大鼠脑干出血手术清除血肿对血浆炎性因子的影响

大鼠脑干出血手术清除血肿对血浆炎性因子的影响

任成臣1王永和2(通讯作者)周涛2宋磊2邱少

任成臣1王永和2(通讯作者)周涛2宋磊2邱少博2刘维生2

（1潍坊医学院外科学教研室山东潍坊2610000；2潍坊脑科医院神经外科山东潍坊261000)

【摘要】目的:探讨大鼠脑干出血清除血肿对脑干出血后急性期继发性炎症反应的影响。方法：SD大鼠36只,采用配伍组设计,分为出血对照组组和微创手术组。每组分3个亚组，每亚组6只大鼠。采用尾动脉取自体血脑桥注射法，制成脑干出血模型，抽取静脉血对肿瘤坏死因子、白介素-6进行ELLISA检测，记录神经功能评分，收集数据进行统计学分析,研究手术对致炎因子的影响。结果：脑干出血早期，外周血肿瘤坏死因子、白介素-6逐渐升高，至72h到达最高，手术组与出血组比较,两种因子术后12h无差异，24h和72h差异明显，P<0.05有统计学意义。结论：在脑干出血自然病程中，血肿刺激和继发性炎症反应导致炎症介质增加，而及时清除脑干血肿能明显降低致炎因子水平，对预后有利。

【关键词】脑干出血血肿瘤坏死因子白介素-6肿瘤坏死因子-α

【中图分类号】R741【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）14-0158-02

【Abstract】Objective:Exploretheinfluenceofthesecondaryinflammatoryresponseafterremovalofbrainstemhematomainrats.Method:36SDrats,withcompatibilitygroupdesign,pidedintohemorrhagecontrolgroupandminimallyinvasivesurgerygroup.3subgroupsineachgroupand6ratsineachsubgroup.Afterinjectingthebodybloodfromthecaudalartery,brainstemhemorrhagemodelismade.detectingthetumornecrosisfactorandinterleukin–6withELLISA,measuringnervefunctionscore.Thedatawerecollectedforstatisticalanalysis,thenstudyingtheeffectofsurgeryforinflammatoryfactors.Result:Earlybrainstemhemorrhage,thetumornecrosisfactorandinterleukin–6invenousblood,72htoreachthepeak,comparedwithhemorrhagegroup,twokindsoffactor,therewasdifferencein24hand72h,P<0.05,withstatisticalsignificance.nodifferencein12h.Conclusion:Inthenaturalcourseofbrainstemhemorrhage,toincreasedinflammatorymediatorsincreasebecausethehematomastimulationandsecondaryinflammation,andtimelyremovalofbrainstemhematomacanobviouslyreducetheinflammatoryfactorlevels,goodforprognosis.

【Keywords】brainstemhemorrhagetumornecrosisfactorinterleukin–6

脑干出血是脑出血病变中病情严重，死亡率和致残率高的一类，其病理生理机制复杂，进展迅速。仍以保守治疗为主，效果和预后并不理想。探讨脑干出血后的病理变化以及血肿清除对脑干出血病人的炎性因子的变化，对治疗结果和预后有重要的意义。

1、实验方法

1.1动物分组：

清洁健康6～7周龄SD大鼠36只，体质量（245±35g）,青岛动物实验中心提供。大鼠随机分为脑干出血模型对照组（n=18）和微创手术组（n=18）。每组大鼠按发病时间分为出血后12h、24h、72h、三个亚组。采用显微手术的方法制作脑干出血模型，在规定时间取静脉血进行分析研究。

1.2模型的制备：

脑干自发出血模型制备：参照周涛[1]等动物脑干出血模型制做方法。10%水合氯醛按0.4ml/100g体重对大鼠腹腔注射麻醉。将大鼠固定于脑立体定位仪上。头顶正中纵行切口。在后囟前外2mm、中线左侧旁开2mm处颅骨磨出直径1mm的圆孔至硬脑膜表面,勿钻通硬脑膜。用微量进液器穿刺针斜向后刺，进入深度为9mm。

出血各组则用100μl微量进液器，按步骤穿刺注入自大鼠尾动脉穿刺抽取的自体血100μl。缓慢匀速注入到脑桥部位,10分钟内注完。缓慢退出穿刺针，骨蜡封闭骨孔。缝合皮下及皮肤。出血手术组则用24G静脉留置针进针至靶点,套管固定在颅骨上,接通微量进液器将自体血100μl，缓慢注入脑桥部，夹闭套管，剪去接头，与皮下组织固定,骨蜡封闭。动物模型建成。

