胃癌组织中P73、nm23H1、E-cadherin基因表达的相关性研究及临床意义

胃癌组织中P73、nm23H1、E-cadherin基因表达的相关性研究及临床意义

周玮芦珊

周玮芦珊（江西省肿瘤医院330029）

【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）52-0185-02

【摘要】目的探讨P73、nm23H1、E-cadherin基因在胃癌组织中的临床意义及其相关性研究。方法采用免疫组化SP法检测160例胃癌标本中P73、nm23H1、E-cadherin的表达。结果胃癌组织中P73、nm23H1、E-cadherin的阳性表达率分别为51.7%、61.5%、82.1%,均低于相应癌旁正常组织93.6%、94.5%、97.1%（P<0.05）。P73、nm23H1、E-cadherin表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关，P73表达的胃癌病人预后差，nm23H1、E-cadherin表达的胃癌病人预后好。结论P73、nm23H1、E-cadherin基因表达与胃癌发生、发展、侵袭和转移有关。nm23H1、E-cadherin表达对胃癌的转移可能有协同作用。

ClinicalsignificanceoftheexpressionsofP73、nm23H1、E-cadheriningastriccarcinomaanditsrelationship

LUShan,ZHOUWeiJiangXiprovincecancerhospital330029

【Abstract】Objective:ToinvestigatetheclinicalsignificanceoftheexpressionsofP73、nm23H1、E-cadheriningastriccarcinomaanditsrelationship.Methods:Usingtheimmunohistochemicalmethod,theexpressionsof.P73、nm23H1、E-cadherinwereexaminedon161casesofgastriccarcinoma.Results:ThepositiveexpressionratesofP73、nm23H1、E-cadheriningastriccarcinomatissueswere51.7%、61.5%、82.1%,respectively,whichwerealllowerthanthoseintheadjacentnormaltissues(P＜0.05).TheexpressionsofP73、nm23H1、E-cadherinwereassociatedwithTNMstaging,thedepthofinvasionandvesselinvasion(P＜0.05).ThepositiveexpressionrateofPTENproteininintestinal-typetissueswashigherthanthatindiffuse-typetissues(P＜0.05).Theexpressionofp-AKTproteinwasnotassociatedwithLauren’stype,butitwasassociatedwithlymphnodemetastasis(P＜0.01).expressionofp73ongastriccarcinomapatientdenotedaverypoorprognosis(P＜0.01).whileapositivenm23H1、E-cadherinexpressionmeantaverygoodprognosisConclusion:TheexpressionsofP73、nm23H1、E-cadherinwerecorrelatedwiththeoccurrence,development,invasionandmetastasisofgastriccarcinoma.Thep-AKTexpressionmaybeaprognosticfactorforpatientswithgastriccarcinoma.Thecoordinationbetweennm23H1、E-cadherinexpressionmayhaveapositiveimpactongastriccarcinomametastasis

胃癌是最常见癌肿之一，在我国占恶性肿瘤死亡率的26.24%，近年来有上升趋势，中国是胃癌的高发地区，年发病率占世界胃癌发病的42%，严重影响人民健康。胃癌的发生、发展是基因-环境相互作用的结果，肿瘤的浸润及淋巴结转移是胃癌预后不良的主要因素[1，2]。有研究表明，P73的过表达与肿瘤的发生有关，nm23H1在肿瘤转移中起主要作用，E-cadherin是一种依赖Ca2+的同种亲和性细胞间黏附分子，是维持正常上皮完整性和极性的跨膜糖蛋白,与肿瘤的侵袭和转移有关[3，4]。探讨胃癌P73、nm23H1、E-cadherin基因表达的临床意义及相关性研究有重要意义。

