猩红热的标准实验诊断方法

猩红热的标准实验诊断方法

陈伟红1董莉2

陈伟红1董莉2(1广东省边防七支队卫生队518000;2牡丹江消防支队卫生队157000）

【中图分类号】R515.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2009)29-0122-01

1A组链球菌的分离

1.标本采集采取咽拭子、伤口炎性分泌物等标本。

2.分离培养可直接划线接种血琼脂平板进行分离培养。观察菌落形态及溶血现象，形成灰白色、透明或不透明、表面光滑、有乳光、直径0.5～0.75mm，圆形突起的小菌落，菌落周围形成2～4mm宽、界限分明、完全透明的溶血环。进一步涂片行革兰氏染色，证实为成链状排列的革兰氏阳性球菌，菌呈圆形或卵圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列、长短不一。分纯后进一步鉴定。

2A组链球菌的鉴定

2.1一般鉴定可用以下试验加以鉴定。

2.1.1杆菌肽敏感试验：95％以上菌株对杆菌肽(每纸片含0.04IU)敏感，即抑菌环在10mm以上。方法是在血液琼脂平板上，用无菌棉棒将被检菌的肉汤培养物进行涂抹接种后，用无菌棉棒将被检菌的肉汤培养物进行涂抹接种后，用无菌镊杆菌肽纸片粘于平板上，于35～37℃培养18～24h观察结果。抑菌环大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。

2.1.2SXT敏感试验：SXT纸片好三甲氧苄氨嘧啶1.25mg和碘胺甲基异噁唑23.75mg。A群链球菌对SXT不敏感，操作方法同上。

2.1.3糖发酵试验：本菌发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖和水杨素，产酸不产气，不发酵菊糖，阿拉伯糖和棉子糖。

2.2血清学分群法鉴定

2.2.1沉淀法：先制备多糖体群抗，提取方法较多,有Lancefield热盐酸提取法、甲酰胺提取法、高压提取法、酶提取法及亚硝酸提取法。以高压提取法最为简单，于30mlTodd-Hewitt肉汤中，接种链球菌后，置35～37℃培养24h，3000r/min离心30min，弃去上清液。将沉淀物悬浮0.5ml的0.85％生理盐水中。于1.02kg/cm2高压蒸15min，离心沉淀，上清液即为C抗原，可保存于无菌试管或瓶中备用。操作时最好在内径小的试管中进行。先将抗血清加入小试管中，再沿管壁徐徐中入上述提取物(C抗原，可用盐水稀释1：10、1：20……)，15～20min后，两液接触面出现白色沉淀环为阳性，否则为阴性。

2.2.2葡萄球菌A蛋白(SPA)协同凝集分群法：先制备SPA稳定液，将金葡萄接种琼脂斜面，于35℃24h培养后pH7.4PBS20ml洗下培养物，离心沉淀反复洗涤两次，加至原容量，再加甲醛深液使最终浓度为0.5％，置温室3h，再放入80℃水浴30min，以PBS洗2次，配成10％溶液，加硫柳汞，使最终浓度为1：10000。致敏时，将A群链球菌抗血清0.1ml加入1ml10%SPA稳定液中，置室温30min，用PBS洗两次，再悬于4h培养液10mlPBS中，加硫柳汞防腐。操作时，取培养4h的培养液10ml离心沉淀去上清液。将沉淀细菌混悬于0.3mlpH8.0的Tris缓冲液中，加0.1ml(5mg/ml)胰酶溶液，置35℃培养1h，取1滴置载物玻片上，与致敏SPA悬液1滴混匀、轻轻摇动玻片，在2min内观察是否出现凝集，结果以＋～＋＋＋＋表示。＋＋以上为阳性。