活络通胶囊治疗血栓栓塞性疾病的药理学实验研究及质量控制

活络通胶囊治疗血栓栓塞性疾病的药理学实验研究及质量控制

秦超1张悦2任启明1

秦超1张悦2任启明1

（1山东省莱芜市食品药品检验检测中心山东莱芜271100）

（2山东莱芜广播电视台山东莱芜271100）

【摘要】目的：探讨活络通胶囊的制备及对血栓栓塞性疾病治疗的药理作用。方法：利用先进的生产工艺设备，对活络通胶囊的制备、工艺流程及质量控制进行研究，同时用动物实验的方法进行药理毒理探讨。结果：动物实验结果显示：活络通胶囊对凝血功能的影响：活络通胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势(P<0.05或P<0.01)；活络通胶囊对血瘀大鼠血小板聚集率的影响比较：结果与正常组比较，模型组血液中TT、PT、APTT内源性和外源性凝血功能明显缩短；活络通胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg均能明显降低血瘀高凝大鼠模型Ⅱ因子活性，降低血小板聚集率，抑制内源性和外源性凝血系统，降低血液高凝状态,与模型组比较有明显差异(P<0.05或P<0.01)。结论：活络通胶囊对血栓栓塞性疾病治疗的药理作用明确，质量易于控制，可安全应用于临床。

【关键词】血栓栓塞性疾病；活络通胶囊；实验研究；质量控制

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2016）09-0010-02

近年来以冠脉血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势，静脉血栓栓塞导致的死亡排在心脑血管疾病和恶性肿瘤之后的第三位，严重危害人类的健康。因此，寻求积极的预防及治疗方法尤为重要，该研究通过做动物实验的方法，观察活络通胶囊治疗血栓性疾病的实验数据，进一步探讨其作用机理，为临床应用提供安全、有效的方法，该研究的目的通过观察活络通胶囊的工艺制备，探讨其质量控制标准，为临床应用提供质量保证，以获得治疗血栓性疾病的药理作用实验数据。采用寒冷刺激加肾上腺素造成血瘀模型等方法，观察活络通胶囊的毒理、药理的作用机制。研究如下：

1.质量控制

1.1处方组成

活络通胶囊的药物组成：僵蚕9g，水蛭9g，海风藤12g，陈皮12g，泽泻9g，猪苓9g，续断9g，泽兰12g，牛膝9g，丹参12g，川芎12g，赤芍12g，红花12g，桃仁10g。

1.2制备工艺

1.2.1制备方法将以上中药一十四味，如法炮制，烘干，配料、粉碎过100目筛，混匀，装0号胶囊使每粒胶囊装0.4g的药粉，即得。

1.2.2生产工艺流程炮制→配料→烘干→粉碎→过100目筛→混匀→装0号胶囊→包装→检验→合格→入库。

1.3质量控制

性状：本品为胶囊剂，其内容物为浅黄色粉末、味苦。

鉴别：取本品内容物粉末2g，加石油醚（60～90℃）10ml，超声处理30分钟，滤过、滤液蒸干，残渣加石油醚（60～90℃）1ml使溶解，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅酸G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-醋酸(10∶3∶0.1)为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

含量测定：照高效液相色谱法（参阅中国药典2015版附录ⅥD）测定。色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇（67:173:4:4）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按水蛭素峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的水蛭素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备：取该品中粉约0.5g，精密称定，置20ml量瓶中，加甲醇约18ml，浸泡4小时，超声处理（功率150W，频率20kHz）30分钟，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。该品含水蛭素（C23H28O11）不得少于0.80%。

检查：本品应符合胶囊剂项下有关的各项规定（参照《中国药典》2015年版一部附录IL）。

2.实验研究

2.1实验材料

2.1.1药品活络通胶囊临用前用蒸馏水配成不同浓度备用，批号：20140624。

2.1.2阳性对照药消栓通络片，批号：20140601。

2.1.3试剂戊巴比妥钠，国药集团化学试剂有限公司，批号WS20140401；胶原蛋白，Sigma，批号：140879；盐酸肾上腺素，批号：1409301；冰醋酸，批号：08083l；氢氧化钠，批号：2014228；活化部分凝血活酶(APTT)时间测定试剂盒，北京世堂帝科学仪器公司，批号：STG2020l-27；凝血活酶原(TT)时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：STGl010l-27；凝血酶(TT)时间测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号STG20802-19；血小板诱导剂(ADP)，北京世帝科学仪器公司。

2.1.4动物二级昆明种小鼠，雄雌各半，体重18～22g；SD大鼠，雌雄各半，体重250～350g，均由市药检所实验动物研究中心提供，生产合格征号：鲁第2011-005号。

