人乳头状瘤病毒杂交分型检测技术在临床中的应用

人乳头状瘤病毒杂交分型检测技术在临床中的应用

高学强曹献芹郭珊

高学强曹献芹郭珊（新乡市中心医院检验科453000）

【摘要】目的对人乳头状瘤病毒杂交分型技术在临床应用的分析研究。方法对1106例患者取宫颈脱落细胞进行HPVDNA检测和分型同时进行薄层液基细胞学检测（TCT）,异常者做组织病理学诊断。结果1.1106例患者中HPV阳性682例。2.1106例患者中，细胞学异常的705例，并对异常者做病理学诊断，结果为：慢性炎症165例，CINⅠ145例，CINⅡ157例，CINⅢ169例，宫颈癌69例。3.HPVDNA阳性病例在各组中分布：细胞学正常的有106例（26.4％），慢性炎症有101例（61.2％），CINⅠ有109例（89.8％），CINⅡ有141例（89.8％），CINⅢ157例（92.9％），宫颈癌有68例（98.6％）。结论在人乳头瘤病毒感染检测中应用快速导流杂交分型技术，对临床有很重要的指导作用。

【关键词】基因分型导流杂交基因芯片技术宫颈上皮内瘤变（CIN）

流行病学和基础研究已经证实人乳头状瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）感染是宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasia，CIN）和宫颈癌的主要原因。HPV有多种基因（也称亚型）,而且不同的HPV亚型的感染其致病性和后果也有差异[1]。根据HPV感染致宫颈癌发生的危险程度，将HPVDNA分为高危型和低危型。本文通过对我院门诊和住院患者的宫颈细胞进行了HPV感染的检测，并对其做了分型，报告如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1研究对象自2010年3月到2011年5月，收集来我院妇产科就诊的1106例女性患者，有性生活史，年龄在18-79岁之间。

1.1.2试剂人乳头状瘤病毒分型检测试剂盒由凯普生物有限公司提供。

1.1.3仪器DA7600型PCR扩增仪（中山大学达安基因股份有限公司），医用核酸分子快速杂交仪（凯普生物有限公司）。

1.2方法

1.2.1标本采集要求：①3天内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗。②24小时内不应有性行为。③检查应在非月经期内进行。

1.2.2标本采集：取材前先用消毒棉试纸将宫颈口的分泌物擦去，然后用凯普专用的宫颈刷顺时针转动3周取出，放入盛有细胞保存液的小瓶内。

1.2.3HPVDNA的检测与分型实验按：①DNA提取；②PCR扩增；③导流杂交分型。进行各步骤均按说明书严格操作。

1.2.4薄层液基细胞学检测（TCT）实验按：①制片；②染色；③镜检进行，各步骤按说明书严格操作。

1.2.5宫颈组织病理学诊断对TCT检测出异常患者进行阴道镜下宫颈多点活检做组织病理学诊断。按照组织病理诊断结、果，将患者分为慢性炎症、CINⅠ组（轻度）、CINⅡ组（中度）、CINⅢ组（重度）、宫颈癌组。

2结果

对1106例患者进行了TCT检测，其中细胞学异常的705例，并对异常患者进一步做病理学诊断，结果为：慢性炎症165例，CINⅠ145例，CINⅡ157例，CINⅢ169例，宫颈癌68例。对1106例患者均进行例HPVDNA的检测，正常患者的感染率明显低于炎症、CIN、宫颈癌（p<0.05），炎症低于CIN和宫颈癌（p<0.05），CINⅠ低于CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌(p<0.05)，CINⅡ与CINⅢ无差别（p>0.05），CINⅡ和CINⅢ低于宫颈癌（p<0.05）。见表1。

表11106例患者TCT病理HPVDNA检测比较

对682例HPV阳性患者均进行了NDA分型，结果显示高危型感染率正常与炎症无差别（p>0.05），炎症低于CIN和宫颈癌（p<0.05），CINⅠ低于CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌(p<0.05)，CINⅡ与CINⅢ无差别（p>0.05），CINⅡ低于宫颈癌（p<0.05），CINⅢ与宫颈癌无差别（p>0.05）。见表2。

表2HPV基因分型与病理学诊断结果比较

3讨论

大量研究发现，人乳头瘤病毒(HPV)与宫颈癌关系密切，被认为是导致宫颈癌的致病因素［2，3］。流行病学和分子生物学研究资料表明，HPV与宫颈癌以及癌前病变有密切关系。一般HPV感染无临床症状，或处于亚临床感染状态，但是可导致严重后果。本文对1106例来就诊的患者进行HPV检测，682例呈现阳性结果，感染率达到61.7％.经过统计分析，正常患者的感染率与炎症、CIN、癌症有差别（p<0.05），炎症与CIN和宫颈癌有差别（p<0.05），CINⅠ与CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌有差别（p<0.05），CINⅡ与CINⅢ无差别（p>0.05），CINⅡ和CINⅢ与宫颈癌有差别（p<0.05）。本研究还发现，在正常人群中也有一定的感染率，而此类患者是处于亚临床感染状态，也预示着宫颈上皮内瘤变的存在。本研究发现随着宫颈病变程度的加重，HPV感染的阳性率也逐渐升高，宫颈癌的阳性率达到了98.6％，并且HPV双重与多重感染也随着增加。上述结果表明如果持续携带HPV病毒，感染者将处于继发癌前病变的高度危险中，也同时说明，HPV感染是导致宫颈癌的主要原因，并且与宫颈癌的发生、发展密切相关。

目前，已知的HPV有100多种，其中30余种可以从感染的生殖道组织中分离出来。根据病毒致癌性的大小可分为两大类：①低危型HPV，包括6、11、42、43、44等。感染低危型HPV，可以导致轻度宫颈上皮内瘤样变(CINⅠ)和部分中度宫颈上皮内瘤样变（CINⅡ）。②高危型HPV，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等。感染高危型HPV，可导致中度宫颈上皮内瘤样变（CINⅡ）、重度宫颈上皮内瘤样变（CINⅢ）和侵润性宫颈癌。本文对所检测的HPVDNA进行了基因分型，并经过统计分析了两型的关系，结果显示出正常与炎症无差别（p>0.05），炎症与CIN和宫颈癌有差别（p<0.05），CINⅠ与CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌有差别（p<0.05），CINⅡ与CINⅢ无差别（p>0.05），CINⅡ与宫颈癌有差别（p<0.05），CINⅢ与宫颈癌无差别（p<0.05）。正常组和炎症组已及轻度宫颈上皮内瘤样变（CINⅠ）组，其HPV基因分型基本是低危型和中国人常见的亚型，而中重度宫颈上皮内瘤样变（CINⅡ、CINⅢ）和癌症以HPV基因分型高危型为主，其结果与相关文献报道相吻合，从而进一步说明，HPV的基因分型与宫颈病变严重程度是相关的，宫颈病变越严重与高危型越密切［4］。

参考文献

[1]张菊，高燕娥等.高通量人类乳头瘤病毒分型基因诊断方法的研究［J］.中华检验医学杂志，2003,25（6）：60.

[2]程险峰，穆锦江.人乳头瘤病毒18型主要衣壳蛋白原核表达系统的构建及鉴定［J］.中华医学感染学杂志，2005,15（8）：845-848.

[3]陈乐真，主编.妇产科诊断病理学［M］.北京：人民军医出版社，2002.116.

[4]BoschFX,LorinczA,et.Thecausalbetweenhumanpapillomavirusandcervicalcancer［J］.JclinPatrol,200255(4:)244.