美国BDBBLCRYSTAL细菌鉴定仪影响因素分析及控制

美国BDBBLCRYSTAL细菌鉴定仪影响因素分析及控制

刘典浪

刘典浪（广东省深圳市宝安区福永人民医院518103）

【中图分类号】R445【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）14-0027-02

【摘要】目的为了更好地了解和掌握最新引进的一台美国进口BDBBLCRYSTAL细菌鉴定仪的各影响因素以便指导日常工作。方法综合各种影响因素通过操作标准菌株大肠埃希氏菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923的整个细菌鉴定过程，从而掌控各影响因素的影响情况。结果（1）菌悬液麦氏度过低如0.3和(或)培养时间过短如<16小时就有可能出现错误的鉴定结果。（2）使用金属接种环配制菌悬液将导致鉴定无结果或需温育时间延长。（3）使用菌菌龄太长和（或）温育时间过长将导致鉴定无结果。（4）菌悬液不均匀将导致鉴定无结果。结论要得到正确的鉴定结果必须严格遵循：使用菌龄＜24小时菌落，利用非金属配制麦氏度0.5左右的均匀的混悬液,温育时间控制在18-24小时。

【关键词】BDBBLCRYSTAL细菌鉴定仪影响因素

【Abstract】ObjecktiveTounderstandandknowofsomemaineffectsofInstrumentidentificationofbacteria-BDBBLCRYSTALfromAmericaInordertoinstructtheroutinework.MethodssynthesizeseachkindofinfluencingfactorandthroughoperatingentireidentificationofbacteriaprocessforstandardstraincolonbacillusATCC25922andgoldenyellowstaphylococcusATCC25923thuscontrolseachinfluencingfactortheinfluencesituation.Results（1）：ThefungushungfluidMaitopasslowlylike0.3and(or)theraisetimeisexcessivelyshortlikelessthan16hourshasthepossibilitytopresentthewrongappraisalresult.（2）：useingmetalvaccinationlinkmatchestheantibacterialtohangthefluidwillcausetoappraiseinefficientormustnurturethetimeexpandwarm（3）useingoldagefunguscelland(or)nurturesthetimetobeexcessiveelylongwarmwillcausetoappraiseinefficiently.（4）thefunguswillhangthefluidnon-uniformtocausetoappraiseinefficiently.ConclusionToobtainthecorrectappraisalresultmustfollowstrictly:Usefunguscellage<24hourcolony；UsenonmetallicmaterialtomaketheevensuspensiontoaboutMai0.5andNurturesthetimingcontrolwarmin18-24hours.

【Keywords】BDBBLCRYSTALIdentificationofbacteriameterInfluencingfactor

本科新近引进了一台美国进口BDBBLCRYSTAL细菌鉴定仪，这是一个非常敏感的鉴定糸统。它的反应孔的设计除了传统的生化反应外还增加了荧光酶反应和产色酶反应，从而使它的鉴定更具先进性和敏感性，也奠定了其能够快速鉴定细菌的基础。但随之而来的就是对操作要求更加严格，以便控制诸多的影响因素，否则反而会鉴定出错误的结果或造成鉴定无结果。影响因素主要包括：菌龄、配制菌悬液材料、菌悬液浓度（麦氏度）、菌悬液均匀度、温育时间等。笔者就此诸多影响因素的影响情况进行了分析和探讨，详述如下：

1材料和方法

1.1材料：

1.1.1美国BD公司进口BDBBLCRYSTAL细菌鉴定仪一台；CrystalSpec比浊仪一台。

1.1.2金属制接种环；灭菌棉签杆若干。

1.1.3标准菌株ATCC25923金黄色葡萄球菌;标准菌株ATCC25922大肠埃希氏菌，均来自于专门的供应机构。

1.2方法:笔者取上述两种作为已知结果的标准菌株分别作为革兰氏阳性球菌和革兰氏阴性杆菌的一个代表，按照日常工作要求的操作流程分别进行操作和鉴定：首先按麦氏度0.5±0.2分为三组:0.3;0.5;0.7。用CrystalSpec比浊仪比浊，以考查麦氏度的不同的影响。而其中0.5为正常要求的麦氏度,其他分别作为一个过低和过高麦氏度的代表。对于0.5正常麦氏度组笔者又按菌龄分为小于24小时和菌龄为48小时两组，以考查菌龄不同的影响情况，其中菌龄小于24小时为指定要求时间。再在菌龄为小于24小时组分为使用金属制接种环配制菌悬液和使用灭菌棉签杆（非金属物）配制菌悬液两组，以考查金属物配制菌悬液对细菌鉴定的影响（正常要求为非金属物配制）。另外对于不均菌悬液对细菌鉴定的影响也对上述两种菌进行了考查。以上各组的鉴定均按培养时间小于16小时；18-24小时：36小时；48小时分为四次鉴定结果，以考查培养时间不同对结果的影响情况，其中18-24小时是正常要求培养的时间。

