重瓣铁线莲提取物化学成分初步研究

重瓣铁线莲提取物化学成分初步研究

林玲朱扶蓉（通讯作者）

林玲朱扶蓉（通讯作者）

(福建卫生职业技术学院福建福州350101)

【摘要】目的：研究重瓣铁线莲中主要化学成分，为进一步研究提供基础。方法：本文采用系统化学预实验，通过各成分的特征反应，对重瓣铁线莲茎部的冷热水、95％乙醇、酸水乙醇、石油醚的提取液进行研究，初步推断重瓣铁线莲茎部主要化学成分。结果：重瓣铁线莲可能含有氨基酸、蛋白质、还原糖、糖类、皂苷类、生物碱、黄酮类以及少量的酚类和鞣质、有机酸、内酯、香豆素、挥发油、甾体和萜类等化学成分。结论：初步推断重瓣铁线莲茎部含有多种有效成分，为重瓣铁线莲的进一步开发利用提供了实验基础。

【关键词】重瓣铁线莲化学成分初步研究

【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）27-0034-03

StudiesonthechemicalconstituentsofcrudeextractsfromClematisfloridaThunb.var.plenaD.Don

LIN-lingZHUFu-rong*(FujianHealthCollageFuzhouFujian350101，China）

【Abstract】Objective：TostudythemainchemicalcomponentsofClematisfloridaThunb.var.plenaD.Don，provideabasisforfurtherresearch.Method：Thispaperusethethesystemofchemicalpre-experiment，bythereactionresulttoresearchthehotandcoldwater95%ethanol、acidicwaterethanol、petroleumetherextractofthestemofClematisfloridaThunb.var.plenaD.Don,toconcludedmainchemicalcomponents.Result：ClematisfloridaThunb.var.plenaD.DonmighthaveAminoacids,proteins,sugar,carbohydrates,saponins,alkaloids,flavonoidsandsmallamountsofphenolsandtannins,organicacids,lactones,coumarin,volatileoil,steroidsandterpenoids.Conclusion：Thestemscontainavarietyofactiveingredients,itprovideanexperimentalbasisforthefurtherdevelopmentandutilization

【Keywords】ClematisfloridaThunb.var.plenaD.Donchemicalcomponentspreliminarystudy

重瓣铁线莲（ClematisfloridaThunb.var.plenaD.Don）为毛茛科、铁线莲属植物，毛茛科铁线莲属植物大多为多年生木质或草质藤本，是一类观赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物[1-2]。在王文采[3]的新系统中，全世界约有铁线莲属植物335种，广泛分布于除南极洲以外的各大洲。中国铁线莲属植物极其丰富，约有147种，而重瓣铁线莲属于铁线莲属中的栽培变种。位于福建省宁德市福安赛岐镇大象村也有进行人工栽培，在当地已有100多年的历史，被当地畲族人民称为“十二时辰”。其作为畲药的一种，具有很高的药用价值。但是目前对铁线莲的研究很少，主要集中于栽培养植部分，对于其中主要成分及药用活性研究鲜见报道，为了扩大药用资源，保护民族用药，进一步研究重瓣铁线莲是十分必要的。

2材料与方法

2.1材料

重瓣铁线莲采于宁德市福安赛岐镇大象村。

2.2试剂

石油醚、95%乙醇、正丁醇、浓盐酸、浓硫酸、氢氧化钠、浓氨水、冰醋酸、醋酸酐、镁粉、氯仿、苯酚、硫酸铜、茚三酮、结晶硫酸铜、酒石酸钾钠、α-萘酚、三氯化铁、铁氰化钾、氯化铁、次硝酸铋、碘化钾、氯化汞、溴酚蓝、硼酸、葡萄糖均为国产分析纯。2%盐酸试剂、双缩脲试剂、茚三酮试剂、斐林试剂、α-萘酚试剂、1%三氯化铁试剂、氯化铁-铁氰化钾试剂、改良碘化铋钾试剂、碘化汞钾试剂、1%氢氧化钠试剂、10%氢氧化钠试剂、0.1%溴酚蓝试剂、1%硼酸水溶液试剂、sevag试剂、5%苯酚液试剂均按照实验要求配制（见附录）。

2.3仪器

SHB-I22循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；RE5298A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；紫外-可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)，台式离心机（上海安容科学仪器厂）。

