蝮龙抗栓丸对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织TNF-α表达的影响

蝮龙抗栓丸对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织TNF-α表达的影响

宋慧峰

宋慧峰

（辽宁中医药大学/沈阳市第二中医院辽宁沈阳110000）

【摘要】目的：观察蝮龙抗栓丸对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α）含量的影响。方法：利用完全随机法将75只SD大鼠分为：假手术组（15只）、模型组（15只）、治疗I组（15只）、治疗Ⅱ组（15只）、对照治疗组（15只），予以治疗I组蝮龙抗栓丸0.65mg/g、治疗Ⅱ组蝮龙抗栓丸1.29mg/g、对照治疗组银杏叶软胶囊0.13mg/g，灌胃1次/天,共计7天。末次灌胃后应用线栓法制备脑缺血再灌注大鼠模型，采用ELISA方法测定各组大鼠脑组织中TNF-α含量的变化。结果：与模型组比较，各治疗组大鼠脑组织TNF-α含量比模型组降低（P＜0.05）。结论：蝮龙抗栓丸具有明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤，其机制与降低脑缺血区域中TNF-α含量有关。

【关键词】蝮龙抗栓丸；脑缺血再灌注；肿瘤坏死因子-α

【中图分类号】R453【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）03-0154-02

FudragonantithromboticpilloncerebralischemiareperfusioninjuryinratorganizationinfluenceofTNFalphaexpressionSongHuifeng.ThesecondhospitalinShenyang,Liaoningprovince,Shenyang110000,China

【Abstract】ObjectiveFudragonantithromboticpilloncerebralischemiareperfusioninjuryinratshadtheeffectoftumornecrosisfactorlevelsintheorganization.MethodsWithcompletelyrandommethod,75SDratscanbepidedinto:thecontrolgroup(15),modelgroup(15),treatmentgroupI(15),treatmentgroupII(15),contrastthetreatmentgroup(15),thetreatmentgroupIFudragonantithromboticpill0.65mg/g,treatmentgroupIIFudragonantithromboticpill1.29mg/g,contrasttreatmentgroupginkgobilobasoftcapsule0.13mg/g,lavage1time/day,atotalof7days.Afterlavageapplicationlineplugattheendofthepreparationofcerebralischemiareperfusionmodelinrats,usingELISAmethodinthedeterminationofeachgroupratshadthechangeofthecontentofTNFalpha.ResultsComparedwithmodelgroup,thecontentofTNFalphatreatmentgroupratshadlowerthanmodelgroup(p<0.05).ConclusionsFudragonantithromboticpillhasobviousimprovementinischemiareperfusioninjuryinratsanditsmechanismwithlowercontentofTNFalphaintheischemicregion.

【Keywords】Fudragonantithromboticpill;Cerebralischemiareperfusion;Tumornecrosisfactoralpha

肿瘤坏死因子（TNF-α）是一种具备广泛生物学功能的多效性细胞因子[1]。有研究表明脑缺血可引起脑内TNF-αmRNA的表达。通过对动物梗死模型侧脑室内注射TNF-α单克隆抗体或可溶性TNF-α受体，能够减轻TNF-α对缺血性再灌注后脑损伤的毒性，缓解缺血大脑半球的水肿[2]。TNF-α是机体非特异性炎症反应的敏感标志物之一，并能反映脑梗死的严重程度，具有新的重要的临床意义[3]蝮龙抗栓丸作为沈阳市第二中医医院研制的院内制剂，以其纯中药组方，无毒副作用等特点广泛应用于缺血性脑卒中患者，其B型制剂荣获第50届世界发明博览会尤里卡金奖[4]。本文通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，观察蝮龙抗栓丸对大鼠脑组织中TNF-α含量的影

响。

1.材料与方法

1.1实验动物与分组

健康SPF级SD大鼠75只，雌雄各半，体重240±20g，由北京维通利华实验动物中心提供，许可证编号：SCXK（京）2007-0001。适应性喂养1周，按照完全随机法将大鼠分为：假手术组（15只）、模型组（15只）、治疗I组（15只）、治疗II组（15只）、对照治疗组（15只）。

