产气荚膜梭茵的检验

产气荚膜梭茵的检验

高学强曹献芹

高学强曹献芹(河南省新乡市中心医院检验科453000)

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)13-0190-01

【摘要】目的研究产气荚膜梭茵的检验方法。方法分析其生态、生物学性状、致病性与免疫性、微生物学检验等。结论要提高产气荚膜梭茵的检出率，要在多个环节上加以重视，严格按照操作规程，才能提高检出率，有效地治疗厌氧菌引起的化脓性炎症，使患者早日康复。

【关键词】产气荚膜梭茵检验

产气荚膜梭菌(c.peueringens)，又名魏氏梭菌(c.welchii)，它是引起气性坏疽的病原菌群之一。

(一)生态

产气荚膜梭菌广泛地分布于自然界，尽管它在人畜肠道中数量不大，约104～105/g，但它是人畜肠道正常菌群之一。此菌对人致病的主要为A型和c型。A型产气荚膜梭菌是土壤及肠道菌群成员之一，而B、C、D、E型菌可能是动物专性栖生菌，偶尔在人体内发现。本菌可从食物、牛奶、奶酪或包装不合格的肉食及野味中分离，在人体中除了口腔外，子宫颈、阴道、尿道、消化道中也可分离到，1/5人群还可能从前肘窝皮肤分离到此菌。A型产气荚膜梭菌参与气性坏疽致病。

(二)生物学性状

1.形态产气荚膜梭菌是革兰染色阳性粗大杆菌，约为0.6～2.4μm×1.3～1.9(或3～5)μm，无鞭毛，不运动，直杆菌，两端纯圆，单个或成双排列，偶见长丝状。芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于茵体。在一般培养时不易形成芽胞，在无糖培养基中有。

2.培养厌氧，但要求不严格。繁殖迅速，培养2h后，在液体培养基深层即有明显生长，经4～6h培养后出觋表面生长，在平板培养基上24h培养，表面蔼落直径2～4，霭形、凸起，光滑、半透明、边缘整齐，无迁徙生长现象。在血平板上，多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血是由于0毒素的作用，外环不完全溶血则是由α毒素所致。在卵黄琼脂平板上，菌落周围出现乳白色混浊圈，是由于此菌所产生的卵磷脂酶分解了蛋黄中的卵磷脂，此现象可被特异性抗血清所中和，这一现象称为聂格尔(Nagler)反应，对于菌株的确定有决定性意义。在疱肉培养基中产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时生成大量气体(H2和CO2)将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上凡士林向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵”。这是鉴别本菌的重要特征之一。

3.性状所有菌株均能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖和蔗糖，产酸产气。不发酵甘露醇或水杨苷，可液化明胶，产生H2S，不能消化已凝蛋白质和血清，吲哚阴性。主要代谢产物有乙酸和丁酸，有时也形成丁醇。

(三)致病性与免疫性

本菌能产生β、ε、M等12种外毒素。这些毒素与溶血、动物致死、侵袭等致病作用有关。根据细菌产生外毒素种类的不同，可将产气荚膜梭菌分成A、B、C、D、E五个型，过去曾增加到F型，现普遍认为F型实为不典型c型。对人类致病的主要是A型和C型。A型主要引起气性坏疽和食物中毒，临床上大约80％的气性坏疽是由产气荚膜梭菌引起的。此外，还可以引起菌血症和其他混合感染。E型主要引起坏死性肠炎。

(四)微生物学检验

1.标本的采集和处理一般取感染创伤深部的分泌物、穿刺物、坏死组织块等经组织捣碎器研磨成悬液，一份直接涂片染色镜检，另一份用疱肉培养基增菌后接种血平板或卵黄琼脂，48h厌氧培养以后再纯化。

2.鉴定依据①革兰染色阳性粗大杆菌，缺少芽胞，有荚膜。②24h固体培养基上形成圆形、凸起、半透明、边缘整齐菌落而无迁徙生长现象，在血平板上有双层溶血环。牛乳培养基出现汹涌发酵现象；③聂格尔(Nagler)试验阳性：测定时在乳糖卵黄牛乳琼脂平板的半侧涂以A型产气荚膜梭菌与A型诺维梭菌混合抗毒素，然后从未涂抗毒素的一侧向涂抗毒素一测接种待测菌株，厌氧培养18h后观察。在未涂抗毒素一侧生长菌落周围出现混浊白环，而在涂抗毒素一侧生长的菌落无此现象，称为聂格尔试验阳性。本试验也可先在平板上划线接种待测菌株，然后贴一浸过抗毒素的长条滤纸，结果同上，即卵磷脂酶被抗毒素中和，表明待测菌产生卵磷脂酶。④动物试验：如用豚鼠，可取本菌疱肉培养基滤液1ml，接种于动物的左后腿肌肉中，使其产生实验性坏疽。接种动物24～48h死亡，接种后数小时局部有明显肿胀，由气体产生捻发音。水肿可扩展至腹部或腋下区等，如预先注射相应的抗生素血清，可使动物得到保护。或者将本培养物0.5～1ml注射人家兔或小鼠静脉内，10min后杀死动物，取其肝脏(或其他脏器)37℃培养5～8h，肝脏出现大量气泡，称“泡沫肝”。涂片镜检发现有革兰阳性大杆菌，并有明显荚膜。⑤代谢产物的气相色谱分析：以乙酸和丁酸为主。以上5条都可作为鉴定“有产气荚膜梭菌致病”的依据。

参考文献

[1]孟晓静,龚书明,苏明权,于文彬.采用PCR技术快速检测肠毒性产气荚膜梭状芽胞杆菌.《第四军医大学学报》1997年01.

[2]吴光先.卵磷脂酶阳性和阴性的产气荚膜梭菌肠毒素的检出[J];国外医学.卫生学分册;1981年03期.

[3]李尤薇,周黎,邱宗文.产气荚膜杆菌致创口深部感染2例报道期刊-核心期刊检验医学与临床2008年第22期.