绿豆花提取物对急性酒精中毒小鼠乙醇脱氢酶活性的影响

绿豆花提取物对急性酒精中毒小鼠乙醇脱氢酶活性的影响

罗叶强杨兵何清李佳星蔡焕曾

长沙医学院湖南长沙410219

【摘要】目的：为了探讨绿豆花提取物对急性酒精中毒小鼠乙醇脱氢酶活性的影响以及其对急性酒精中毒小鼠肝组织的损伤状况的改善作用，将雄性小鼠随机分为空白组、模型组、绿豆花提取物组。给药30min后，模型组与绿豆花提取物组灌酒0.10ml/10g，在灌酒后0.5，1.0，1.5，2.0h分别摘小鼠眼球进行取血和肝脏组织。采用生化酶法测定小鼠酒后不同时间内血液中乙醇溶度，采用722型分光光度计测量血液中乙醇脱氢酶的活性。结果显示：小鼠血中乙醇溶度在酒后0.5-2h达到高峰，与模型组相比，绿豆花提取物组0.5-2h内的血中乙醇溶度数值降低。绿豆花提取物对小鼠酒后0.5-1h肝中乙醇脱氢酶的影响较为明显，使其活性增加；酒后1.5-2h肝中乙醇脱氢酶活性虽然也增加，但与模型组比较无显著差异。结论：绿豆花提取物可降低酒后血中乙醇溶度，增强肝中乙醇脱氢酶活性。

【关键词】绿豆花提取物；乙醇脱氢酶活性；解酒，酒精中毒

引言

酒精中毒是当今世界上公认的第一公害，醉酒实为急性酒精中毒。乙醇脱氢酶是参与乙醇在机体内代谢的关键酶。目前，国内外对于天然药物或提取解酒的实验已经大量报道，李文哲、芦洁等[2]研究了几种中药提取物和药物对乙醇脱氢酶活性的影响，朱伟群等[3]研究了溪黄草水提取物解酒保肝作用。医书《本草纲目》记载“绿豆治痘毒，利肿胀。内平皮寒，解金石、砒霜、草木一切诸毒，宜连皮研水服。”绿豆花，为豆科草本植物绿豆的花，具有解急慢性酒精中毒的功效[1].有文献报道绿豆花对小鼠急性酒精具有治疗作用，它能降低体内乙醇溶度，并显著提高小鼠肝脏中乙醇脱氢酶的活性。本研究采用动态连续性观察的方法并结合现代生物学理论，以乙醇脱氢酶作为靶点，体外测定乙醇脱氢酶活性，进一步研究绿豆花对乙醇在体内吸收和分解过程的影响，探讨绿豆花解酒的药效及作用机制，便于对绿豆花的进一步开发利用。

1.材料与方法

1.1动物

雄性老鼠，体重18～22g

1.2试剂：生理盐水，乙醇溶液，甘氨酸—氢氧化钠缓冲液7.5g/L，市售52°酒精，肝素钠抗凝剂

1.3药物制备

绿豆花，为豆科草本植物绿豆的花。烘干绿豆花全部粉碎，蒸馏水固液1：10提取温度80℃、提取时间120min提取3次，70℃下用旋转蒸发仪减压蒸发，蒸发液留取置于棕色试剂瓶中备用。其中，高、中、低剂量制剂剂含生药分别为0.8，0.4和0.2g/mL。

1.4仪器：722型分光光度计，光学显微镜

1.5实验方法

1.5.1对急性酒精中毒小鼠血液中乙醇浓度的影响

1.5.1.1制作乙醇标准曲线

小鼠摘眼球取血，放入用肝素钠抗凝的试管内。从每管中取出0.25mL，配成乙醇含量分别为250，500，750，1000mg/L的溶液

2）上述每管各加3.4%高氯酸4mL，混匀，于3000r/min离心5min，上清液作为标准液。

3）取5个试管，分别加入乙醇脱氢酶（ADH-氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）液4.9mL；继续往其中一个加蒸馏水0.1mL，作为对照，其余4个各加0.1mL标准液，室温放置60min。用722-C紫外-可见分光光度计（上海第三分仪器厂）于340nm测上述各管吸光度，绘制标准曲线[4]（见表1和图1）。

