加温抑制人舌癌细胞增殖

(整期优先)网络出版时间:2013-08-18
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加温抑制人舌癌细胞增殖

王书彦翟雨佳曹丽琴

王书彦翟雨佳曹丽琴

河北正定县人民医院口腔科河北正定050800

通讯作者:王书彦,大学本科,主治医师。【摘要】目的:研究加温对舌癌细胞增殖活性的影响,探讨高温治癌的作用机制。方法:对舌癌细胞Tca-8113进行体外加温,采用流式细胞术及MTT法研究加温后舌癌细胞增殖活性的变化。结果:Go~G1,S期细胞百分数在加温后无明显改变,而加温10minG2~M期细胞百分数则迅速降低,但它不随加温时间的延长而改变。结论:加温能使分裂期细胞减少,细胞的增殖活性降低,从而抑制细胞的增殖,达到治疗肿瘤的目的。

【关键词】加温;舌癌细胞;增殖

【中图分类号】R24125【文献标识码】B【文章编号】1674-8999(2013)08-0210-01

口腔黏膜鳞状细胞癌是口腔颌面部常见恶性肿瘤之一,其发展快、转移早、致死率高。细胞无限制的快速生长繁殖是恶性肿瘤的特征之一,改变细胞增殖活性,降低肿瘤恶性程度是肿瘤治疗的一个目的[1]。近30年,肿瘤热疗在细胞生物效应研究等方面取得了许多研究成果,在临床应用上也获得了很大的进展,并显出很好的效果[2]。本文采用人舌癌细胞Tca-8113进行体外加温,采用流式细胞术和MTT酶标技术检测细胞DNA含量变化,以了解高温对肿瘤细胞增殖的影响,从而探讨高温治癌的机制。

1材料和方法

11材料:人舌癌细胞系Tca-8113购自中科院上海药物研究所提供。

12方法:将冷冻保存的Tca-8113细胞复苏后接种于含10%胎牛血清、100IU·mL-1青霉素、100mL-1链霉素、4mmol·L-1谷氨酰胺、1mol·L-1HEPES的RPMI1640培养液中,于37℃、5%CO2的培养箱内培养。

13流式细胞术对细胞Tca-8113DNA含量测定:取指数生长期Ra-8113细胞,调整细胞浓度为5×105/nd,接种于25rnl培养瓶中,设1个对照组(37"C条件下培养24h)和10个实验组(分别给予43℃加热10、20、30min后继续培养24h,43℃加热40min后继续培养0、3、6、12、24、48、72h),用消化液消化收取细胞,1:3醋酸甲醇固定,10%RNA酶37℃消化10min,离心后加入碘化丙锭(PI)染液1ml,室温下染色20min,200目尼龙网滤过细胞,CoulterEpics流式细胞仪检测Ra-8113DNA含量。

14MTT法测定Tca-8113细胞增殖:将呈指数生长的Tca-8113细胞,调整细胞浓度为5×105、/ml,接种于25ml培养瓶中,设1个对照组(即37℃培养24h)和4个实验组(实验组分别给予43℃加热10、20、30、40min后继续培养24h),用消化液收取细胞调整细胞浓度为5×104接种于96孔板,培养24h,每孔滴入5mg/ml的MTT20u1DMSO继续孵育4h,终止培养,快速翻板倒出含有MTT的培养液,再加入200ulDMSO,放震荡器震荡15min使沉淀的结晶充分溶解,用Bio-Rad550酶标仪,以580nm波长测量,测定每孔oD值,按下列公式计算抑制率:抑制率=(对照组平均OD值-实验组平均0D值/对照组平均OD值)X100%。

2结果

流式细胞术测定Tca-8113DNA含量结果显示G0~G1,S期细胞百分数在加温后无明显改变,而G2~M期细胞百分数在加温10min时迅速降低,但它不再随加温时间和培养时间的延长而发生明显改变,这提示加温促使细胞的增殖活降低,从而抑制细胞增殖,达到治疗肿瘤的目的。

3讨论

随着科学技术的发展,热疗逐渐引起关注,在肿瘤综合治疗手段中发挥积极作用。

细胞无限制的的快速生长繁殖是恶性肿瘤的特征之一,对细胞DNAA含量进行测定,将能提示其功能、分化及活性。流式细胞仪(flowcy-tometry,FCM)测定单个细胞DNA含量的方法先进、客观精确,敏感快速,一次检测的细胞数多,变异系数小[3]。本实验采用流式细胞检测高温处理前后舌癌细胞的DNA含量,发现G0~G1期、S期的细胞百分比无明显变化,G2~S期细胞百分比在加温10min即迅速降低,但是不再随加温时间的延长而有明显变化,这提示加温可使分裂期细胞减少,抑制细胞的增殖,从而达到治疗肿瘤的目的。MTT法结果也显示高温能使细胞增殖活性降低,细胞抑制率增高,这进一步证实了高温对肿瘤细胞的增殖性具有抑制作用。因此热疗可以抑制肿瘤细胞的DNA多聚酶、连接酶活性,导致DNA、RNA合成障碍。肿瘤细胞生长较快,癌细胞普遍处于慢性缺氧的酸性环境中,在酸性环境下热疗对诱发肿瘤细胞凋亡、扰乱细胞周期十分有利[4]。

综上所述,我们的研究表明,高温抑制人舌癌细胞增殖。因此热疗同转基因技术一样,可以抑制肿瘤细胞的生长及转变,从多方面发挥抗癌功能,相信随着研究的逐步深入,热疗必将为口腔鳞癌的治疗带来新的曙光。

参考文献

[1]王安训,曾荣生,丁学强,等.全反式维甲酸诱导分化舌癌细胞株的实验研究[J].中山医科大学学报,2000,21(1):1720

[2]明东,万柏坤,胡勇.肿瘤热疗及相关超声实用新技术研究研究进展[J].生物工程医学研究,2006,23(4):253256

[3]商庆新,张涤生,关文祥,等.丹参与川芎嗪对瘢痕成纤维细胞DNA含量及细胞周期进程的影响[J].中国修复重建外科杂志,1998,12(6):235237

[4]刘宝瑞,钱晓萍.肿瘤热化疗的基础与临床研究进展[J].国外医学肿瘤学分册,2003,31(1):3437