1.2干预因素及模型制备

适应性喂养1周后，予以治疗I组蝮龙抗栓丸0.65mg/g、治疗II组蝮龙抗栓丸1.29mg/g、对照治疗组银杏叶软胶囊0.13mg/g，灌胃1次/天，共计7天，假手术组和模型组给予等剂量的生理盐水灌胃。末次灌胃后应用线栓法[5]制备脑缺血再灌注大鼠模型，而假手术组鱼线插入仅为深度1cm。根据ZeaLonga5分制评分标准：①0分为无症状；②1分为不能完全伸展对侧前爪；③2分为向对侧转圈；④3分为向对侧倾倒；⑤4分为不能自发行走，意识丧失。将评分为1～3分对象纳入检测，每组选择10只。各治疗组继续给予对应药物灌胃1次/天，假手术组与模型组给予等剂量生理盐水灌胃，72小时检测各组大鼠脑组织中TNF-α含量。

1.3指标测定

用ELISA方法检测大鼠脑组织中TNF-α含量。采用断髓处死法处死各组大鼠，迅速用止血钳将脑组织暴露，取梗死灶半球大脑，称重后，加入一定量的PBS，pH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2～8℃。加入一定量的PBS（pH7.4），用匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟，2000转/分。仔细收集上清。分装后待检测，按照试剂盒说明书进行检测。利用全自动酶标仪，在450nm处测定各孔的OD值，采用CurveExpert1.4绘制标准曲线，计算出对应的浓度值。

1.4统计方法

利用SPSS20.0统计软件，采用单因素方差分析方法统计各组数据。

2.结果

蝮龙抗栓丸对脑缺血再灌注损伤72小时大鼠脑组织中TNF-α含量的影响（见表1）。

表1各组大鼠72h后脑组织中TNF-α含量表达水平（x-±s）

注：与假手术组比较，●p＜0.05；与模型组比较，▲p＜0.05；与治疗I组比较，■p＜0.05

3.讨论

TNF-α是较早释放的具有多种生物效应的重要促炎细胞因子具有级联放大功能[6]，TNF-α在脑组织中高表达具有神经毒性，能够加速神经元细胞的损伤[7]侧脑室注入TNF-α可以增加局灶性脑缺血后半球梗死面积，用单克隆抗体抑制外源性和内源性TNF-α能显著减小梗死面积［8］。因此脑组织内TNF-α含量表达的高低，能够反应脑梗死的严重程度。

本实验结果显示，假手术组大鼠脑组织内仅见TNF-α低水平表达，而模型组大鼠脑组织内TNF-α在脑缺血再灌注72小时后仍成高表达。给予不同剂量的蝮龙抗栓丸及银杏叶软胶囊溶液灌胃干预后，各治疗组TNF-α表达含量明显低于模型组，且随着蝮龙抗栓丸溶液浓度的增加效果越明显，说明蝮龙抗栓丸能够抑制脑缺血区域脑组织内TNF-α含量的表达，从而减轻其对脑组织的损伤。本实验说明了蝮龙抗栓丸能够直接抑制缺血区域脑组织内TNF-α表达水平，实现对脑神经元的保护。

【参考文献】

[1]SivenAL，LiuY，FeuersteinG，etal.Increasedreleaseoftumornecrosisfactorαintothecerebrospinalfluidandperipheralcirculationofagedrats[J].Stroke，1993，24(6):880-888.

[2]LavineSD，HofmanFM，ZlokovicBV.Circulationgantibodyagainsttumornecrosisfactorαprotectsratbrainfromreperfusioninjury［J］.JcerebBloodFlowMetab，1998，18(1):52-58.

[3]张梅，田英，刘翠平.肿瘤坏死因子与脑卒中的炎症反应关系研究进展[J].现代中西医结合杂志，2011，20(16):2079-2080.

[4]丛丹江.蝮龙抗栓丸B型获世界尤里卡金奖[N].中国中医药报，2001-12-17(001).

[5]马贤德，孙宏伟，柴继严等.线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究[J].中华中医药学刊，2009，27(6):1200-1201．

[6]关洪全，高原，王素娟等.眼针对大鼠脑缺血再灌注损伤不同时间点海马组织TNF-α表达的影响[J].中国老年学杂志，2012，32(17):3705-3707.

[7]丹萍，易莉，陈强等.针刺对脑缺血损伤级联反应和再灌注影响的研究进展[J].中国康复医学杂志，2005，20(11):865-7．

[8]StrachanAJ，WoodruffTM，HaaimaG，etal.AnewsmallmoleculeCSarecepterantagonistinhibitsthereverse-passivearthusreactionandendotoxicshockinrats[J]．JImmunol，2000，164(12):6560.