回归方程为C=1139.1A-7.7774；r=1。

1.5.1.2样品测试

图一：乙醇标准曲线

Fig.1Alcoholconcentrationstandardcurve

1.5.2绿豆花提取物对急性酒精中毒小鼠血清中乙醇脱氢酶活性的影响

1.5.2.1乙醇脱氢酶活性的计算方法

将1份NAD+溶液与5份甘氨酸氢氧化钠缓冲液混合配成基质液备用，于测定管加入50ul血清，对照管加入50ul蒸馏水，再分别加基质液1ml，置37℃水浴2min，然后向测定管加入20ul乙醇液，向对照管加入20μl蒸馏水，置37℃5min，在5min内每30s以对照管调零，在340nm处记录测定管吸光度，计算出测定管每min平均吸光度（△A/min）。[5]

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

2.1对急性酒精中毒小鼠血中乙醇溶度的影响

与模型组相比，酒后0.5h低剂量组无明显差异；中、高剂量组降低，有明显差异。

酒后1h，低剂量组无明显差异；中、高剂量组均降低，有明显差异。

酒后1.5h，低、中、高剂量组均降低，有明显差异。

酒后2h，低、中、高剂量组君降低，有明显差异（表2）

2.2对急性酒精中毒小鼠肝脏中乙醇脱氢酶活性的影响

分别测定酒后0.5、1.0、1.5、2.0h小鼠肝中乙醇脱氢酶活性（见表3）

注：与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

3.讨论

人体摄取乙醇后，通过肠道吸收，在整个乙醇消化过程中，机体内许多的酶活性增强，其中乙醇脱氢酶（ADH）尤为突出，乙醇脱氢酶是代谢酒精的首个关键酶。在乙醇转化成乙醛的过程中，有NADH生成，而NADH在340nm处有吸收峰，故本实验采取测定单位时间内NADH生成引起吸收峰变化的方法，测定酒精急性中毒小鼠肝中乙醇脱氢酶活性的变化。

本实验研究了绿豆花提取物对酒后不同小鼠血中乙醇浓度和肝脏中乙醇脱氢酶活性的影响，实验结果显示，小鼠血中酒精浓度在0.5-1.0h达到高峰，给药后，酒后0.5-2.0h内，不同浓度绿豆花提取物组与模型组相比，时间-乙醇浓度曲线降低，有明显的差异性变化。绿豆花提取物对急性酒精中毒小鼠0.5-1.0h肝脏中乙醇脱氢酶活性作用明显，有明显的加强作用。

结合小鼠酒后血中乙醇浓度和肝中乙醇脱氢酶活性的改变，可以看出酒后0.5-1.0h内乙醇浓度增高，肝脏中乙醇脱氢酶活性增强，当酒后1.0h血中乙醇浓度达到峰值时，小鼠肝中乙醇脱氢酶活性减弱，由此可知，酒精对肝中乙醇脱氢酶的影响是伴随酒精在体内代谢变化而变化的。

绿豆花提取物可降低酒后血中乙醇浓度，推测其作用机制可能抑制了消化道对乙醇的吸收，增强了乙醇脱氢酶的活性，从而达到解酒的作用。

参考文献：

[1]项梁.绿豆家族[N].医药养生保健报，2005-08-01（004）.

[2]李文哲，芦洁，孙晓宇，汪世龙，倪亚明，朱文斯.几种中药提取物和药物对乙醇脱氢酶活性影响的研究[J].中药材，2006，（08）：816-818.

[3]朱伟群，晏桂华.溪黄草水提取物解酒保肝作用的实验研究[J].湘南学院学报（医学版），2010，12（04）：11-13.

[4]吉尔鲍特GG.酶法分析手册[M]缪南辉，陈石根，译。上海：上海科学技术出版社，，1983：51.

[5]胡建强，刘凤兰.血清乙醇脱氢酶活性测定及临床应用[J].天津医科大学学报，2001，（01）：110-111

注：项目编号：长医教[2017]18号-331