黄连水煎液与环丙沙星体外抗绿脓杆菌协同作用的实验研究

黄连水煎液与环丙沙星体外抗绿脓杆菌协同作用的实验研究

宫殿博王小周杨亮

宫殿博王小周杨亮（辽宁省大连大学附属中心医院辽宁大连116011）

【中图分类号】R978.5【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）06-0149-02

【摘要】目的研究黄连水煎液与环丙沙星对体外绿脓杆菌抑制的协同作用。方法用绿脓杆菌菌液进行受试，使用打孔法对黄连水煎液、环丙沙星、黄连水煎液+环丙沙星三种药剂的抑菌圈进行大小测定。结果三种药剂对受试菌均有不同程度的抑制作用，其中黄连水煎液+环丙沙星试剂的抑菌作用最佳。结论黄连水煎液与环丙沙星对体外绿脓杆菌的抑制具有协同作用。

【关键词】黄连水煎液环丙沙星绿脓杆菌

绿脓杆菌又称铜绿假单胞菌，在自然界中广泛存在。正常人的皮肤、呼吸道、肠道中均存在。在医院环境中更加广泛分布，是一种重要的条件致病菌[1]。人们发现该菌耐药广泛并容易发生变异，致死率很高，在临床中危害日益增大[2]。且多发生在老年人、合并有基础疾病以及混合细菌感染者。有研究表明，黄连能够对大肠杆菌、伤寒杆菌和绿脓杆菌产生的感染起到预防和治疗方面的作用。环丙沙星作为第三代喹诺酮类的代表药物，抗感染治疗中具有费用低、抗菌效果好的优点，王济兴[1]等对144株绿脓杆菌药敏结果分析显示，环丙沙星耐药率为22.22%，对绿脓杆菌表现出很高的敏感度。本实验主要探讨黄连水煎液与环丙沙星联合对体外绿脓杆菌抑制的协同作用，以丰富临床治疗绿脓杆菌感染的方法以及寻找经济有效抗绿脓杆菌的新药。

1材料

1.1菌种铜绿假单胞菌系１株（2012年我院ＥＩＣＵ临床感染标本分离得到）。

1.2药物黄连（我院中药调剂室提供）；盐酸环丙沙星注射液（浙江新华制药有限公司，质量标准USP28,EP5，BP2002和CP2005）。

1.3培养基MH肉汤(Muller-HintonBroth，MHB)，LB琼脂平板、LB肉汤、胰蛋白胨大豆肉汤(杭州天和微生物试剂有限公司生产)。

2方法

2.1黄连水煎液制备将用纱布包好的黄连盛在烧杯中，加入100ml蒸馏水浸泡1小时后慢慢加热直到煮沸，使用小火10-30min，然后过滤，将过滤后的药渣再加上大约20ml水，按先前办法煎煮过滤，将2次煎液合并以后再进行过滤，将过滤液浓缩直至5ml，其浓度控制为1g/ml，装瓶备用。3000r/min离心20min后取上清液，用5%的枸橼酸钠调节pH至7.2-7.6之间，倒入无菌试管中，8磅15min实行灭菌，置于4℃冰箱中进行保存，以备使用。

2.2菌液制备绿脓杆菌菌株接种于琼脂培养基，37℃下培养48h，斜面上取实验菌，接种于液体培养基，37℃下培养12h。经过比浊判定菌量以后，稀释到其含菌量为105-110cfu/ml的菌悬溶液可以作为实验用目标菌液。

2.3MH琼脂培养基制备将基础培养基分别装在比较合适的三角瓶中，121℃高压下灭菌15min。基础培养基的温度控制在45℃，在无菌状态下，将培养基倒入平皿中。

2.4体外药敏实验在营养琼脂平面上，用无菌接种环蘸取一定量目标菌液进行均匀涂布，然后使用直径大约为0.15mm的打孔器在培养基表面打等距的孔一共3个。无菌操作下将灭菌用的不锈钢圆形小管（内径6mm、外径8mm、高10mm）安放在培养基上，用手轻轻加压，使二者接触时不产生空隙，并且在小管上标注所加入药品名称（黄连、环丙沙星、黄连+环丙沙星），每一平皿安放3只小管。等待1分钟之后，分别向各个小管用1.5ml无菌注射器缓缓滴加上述药液，不要使药液外溢。每种药液做3个平皿，放置在37℃生化培养箱中培养大约18-24h，测量抑菌圈的实际直径，计算出3个平皿的平均值。

2.5统计学方法应用SPSS12.0统计分析软件进行统计学处理，计量资料用-x±s表示，计量资料的比较采用配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

3结果

结果显示，三种药液对受试菌都能产生不同程度的抑制作用，黄连水煎液与环丙沙星组抑菌直径明显大于其余2组（P＜0.05）。（参见下表）

三组药液药敏实验结果（直径mm）

黄连环丙沙星黄连+环丙沙星

平皿A111417

平皿B121520

平皿C121318

平均11.71418.3

抑菌圈直径<10mm为耐药，10-15mm为中度敏感，15mm以上则为高度敏感。结果显示，黄连水煎液+环丙沙星的抑菌效果最好。

4讨论

绿脓杆菌为一种天然耐药菌，对多种抗生素具有耐药性。目前临床应用三代头孢抗菌素治疗绿脓杆菌感染，其价格昂贵，副作用大。耐药菌株已成为引起临床感染较为常见的病原菌，特别是医院内耐药菌株的感染使病死率大幅增加，其治疗已成为临床上的难题。黄连作为清热解毒类中药，具有广谱抗菌作用，在临床中用于治疗毒热、泄泻痢疾、高热烦躁、痈疽疔毒、口疮等病症，并且能够迅速止痛、消炎解毒、预防感染、收敛防溃、止血生肌、化腐生肌、修复创面、消肿排脓，还具有抑菌和抗病毒、抗原虫等作用。加以环丙沙星作为第三代喹诺酮代表药品，是以细胞的脱氧核糖核酸为靶，主要抑制细菌细胞内的脱氧核糖核酸旋转酶，通过DNA旋转酶的结合，破坏DNA的结构，使DNA形成超螺旋酸酶，阻止DNA的复制，而导致细菌死亡，具有抗菌谱广，作用迅速，对革兰氏阴性、阳性，特别是对绿脓杆菌有较强作用，而且是对静止的细菌及繁殖的细菌均有杀灭作用。临床研究表明，环丙沙星对绿脓杆菌引起的尿路感染治疗有效率达到80%-85%，二药合用对绿脓杆菌的感染更有显著协同作用。这为临床解决绿脓杆菌耐药性提供一些线索，并为联合用药治疗细菌性感染以及开发新药有所帮助。

但本实验是体外实验，使用价值有待进一步研究。另外，黄连水煎液在制备、储存、携带以及口感方面都存在不足之处，有待解决。

参考文献

[1]王济兴，夏瑞雪.144株绿脓杆菌药敏结果分析.河北医药,2010,32:2278-2279.

[2]李红霞,李从荣，施金玲，等.医院铜绿假单胞菌感染体外耐药动态观察.中华医院感染学杂志,2002,12:621-622.