2.4方法

根据重瓣铁线莲中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从重瓣铁线莲组织内溶解出来的方法。根据极性的大小不同，选用石油醚--乙醇--水作为溶剂，制成石油醚、乙醇、酸水乙醇、冷水和热水提取液。并采用系统化学预实验，通过各成分的特征反应，对重瓣铁线莲茎部的冷热水、95％乙醇、酸水乙醇、石油醚的提取液进行研究，初步推断重瓣铁线莲茎部主要化学成分。

2.4.1样品预处理

取一定量自然晒干的重瓣铁线莲茎部，经粉碎后作为实验粗粉，（粉碎是为了更好的提取化学成分）备用。

2.4.2重瓣铁线莲化学成分提取[4-5]

2.4.2.1石油醚提取液

称取样品粗粉50g，加入石油醚（60～90℃）300mL，于水浴锅上加热（80℃）回流（1.5h）2次，合并滤液。临用时根据需要将提取液稀释或浓缩。该供试液供挥发油、油脂、萜类、甾体化合物等成分检查。

2.4.2.2乙醇提取液

称取样品粗粉50g，加入95%乙醇300mL，于水浴锅上加热（80℃）回流（2h）2次，过滤，合并滤液。临用时根据需要将提取液稀释或浓缩。该供试液滤液供黄酮、醌类物质，香豆素，强心苷，有机酸，鞣质等成分检查。

2.4.2.3酸性乙醇提取液

取20mL乙醇提取液，加1mL盐酸酸化，抽滤，滤液加3mL浓氨水碱化，分次加15mL氯仿振摇，取氯仿层，加10mL2%盐酸，取水层。该供试液作生物碱检查。

2.4.2.4冷水浸液

称取样品粗粉20g，置于500mL锥形瓶中，加蒸馏水90～100mL，室温浸泡过夜，过滤，收集滤液。临用时根据需要将提取液稀释或浓缩。该供试液供氨基酸，蛋白质等成分检查。

2.4.2.5热水提取液

称取样品粗粉50g，于水浴锅上加热（80℃）回流（2h）2次，过滤，合并滤液。临用时根据需要将提取液稀释或浓缩。该供试液供糖类，苷类，酚类，有机酸，皂苷类，鞣质等成分检查。

2.4.3化学成分系统预试验

各提取部位的化学成分系统预试验采用化学特征反应定性和纸层析定性试验[6-7]。

2.4.3.1氨基酸、蛋白质类

（1）双缩脲试验：取冷水浸液1mL，加入10%氢氧化钠水溶液2滴，摇匀，再滴加0.5%硫酸铜水溶液1-2滴，摇匀，观察混合液的颜色变化。

（2）茚三酮试验：取冷水浸液1mL，加入0.2%茚三酮乙醇溶液2-3滴，摇匀，于沸水浴中加热5分钟，冷却后，观察混合液的颜色变化。

2.4.3.2糖类

（1）斐林反应：取热水提取液1mL，加入新配制的斐林(Fehling)试剂4-5滴，在沸水浴上加热5分钟，观察混合液是否沉淀。

（2）α-萘酚试验：取热水提取液1mL，加入5%α-萘酚乙醇液2-3滴，摇匀，沿试管壁缓缓加入浓硫酸lmL，观察混合液的颜色变化。

2.4.3.3皂甙类

（1）泡沫试验：取热水提取液1-2mL置于试管中，密塞，激烈振摇2分钟，观察试管中泡沫。

（2）醋酐－浓硫酸反应：取热水提取液2mL，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加冰醋酸1mL溶解，再加醋酸酐1mL，浓硫酸1滴，观察混合液的颜色变化。

2.4.3.4酚类化合物和鞣质类

（1）三氯化铁试验：取热水提取液及乙醇提取液各1mL，（若提取液为酸性，可直接进行检查，若为碱性应先加醋酸酸化），加1%三氯化铁试剂1-2滴，观察混合液的颜色变化。

（2）氯化铁-铁氰化钾反应：取热水提取液及乙醇提取液分别滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒氯化铁-铁氰化钾试剂，观察其斑点颜色变化。