1.3血肿的清除：

手术组大鼠的血肿清除时机在术后8h时[2],清醒后的大鼠再次用10%水合氯醛腹腔麻醉,经留置套管100μl微量注射器注入尿激酶100U/5μl,静置20min后待尿激酶融化血肿后引流血肿。拔除套管,骨蜡封闭，缝合皮肤，温箱饲养，常规抗感染。若无偏瘫体征，或血肿沿针道返流，或进入脑室者弃用。未到时间死亡者如法补齐。

神经功能评分，大鼠清醒后采用悬挂实验和平衡木实验测试动物的肢体抓握能力和平衡能力。

1.4炎性因子检测方法：

各组动物在规定时间点上，麻醉处死，解剖，用注射器从右心室抽取静脉血3ml，立即置于EDTA-K2抗凝试管中，在4℃环境下，1500r/min离心20min，收集血浆，将其储存在-70℃环境中。采用ELLISA法测定血浆中IL-6和TNF-α的水平，试剂盒由武汉博士德公司提供。

1.5统计方法：

数据处理采用SPSS17.0统计软件，计量资料（-x±s）表示，检查数据分布和方差齐性检验。两组数据间比较采用ｔ检验，多组件比较采用单因素方差分析。P<0.05为有统计学意义。

2、结果

表1：脑干出血后各时间TNF－α、IL－６与

神经功能评分的变化数据（-x±s）

a:与对照组相比，P<0.05有统计学意义。

b:12h、24h、72h亚组间比较，与12h相比，P<0.05有统计学意义。

3、讨论

在各部位原发性非外伤性脑实质内出血中，脑干出血约占10%，多是由基底动脉破裂引起，大量出血（血肿>5ml）累及双侧被盖和基底部，患者立即昏迷，病情危重。目前临床治疗仍以保守治疗为主，其致死率可达90%以上。选取可靠的实验室指标可以评估脑干出血手术治疗效果，反映患者预后情况。

脑出血后的炎性因子中对TNF-α和IL-6实验分析，可了解手术对病情影响。TNF-а主要由巨噬细胞、平滑肌细胞等产生，促进白细胞等渗出和趋化性和炎症反应的发生发展。TNF-α表达过量可使细胞外基质分解，造成包括血管内皮细胞的基底膜，血脑屏障受损，引发血管源性脑水肿。在脑出血后继发的高浓度IL-6，促使B、T淋巴细胞分化，催化及放大炎性反应与细胞毒作用。IL-6的浓度能反映病理严重程度[3]。

本实验发现，出血后12h血浆炎性因子都是呈逐渐升高的趋势，说明出血后血肿造成的继发性炎性病变逐渐加重。在12h、24h和72h三个时间段，手术组不同时期内血浆两种炎性介质均随时间逐渐降低，这与对照组持续在较高的水平形成明显的差异。提示我们清除血肿对外周血炎性因子能够减少炎性因子的表达释放。脑出血的病情还取决于出血量，血肿越大，对组织的损害也就越大。因此，及时的清除血肿能减少脑干压迫性损害，即减轻炎性反应，又使免疫系统得以纠正减轻脑水肿和脑损伤的程度[4]。

手术组炎症因子表达低于对照组，说明炎症反应减轻。而保守治疗则要等待血肿的液化吸收，要经过血肿代谢物的刺激和炎症反应，就像对照组发生的病理过程相似。对照组和手术组的神经功能评分的比较，仅在术后72h有差异，手术清除血肿在短时间内促进神经功能恢复方面有一个良好的开始，还需要我们后续治疗措施，才能及时康复并取得良好的预后。

通过观察急性脑出血患者血清IL-6、TNF-α含量变化，证实手术改善脑干出血后的炎症反应，促进病情转归和提高预后有重要参考价值。

参考文献

[1]周涛，王永和，程迎新，等.立体定向建立SD大鼠脑干出血模型[J]中华实验外科杂志，2011,28（6）：1006.

[2]WuG,WangL,WangF,etal.MinimallyinvasiveproceduresforintracerebralhematomaevacuationinearlystagesdecreaseperihematomalglutamatelevelandimproveneurologicalfunctioninarabbitmodelofICH[J]BrainRes2013Jan25:1492:140-147.

[3]钟长明,金红阳,刘庆芳,等.微创血肿清除术救治脑出血并脑疝疗效观察[J].中国危重病急救医学,2002,14(3):z177-z178.

[4]玉石,陈文斗,李春森,等.IL-6、TNF-α在高血压脑出血中含量变化的临床研究[J].中国民族民间医药,2010,19(20):118-119.