探讨新生隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法

探讨新生隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检验方法

孙丽梅

孙丽梅

黑龙江省农垦北安管理局中心医院164095

【摘要】目的分析新生隐球菌性脑膜炎的脑脊液标本检测方法，提高新生隐球菌的检出率。方法对笔者所在医院确诊隐球菌性脑膜炎55例脑脊液标本的临床资料、实验室检查的情况作以比较，进行回顾性分析。结果55例患者脑脊液检查结果：墨汁染色阳性42例，革兰染色阳性38例，真菌培养阳性49例，乳胶凝集试验阳性52例。结论通过比较分析CM脑脊液标本4种不同检验方法，笔者认为对同一份标本应联合使用3种以上方法检测，使结果互相印证，从而降低误诊率。

【关键词】新生隐球菌性脑膜炎；脑脊液；墨汁染色；革兰染色；隐球菌抗原乳胶凝集试验；真菌培养

Abstract：ObjectiveToanalyzethedetectionmethodsofCryptococcusneoformansmeningitisincerebrospinalfluidspecimensandimprovethedetectionrateofCryptococcusneoformans.MethodsTheclinicaldataandlaboratoryexaminationsof55patientswithcryptococcalmeningitisdiagnosedinourhospitalwerecomparedandanalyzedretrospectively.ResultsTheresultsofcerebrospinalfluidexaminationin55patientsshowedthat42caseswereinkpositive，38casesweregrampositive，49caseswerefungalculturepositiveand52caseswerelatexagglutinationtestpositive.ConclusionBycomparingandanalyzingfourdifferentmethodsofCMcerebrospinalfluidsamples，theauthorbelievesthatmorethanthreemethodsshouldbecombinedtodetectthesamesample，soastoverifytheresults，soastoreducetherateofmisdiagnosis.

Keywords：Cryptococcusneoformansmeningitis；cerebrospinalfluid；inkstaining；gramstaining；Cryptococcusneoformansantigenlatexagglutinationtest；fungalculture

检验科常用的新生隐球菌的检测方法有墨汁染色、革兰染色、隐球菌抗原乳胶凝集实验和真菌培养。通过这4种方法的应用，对其阳性率进行比较，以提高检验水平。现将笔者所在医院20181年2～11月确诊新生隐球菌（CM）的55例脑脊液（CSF）标本用以上4种方法进行检验的情况作以比较，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

55例患者均为AIDS合并CM，其中男36例，女19例，年龄29～62岁。以上患者病史、症状、体征、辅助检查结果均符合CM表现；体温37.5～39.0℃39例，＞39℃2例；进行性头痛47例，伴嗜睡、昏迷等意识障碍者21例。

1.2实验室检查

55例患者入院后分别抽取CSF3管，第1管做真菌培养和生化检验，第2管作做细胞学检验和墨汁染色，第3管做隐球菌抗原乳胶凝集实验。CSF标本中无色清晰46例，微混9例。墨汁染色选用印度墨汁或国产优质墨汁，将CSF标本离心后取沉淀物直接染色镜检，在黑色背景下可见到透亮的菌体和宽厚荚膜；真菌培养用沙保弱培养基，将标本接种后放置于37℃孵育箱中，2～5d后观察菌落并做酚氧化酶试验、尿酶试验等鉴定试验；革兰染液由贝索公司提供，涂片染色后菌体呈孢子样；乳胶凝集实验采用美国IMMY公司生产的新生隐球菌乳胶凝集抗原检测试剂盒，利用快速乳胶凝集反应对标本中隐球菌的荚膜多糖抗原进行定性检测，试验室温下即可观察结果，反应环中凝集颗粒的多少和大小与反应的阳性程度成正比，结果读数划分等级从阴性到4级，阳性对照应在2级（轻微小团块或块状）以上，而阴性对照应小于1级（乳状背景下细小颗粒）。

2结果

55例患者CSF检查结果：墨汁染色阳性42例，革兰染色阳性38例，真菌培养阳性49例，乳胶凝集试验阳性52例。

3讨论

新生隐球菌是有荚膜的、类似酵母的霉菌，又称溶组织酵母菌。广泛存在于被鸟类粪便污染的土壤中，尤以鸽粪中检出最多[1]。目前由于临床上抗生素、免疫抑制剂、肿瘤放、化疗的广泛应用和HIV的流行特别是AIDS患者的不断增多，使CM患者明显增多。CM是由新生隐球菌所导致的临床最常见的中枢神经系统感染（CNS）[2]。在AIDS患者中隐球菌也是最常见的CNS感染的原因。赵建华等[3]报道12例AIDS机会性感染的患者中隐球菌脑膜炎有6例。在HIV感染人群中CM的发病率是每年0.04%～12.00%；西欧、中欧、大洋洲的中位发病率最低；每年全球大约957900人患CM，约624700人死亡[4]。CM的临床症状一般是非特异性的，患者可以表现为脑膜炎的症状，也可以表现为脑膜脑炎的症状。大量资料说明，CM的早期明确诊断是降低患者死亡率和判断预后的关键。

目前医学上缺乏快速、敏感而又特异的检验方法是CM误诊的重要原因。墨汁染色方便快捷，取CSF离心后的沉淀物用负染法找到有宽阔透明荚膜的隐球菌就能确诊，是诊断CM最直接的方法。文献报道墨汁染色首次检出阳性率仅54%～74%[5]。在发病初期，墨汁染色镜检需多次反复检查才能找到隐球菌。隐球菌在革兰氏染色后呈现孢子样，大小不等，透明或半透明，胞核染紫色或淡紫色，荚膜因富含多糖而不着色，这一特点也将细胞与隐球菌区别开来。隐球菌抗原乳胶凝集实验在隐球菌感染早期的诊断具有重要意义。一定程度上，抗原滴度与感染程度成正比，增高的滴度反映感染程度和简单预后，减低的滴度说明患者治疗有效[6]。但在患者抗原滴度低、早期感染、高滴度的前带影响等情况时，结果会呈现假阴性；而在风湿因子存在下或试验操作不当时结果会出现假阳性。隐球菌培养是确诊CM的“金标准”，在玉米-吐温80培养基上培养3～5d后涂片镜检，可见圆形、厚壁孢子[7]。

本研究数据显示真菌培养和乳胶凝集实验阳性率较高，墨汁染色和革兰染色阳性率相对较低，但每种方法又有自己的特点和不足之处。实际工作中，为提高早期诊断阳性率，对同一份标本应联合使用3种以上方法检测，使结果互相印证，从而为临床提供有力证据。

参考文献：

[1]刘运德.微生物学检验[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2003：371-373.

[2]CollazosJ.OpportunisticinfectionsoftheCNSinpatientswithAIDS：diagnosisandmanagement[J].CNSDrugs，2003，17（12）：869-887.

[3]赵建华，韩雄.艾滋病中枢神经系统机会性感染的特征[J].中风与神经疾病杂志，2003，20（4）：373.

[4]ParkBJ，WannemuehlerKA，MarstonBJ，etal.EstimationofthecurrentglobalburdenofcryptococcalmeningitisamongpersonslivingwithHIV/AIDS[J].AIDS，2009，23（4）：525-530.

[5]赵明伦.颅内感染性疾病[M].青岛：青岛出版社，1990：300-302.

[6]LuHZ，BlochKC，TangYW.Moleculartechniquesinthediagnosisofcentralnervoussysteminfections[J].CurrInfectDisRep，2002，4：339-350.

[7]周庭银.临床微生物学诊断与图解[M].第2版.上海：上海科学技术出版社，2007：126-127.