置上显相同颜色的斑点，但阴性有干扰，且在处方中半边莲的用量少，斑点不清晰并且分得不是很开照相效果十分不理想，因此不予以采用。

4.4定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或者内标峰之间有较好的分离度，除另有规定外，分离度应大于1.5[7]。经过试验不同品牌色谱柱与调试流动相比例，理论塔板数按槲皮素计算应不低于5000。

参考文献

[1]邱德文，杜江，夏同衍，主编.中华本草-苗药卷彩色图谱[M].北京：中医古籍出版社，2006.4.146.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2010年版.一部.北京：中国医药科技出版社,2010：附录ⅥB.

[3]邱德文，杜江，主编.中华本草-苗药卷[M].贵州：贵州科技出版社，2005.1.223～224.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：1080.

[5]邱德文，杜江，主编.中华本草-苗药卷[M].贵州：贵州科技出版社；2005.1.227～230.

[6]张贵君，主编.常用中药鉴定大全[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993.294.

[7]刘文英，主编.药物分析[M].第五版.北京：人民卫生出版社，2003.75～80.