2.2方法

2.2.1活络通胶囊对凝血功能的模型制备60只小鼠随机分为正常、阳性、活络通0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，每组12只，每天给药1次，连续给药14d，于末次给药后lh，将小鼠尾尖1cm处用利剪剪断，它即秒表开始计时，至血液凝固为止即为出血时间[1]。血液自动流出，用滤纸吸去第1滴血后，将血滴于清洁载玻片两端各1滴，立即秒表开始计时，用6号干燥针头沿血滴边缘向里轻轻挑动血滴，至针头能挑起纤维蛋白丝为止，即为凝血时间。

2.2.2活络通胶囊对血瘀大鼠血小板聚集率的模型制备60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组、活络通胶囊0.20g/kg、0.40g/kg、0.80g/kg六个剂量组，除正常对照组外，各组均造成血瘀模型。造模：参照文献[2]复制血瘀模型，但盐酸肾上腺素(Adr)的剂量及冰冻时间有所改变，具体操作如下：将1mg/mL的Adr用生理盐水稀释1倍，第1d每隔4h皮下注射0.2mL稀释后的Adr，共给3次。在每2次给药的中间时间将大鼠放入0～2℃冰水中4min进行冷刺激；第2d仍按的日剂量给予2次Adr（间隔4h），在2次给药的中间时间将大鼠放入冰水中3min进行1次冷刺激，模型即造成。48h后大鼠1％戊巴比妥钠（40mg/kg）行腹腔麻醉，腹腔静脉取血，置于3.8枸橼酸钠抗凝管中。离心，测定血小板聚集率和凝血因子[3]。

2.2.3活络通胶囊对胶原蛋白肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成的模型制备取小鼠60只，雌雄各半，随机分成正常组、阳性组、活络通胶囊0.25g/kg、0.50g/kg、1.00g/kg五组，给药14d，各组于末次给药后1h，每只小鼠尾静脉注射胶原蛋白肾上腺素混合血栓诱导剂[4]。

3.结果

3.1活络通胶囊对凝血功能的影响比较

结果(见表1)显示活络通胶囊0.50g/kg、1.00g/kg给药14d与正常对照组比较，有明显延长小鼠凝血及出血时间的趋势（P＜0.05或P＜0.01）。

4.讨论

现代医学认为，与本病有关的因素有静脉血流滞缓、静脉壁损伤、血液的高凝状态及妊娠分娩、肥胖、老年、心脏病、恶性肿瘤、口服避孕药等。本病相当于中医学的“股肿”，是由创伤、手术、妊娠、分娩、恶性肿瘤及因其它疾病而长期卧床，或长途乘车，以致久卧伤气，血行缓慢，以致瘀血阻于脉中；或因饮食不节，素食膏粱厚味，湿热内生，流注于血脉，湿热与瘀血互结，阻于络道所致。脉络滞塞不通，不通则痛；营血回流受阻，水津外溢，聚而为湿，停滞于肌肤则肿；血瘀脉中，瘀久化热，故患肢温度升高。总之，络脉血凝湿阻是本病的主要病机。针对这一病机，急性期在应用尿激酶溶栓抗凝的同时，以中医通脉活血、利湿消肿为治疗原则，自拟活络通胶囊治疗。方中桃仁、红花、水蛭、赤芍、川芎、丹参活血化瘀通脉，其中川芎行血活血，走而不守；用泽兰、取其行气利水消肿、活血化瘀通脉的双重功效，且行而不峻，祛瘀而不伤正，对肢体肿胀疗效明显；陈皮理气行气，使气行则血行，血行脉自通；泽泻、猪苓淡渗利湿消肿；牛膝引诸药直达病所；僵蚕、海风藤祛风定惊，散结止痛；续断有补肝肾、强筋骨、调血脉。诸药合用，共达通脉活血、利湿消肿之目的。辨病和辨证相结合，以病为纲，病证合参，提高了疗效，发病后能迅速控制病情，使静脉再通，不遗留后遗症或少留后遗症，既缩短了病程，也降低了病残率。

【参考文献】

[1]中华人民共和国卫生部药政管理局中药新药研究指南(药学药理学毒理学)：[M]．2004：172.

[2]陈奇．中药药理研究方法学[M]．北京：人民卫生出版社，2004：564-566

[3]张强宗，刘俊田，史小莲等．水蛭免加热提取物对高凝动物模型凝血系统及血小板聚集率的影响[J]．中国实验方剂学杂志，2006，12(5)：47-49．

[4]陈领朝，连秀峰．袁秉祥等．脑络舒通胶囊对大鼠实验性脑及动静脉血栓形成的药效与研究[J]．陕西中医,2002，23(4)376-377．

作者简介：秦超，男，大学本科，主管药师.现在山东省莱芜市食品药品检验检测中心工作。