1资料与方法

1.1病例资料随机选取2005年1月-2006-12月在江西省肿瘤医院进行手术切除并经病理诊断证实为胃癌的161例患者的组织标本，患者术前均未进行化疗和放疗。将其中125例经病理检查确认为癌旁正常组织的标本作为对照组。病理诊断结果经2名病理科医师确认。161例胃癌患者中，男性112例、女性49例，年龄28～77岁，中位年龄53.5岁。按WHO（2000年）标准分为高分化12例，中分化23例，低分化126例。Lauren分型：肠型121例，弥漫型19例，混合型21例。TNM分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期31例，Ⅲ期79例，Ⅳ期29例。对所有患者进行电话随访，随访至2011年12月。本研究获得患者及家属的知情同意。

1.2分子标志物的免疫组合染色方法

1.2.1主要试剂：鼠抗人P73单抗购自丹麦DAKO公司(工作浓度为1：100)，鼠抗人nm23.HI单抗、羊抗人E-cadherin单抗购自美国SantaCruz公司(工作浓度分别为1：100、l：100)；SP试剂盒(鼠、兔、羊)均购白美国Vector公司。

1.2.2方法和结果判断：5种分子的表达均用免疫组化ABC法检测。每次染色均采用TBS溶液代替第一抗体做阴性对照。结果判断：首先将染色强度打分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕揭色。再将阳性细胞所占的百分比打分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10％，2分为11％～50％，3分为51％一75％，4分为>75％染色强度与阳性细胞百分比乘积>3分为免疫组化反应阳性。

1.3统计学分析

临床病理特征与分子标志物间的关系、各分子标志位之间的关系，采用卡方检验或Spearman等级相关分析。个分子标志物与胃癌病人预后之间的关系采用Cox比例风险模型，并列出Cox回归方程。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1胃癌组织和相应癌旁组织中P73、nm23H1、E-cadherin表达

胃癌组织中P73、nm23H1、E-cadherin的阳性表达率分别为51.7%、61.5%、82.1%,均低于相应癌旁正常组织93.6%、94.5%、97.1%，差异均有统计学意义（P<0.05）。

2.2胃癌组织中P73、nm23H1、E-cadherin表达与患者临床病理特征之间的关系

胃癌组织中P73、nm23H1、E-cadherin的表达与患者年龄、性别无关（P＞0.05），而与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关（P<0.05）。胃癌组织中nm23H1、E-cadherin的表达与肿瘤分化程度有关（P<0.05）。

2.3胃癌组织中nm23H1、E-cadherin表达之间的关系

161例胃癌组织中，nm23H1、E-cadherin表达均阳性的有62例，均为阴性的有28例。nm23H1表达阳性，而E-cadherin表达阴性的有33例。nm23H1表达阴性，而E-cadherin表达阳性有27例，胃癌组织中nm23H1和E-cadherin表达之间呈正相关。见表1

表1SCRC和癌旁正常大肠组织中CD4和CD8的表达情况

nm23H1Ecadherin

+-

+6227

-3328

2.4胃癌组织中P73、nm23H1、E-cadherin表达与生存率之间的关系

对161例胃癌手术后患者随访至少5年，P73阳性表达患者与阴性表达患者的5年生存率分别为41.1%和38.9%，差异无统计学意义（log-rank检验P＞0.05）。nm23H1阳性表达患者与阴性表达患者的5年生存率分别为55.4%和32.9%，差异有统计学意义（log-rank检验P<0.05）。E-cadherin阳性表达患者与阴性表达患者的5年生存率分别为51.4%和28.9%，差异有统计学意义（log-rank检验P<0.05）。

3讨论

P73基因由Kaghad等于1997年在COS细胞cDNA文库中寻找调节免疫系统的基因时偶然发现，定位于染色体1p36区带，在结构和功能上与p53具有相似性，认为是p53基因家族的新成员，并且p73基因的转录产物与p53基因有2.5kb的相同部分，所以有人提出p73基因可能是p53基因的前体，对肺癌、前列腺癌、肾癌、肝癌等肿瘤的研究发现，p73的过表达与肿瘤的发生有关。由于P73与p53在结构、功能方面十分相似，所以有人认为p73的发现将给新一代的抗癌药物研究带来希望。Tannapfel等[5]检测了胃癌组织标本发现p73过表达与癌细胞分化差及病理分期晚相关。本实验结果显示，胃癌组织p73阳性表达率为46.7%，显著高于癌旁正常组织，低分化腺癌P73表达率显著高于高-中分化腺癌，淋巴结转移组p73表达率与对照组无显著性差异，提示p73基因参与胃癌的发生、发展，而与胃癌转移无关。