2.4.3.5生物碱

碘化铋钾试验：取酸性乙醇提取液1mL，加入碘化铋钾试剂1-2滴，观察混合液是否沉淀。

碘化汞钾试验：取酸性乙醇提取液1mL，加入碘化汞钾试剂1-2滴，观察混合液是否沉淀。

2.4.3.6有机酸类

（1）pH试纸试验：取热水提取液及乙醇提取液，分别用pH试纸检查其pH值。

（2）溴酚蓝试验：取热水提取液及乙醇提取液滴于滤纸片上，待干燥后，喷洒0.1%溴酚蓝的95%乙醇溶液，观察其斑点颜色变化。

2.4.3.7黄酮类

（1）盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1mL，加入镁粉少许，再加入浓盐酸2-3滴（必要时水浴加热），观察混合液的颜色变化。

（2）氨熏试验：取乙醇提取液滴于滤纸片上，干燥后，置于浓氨水瓶上熏半分钟，观察其斑点颜色变化。

2.4.3.8蒽醌类

（1）碱液试验（Borntrager反应）：取乙醇提取液1mL，加入10%氢氧化钠水溶液1mL，观察混合液的颜色变化。

（2）硼酸溶液试验：取乙醇提取液滴于滤纸片上，待于燥后，喷洒1%硼酸水溶液，观察其斑点颜色变化。

2.4.3.9内酯、香豆素

（1）开闭环反应：取乙醇提取液各1mL，加1%氢氧化钠试剂1-2滴，加2%盐酸试剂1-2滴，观察混合液的颜色变化。

（2）三氯化铁试验：取乙醇提取液各1mL，加1%三氯化铁试剂1-2滴，观察混合液的颜色变化。

2.4.3.10挥发油、油脂类

（1）油斑试验：取石油醚提取液滴于滤纸片上，其油斑在室温下是否可挥发不留痕迹。

2.4.3.11甾体及三萜类

（1）醋酐-浓硫酸反应：取乙醇提取液2mL，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加冰醋酸1mL溶解，再加醋酐1mL，然后滴加浓硫酸1滴，观察混合液的颜色变化。

（2）氯仿-浓硫酸反应：取乙醇提取液2mL，置于小瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残留物加氯仿1mL溶解，并转移至小试管中，沿管壁加入浓硫酸1mL，观察氯仿层和硫酸层的颜色变化。

3结果与分析

化学成分系统预试验和纸层析法试验结果如表1。重瓣铁线莲茎部中主要活性化学成分有氨基酸、蛋白质、还原糖、多糖、皂苷类、生物碱、黄酮类、甾体和萜类以及少量的酚类和鞣质、有机酸、内酯、香豆素、挥发油等化学成分。

表1化学成分鉴定结果

Tab1RusultsoftheidentificationofChemicalcomposition

检验项目提取液试验方法试验结果

氨基酸、蛋白质冷水提取液茚三酮试验+

冷水提取液双缩脲试验+

糖类热水提取液斐林反应+

热水提取液α-萘酚试验+

皂苷类热水提取液泡沫试验+

热水提取液醋酐-浓硫酸试验+

酚类和鞣质热水及乙醇提取液三氯化铁试验-

热水及乙醇提取液氯化铁-铁氰化钾试验+

生物碱酸性乙醇提取液碘化铋钾试验+

酸性乙醇提取液碘化汞钾试验+

有机酸热水及乙醇提取液pH试纸试验pH<6

热水及乙醇提取液溴酚蓝试验+

黄酮类乙醇提取液盐酸-镁粉试验+

乙醇提取液氨熏试验+

蒽醌类乙醇提取液碱液试验-

乙醇提取液硼酸试验-

内酯、香豆素乙醇提取液开闭环试验+

乙醇提取液三氯化铁试验-

挥发油石油醚提取液油斑试验+

甾体和萜类石油醚提取液氯仿-浓硫酸试验+

石油醚提取液醋酐-浓硫酸试验-

4结论

通过经典的中草药化学成分提取分离方法，经试管预试法初步确定。重瓣铁线莲茎部可能含有氨基酸、蛋白质、还原糖、多糖、皂苷类、生物碱、黄酮类以及少量的酚类和鞣质、有机酸、内酯、香豆素、挥发油、甾体和萜类等化学成分。但仍需要进行色谱分离、光谱鉴定等实验，确定重瓣铁线莲的单体化合物，以便为其活性成分的研究提供参考。

参考文献

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基金号：福建省中青年教师教育科研项目A类JA13415