HPLC法测定防己配方颗粒中两种生物碱的含量

HPLC法测定防己配方颗粒中两种生物碱的含量

林慧菁

林慧菁（东莞市食品药品检验所广东东莞523109）

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）36-0121-02

【摘要】目的建立防己配方颗粒中两种生物碱的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法定量防己诺林碱和粉防己碱，色谱柱：DiamonsilC18反相柱（5µm×250mm×4.6mm），流动相：甲醇-乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钾水溶液-三乙胺（45：25：30：0.3），柱温为35℃，流速：1.0mL/min，检测波长：280nm。结果HPLC法测定结果显示，色谱峰形好，分离度高，阴性对照无干扰。防己诺林碱在0.3145～3.774µg（r＝1）呈良好的线性关系，粉防己碱在0.9525～11.43µg（r＝1）呈良好的线性关系；供试品在24h内稳定（防己诺林碱RSD＝1.05％，粉防己碱RSD=1.37%）；该方法精密度高（防己诺林碱RSD＝0.92％，粉防己碱RSD=0.04%），重复性良好（防己诺林碱RSD＝1.73％，粉防己碱RSD=1.28%），平均加样回收率为：防己诺林碱99.285％（RSD＝2.49％）和粉防己碱99.33%（RSD=2.22%）。结论所建立的方法适合作为防己配方颗粒的含量测定方法。

【关键词】防己配方颗粒HPLC防己诺林碱粉防己碱

近年来，我国绝大多数的医院掀起“免煎中药”的热潮。所谓“免煎中药”，是把传统中药材进行深加工，不保留药材的外形，通过水煎煮工艺提取有效成分，制成的一种便于医院药剂科配伍、利于患者携带和服用的颗粒剂中成药。防己配方颗粒，为深圳华润三九医药股份有限公司生产的其中一种配方颗粒剂，在国内医院广泛应用。防己，为防己科植物防己StephaniatetrandraS.Moore的干燥根，能祛风止痛，利水消肿，临床上用于风湿痹痛，水肿脚气，小便不利，湿疹疮毒。该药材及其饮片的质量标准收载于《中国药典》2010年版一部[1]。然而，防己配方颗粒剂却缺乏质量标准。因此，为有效地控制该制剂的质量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）对防己配方颗粒中的防己诺林碱和粉防己碱进行含量测定。该方法操作简便、重现性好、专属性强，灵敏度高，结果科学准确，适合作为该品种的含量测定方法。具体研究如下。

1仪器与试药

高效液相色谱仪（生产厂家：美国Agilent公司；型号：Agilent1200系列），电子天平（SartoriusBP211D），超声波清洗器（美国Branson公司，型号B5510E，频率40kHz）；粉防已碱对照品（批号110711-200708）和防已诺林碱对照品（批号110793-200605），均购于中检所）；防己配方颗粒样品（批号1007021S、1007051S、1007101S），由深圳华润三九医药股份有限公司提供；甲醇、乙睛为色谱纯（美国Fisher公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18反相柱（5µm×250mm×4.6mm）；流动相为甲醇-乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钾水溶液-三乙胺（45：25：30：0.3）；流速为1.0min/min；柱温为35℃；检测波长为280nm；进样量为20μL。在此条件下，理论塔板数按粉防己碱峰计算不得低于4000，粉防己碱峰与相邻的其他峰的分离度应大于1.5。防己诺林碱和粉防己碱对照品、防己配方颗粒和阴性对照色谱图见图1。

图1防己诺林碱、粉防己碱对照品（A）、防己配方颗粒（B）和阴性对照（C）的HPLC图谱

注：1.防己诺林碱2.粉防己碱

2.2对照品溶液的制备取粉防己碱对照品、防己诺林碱对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含粉防己碱0.2mg、防己诺林碱0.06mg的混合溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备取适量本品，研细，取约0.3g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率100W，频率40KHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4线性关系考察分别精密吸取同一份混合对照品溶液（每1ml含防己诺林碱0.0629mg，含粉防己碱0.1905mg）5、10、15、20、40、60µl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值分别对防己诺林碱和粉防己碱的进样量进行回归处理，分别得回归方程为：防己诺林碱y=899.83x-17.595（相关系数r＝1）；粉防己碱y=824.79x-10.055（相关系数r＝1）。结果表明，防己诺林碱在0.3145µg～3.774µg的范围内与峰面积有良好的线性关系，粉防己碱在0.9525µg～11.43µg的范围内与峰面积有良好的线性关系。

2.5精密度试验取同一份供试品溶液（批号：1007021S），在上述色谱条件下重复进样6次，测定，计算两种生物碱的RSD分别为0.92％（防己诺林碱）和0.04%（粉防己碱），结果表明，该方法仪器精密度良好。

2.6专属性试验取按处方比例及制法制备的缺续断的阴性样品，按供试品溶液的制备及测定方法进行处理和测定。结果：阴性样品供试液在与两种生物碱相同保留时间处无干扰峰出现，表明处方中其它组分对测定结果无影响（结果见图1）。

2.7稳定性试验取同一批号供试品溶液（批号：1007021S），自制备后，分别在0、2、4、12、24小时进样，测定防己诺林碱和粉防己碱的含量。结果表明，供试品溶液在24小时内稳定（防己诺林碱RSD%=1.05%，粉防己碱RSD=1.37%）。

2.8重复性试验取同一批号的防己配方颗粒（批号：1007021S）按供试品溶液制备方法平行制备6份，测定两种生物碱的峰面积，计算。结果防己诺林碱和粉防己碱的平均含量为11.25mg/g（RSD%=1.73％）和28.41mg/g（RSD=1.28%），表明该方法具有良好的重复性。

2.9加样回收率试验取同一供试品（批号：1007021S；含量见2.8项下）9份，按表1、2要求分别加入适量本品并精密称定，按2.3项下供试品制备方法和2.1项下色谱条件测定，计算。结果表明，该方法准确度高（结果见表1、2）。

表1准确度试验结果（防己诺林碱）

参考文献

[1]国家药典委员会.中国人民共和国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2010：139.