胃癌的生长分化和侵袭性转移的过程十分复杂，诸多因素参与和调控胃癌是上述生物学行为，其中最引入注意的是多种抑癌基因，nm23-H1基因是1988年Steegetal[6]从鼠K-1735黑色素瘤的具有不同转移潜能的细胞系中，经差示杂交分离出来的，人类的nm23基因定位于17号染色体长臂上，该基因主要存在于胞质和脂膜上，该基因编码一种分子量约为17kDa的蛋白质，具有二磷酸核苷激酶活性，二磷酸核苷激酶的生物学功能是参与体内三磷酸核苷的生成，通过影响微管聚合状态及G蛋白介导的信号传导通路，而调节细胞代谢，从而对肿瘤的增殖、分化、侵袭及转移起重要作用,nm23基因有H1和H2两种类型，较多的结果倾向于nm23H1在抑制转移中起主要作用。本研究发现癌组织中nm23H1的表达显著低于癌旁组织，nm23H1基因的表达与肿瘤分化程度呈正相关，与肿瘤浸润深度呈负相关，有淋巴结转移者nm23H1表达低于无转移者。E-cadherin基因已被公认为抑癌基因，当其表达下调或功能障碍，将使同种细胞失去黏附，对于上皮性肿瘤而言，意味着肿瘤具备侵袭性生长的特点，容易从原发灶脱落分离，向局部淋巴结转移或远处转移。本研究显示，E-cadherin在胃癌组织中的表达率显著性低于癌旁正常组织，E-cadherin基因表达与肿瘤分化程度呈正相关，与肿瘤浸润深度呈负相关，有淋巴结转移者E-cadherin表达低于无转移者。在恶性肿瘤发生的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用假说，认为在恶性肿瘤发生、发展和转移的各阶段，至少有两个或两个以上功能不同的异常激活的基因各自发挥不同作用，并在时间和空间上相互配合，协同促进了细胞的癌变[7]。有关nm23H1和E-cadherin在胃癌组织中的表达相关性研究，文献尚未见报道。本研究发现，在胃癌中nm23H1表达与E-cadherin表达呈正相关，表明两种细胞黏附分子在胃癌转移的病理过程中具有协同作用，其具体机制待进一步探讨。

参考文献

[1]邹小农,孙喜斌,陈万青,等.2003—2007年中国胃癌发病与死亡情况分析[J].肿瘤,2012,32(2):109-114.

[2]JEMALA,SIEGELR,WARDE,etal.Cancerstatistics,2009[J].CACancerJClin,2009,59(4):225-249.

[3]NakavamaH,YasuiW,YokoxakiH,etal.Reducedexpressionofnm23isassociatedwithmetastasisofHumangastriccarcinomas[J].JpnJCancerRes,2003.84:184～190.

[4]BrabantG，Hoang-vuC,CetinY.etal.E-cadherin:adifferentiationmarkerinthyroidmalignances[J].CancerRes,2010.53:4987～4993.

[5]TannapfelA,SchmelzerS,BenickeM,etal.Expressionofthep53homologuesp63andp73inmultiplesimultaneousgastriccancer[J].JPathol,2001.95:163～170.

[6]SteegPS,BevilacquaG,KopperL,ThorgeirssonUP,TalmadgeJE,LiottaLA,SobelME.Evidenceforanovelgeneassociatedwithlowtumormetastaticpotential.JNatlCancerInst2008;80:200-204.

[7]联合应用c—Ha—ras,c—myc反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的意义[J].中华外科杂志,1996,1(3):7-9.