1.3结果：根据上述诸多影响因素设计，通过BDBBLCRYSTAL细菌鉴定仪鉴定，以下是对标准菌株ATCC25923金黄色葡萄球菌和标准菌株大肠埃希菌ATCC25922的观察试验结果（见附表）（注：括弧中为标准菌株ATCC25923金黄色葡萄球菌的结果）：

1.4讨论：在此笔者首先把厂商推介时认为操作必需遵循的基本原则也即是影响因素做个介绍，主要有：①必需使用非金属物配制菌悬液，因为使用金属接种环灼烧产生的金属氧化物混入其中被认为对荧光显色有干扰而使鉴定结果产生错误；②菌悬液麦氏度为0.5;③纯培养物菌龄需小于24小时;④菌悬液需混合均匀⑤培养时间必需在18-24小时。对照附表的检测情况，对应地笔者以为以下几点在日常工作中应引起特别重视：①对于必需使用非金属物配制菌悬液的问题，从附表(Ⅲ)纵行中可见：本实验对两标准菌鉴定结果在规定时间（18-24小时）内产生了影响，导致了鉴定无结果。但随着培养时间的延长两个标准菌都得出了正确的鉴定结果，因此笔者认为这种灼烧产生的金属氧化物对荧光显色的干扰是暂时抑制性的，同时由于混入量有限从而影响也是有限的。所以延长培养时间又可鉴定出来。但笔者认为本例如此而对其他各种细菌鉴定的影响是否如此存在很多不确定性。因此笔者认为这一点——非金属物配制菌悬液的问题应该严格遵循，以消除这种不确定性。而不应认为延长培养时间就可做出鉴定。②对于菌悬液麦氏度为0.5的问题，在本例中笔者发现在正常规定培养时间18-24小时三个麦氏度都能鉴定出正确结果，未见有影响到。但笔者以为不能据此就认为可以随便配制菌悬液麦氏度，原因是对不同的细菌可能影响有不同。所以还是应遵循以0.5麦氏度为标准。③对于纯培养物菌龄需小于24小时的问题，本例中在正常培养时间18-24小时内也未见有影响：两个标准菌两个菌龄（小于24小时及48小时）都得出了正确的结果。但菌龄为48小时、培养又超过规定时间如36小时甚至48小时时，两个标准菌却都鉴定无结果。而与此相比菌龄<24小时者却都还能鉴定出来，说明菌龄还是能产生一定的影响的。特别是对别的其它的细菌的影响如何有不确定性，所以应预以重视使用小于24小时菌龄问题。④从附表纵行(Ⅵ)中可见，菌液混合均匀问题十分重要，即使在其它任何影响因素都不存在的情况下，单就此一项就足以导致鉴定无结果。原因可能是由于各生化反应孔它设计要求菌液麦氏度为0.5,在此浓度下,在规定时间内细菌通过对数生长,利用其中物质使反应达到最佳最适合本菌特点的显色或显荧光状态,从而得到正确鉴定。但当菌液不均，有成小团或小颗粒菌团落入某个或某些反应孔，就可导致某个或某些反应孔麦氏度过高，在相同的培养时间下细菌过度生长，而导致反应孔的显色或显荧光状态受干扰而非最合适状态，就出现鉴定无结果。⑤从附表中可见，当提前上机鉴定即培养时间小于16小时可出现错误的鉴定结果。本例就把标准菌株ATCC25923金黄色葡萄球菌错定为溶血葡萄球菌。其原因可能是反应孔反应不完全显色不典型所致。本例中当超过培养规定时间如培养至36小时、48小时，除菌龄为48小时的培养结果产生了影响外（鉴定无结果），其它未见有影响。但对别的其它菌影响如何还未可知。因此笔者以为对于培养时间应于重视。

综上所述为了避免上述各种因素的影响，在日常工作中得到正确可靠的鉴定结果，笔者以为必须严格遵循：使用菌龄＜24小时菌落，利用非金属材料(如灭菌棉签杆等)配制麦氏度0.5左右的均匀的混悬液,温育时间控制在18-24小时。