穿心莲提取液膜浓缩工艺的指纹图谱质量评价研究

穿心莲提取液膜浓缩工艺的指纹图谱质量评价研究

陈立德１曾令杰2褚晨亮2

陈立德１曾令杰2褚晨亮2

（1邵阳学院生物与化学工程系湖南邵阳422004;2广东药学院中药学院广东广州510006）

【摘要】目的对穿心莲提取液的膜浓缩工艺进行质量评价。方法以穿心莲内酯及脱水穿心莲內酯等化学成分为评价指标，以指纹图谱的方法对穿心莲提取液膜浓缩前后的成分组成变化进行比较。结果指纹图谱显示，膜组合浓缩液的成分组成和穿心莲原提取液一致，穿心莲內酯的转移率大、损失小；而蒸发热浓缩工艺中，热不稳定成分穿心莲內酯的损失大。结论膜浓缩工艺可有效地克服穿心莲內酯等成分在热浓缩过程中的损失，适宜于穿心莲提取液的浓缩。

【关键词】膜浓缩指纹图谱穿心莲内酯脱水穿心莲内酯

【中图分类号】R284【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）19-0094-02

穿心莲为爵床科植物Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分，在我国广东、福建等地区广泛栽培，是南方地区民间治疗多种感染性疾病的常用中药，具有清热解毒、凉血消肿之功效[1-2]，其活性成分穿心莲内酯等二萜类成分不稳定，在高温煎煮下易降解和转化，采用常规的热蒸发浓缩工艺损失较大[3]。膜分离浓缩工艺在常温或低温下均可运行，一些中药制剂的分离和浓缩工艺之中有应用[4-5],可以最大限度的保留中药提取液中的活性成分，膜浓缩工艺的特点适合于含有热敏性成分的穿心莲提取液的浓缩，能够避免常规热蒸发工艺中穿心莲內酯类成分的损失。膜浓缩工艺和热蒸发浓缩工艺处理的穿心莲提取液的成分组成和有效成分是否有差别？开展其指纹图谱的质量比较研究非常关键。本文应用HPLC指纹图谱方法对穿心莲提取液膜浓缩前后的质量状况进行了比较和评价。

1.仪器与试药

1.1仪器SHBIllA型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，旋转蒸发器（巩义市予华仪器有限公司）；PP棉（苏州岚山保温材料有限公司），纳滤膜（北京时代沃顿科技有限公司）；Agilent1100系列高效液相色谱仪，Agilent自动进样器，AgilentDAD检测器；Agilentextend－C18色谱柱(5um,250x4.6mm)；

1.2试药穿心莲内酯（批号110797-200307）、脱水穿心莲内酯（批号857-200105）购自中国药品生物制品检定所；色谱纯甲醇购自Merck公司，水为自制的超纯水；其它试剂均为分析纯，购自天津市富起化工有限公司。

2.方法与结果

2.1穿心莲提取液的浓缩

2.1.1穿心莲提取液的热浓缩:取10L的穿心莲提取液，以旋转蒸发仪在85℃下浓缩回收乙醇，浓缩到1L为止，得到蒸发浓缩样品，按本文“2.2”项下的方法进行指纹图谱分析。

2.1.2穿心莲提取液的膜组合浓缩:根据本课题组对组合膜的筛选和优化结果，确定膜组合浓缩的工艺路线为：10L穿心莲提取液→超滤膜(PP棉)除杂→纳滤膜浓缩→浓缩液(1L)。

2.2HPLC指纹图谱分析

2.2.1样品溶液的制备

分别精密吸取上述穿心莲提取液10.0ml、或浓缩液1.0ml，挥干后加40％甲醇20ml溶解，完全转移至预处理好的中性氧化铝柱上（内径2.0cm，100～200目，装量5g），再以30ml甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，以甲醇溶解定容成10ml,即制得HPLC指纹图谱用供试品溶液，按本课题组建立的HPLC指纹图谱法[6-7]进行分析。

2.2.2参照物溶液的制备

精密称取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯制成每1ml含0.2mg的对照品溶液，即得。

2.3色谱条件的适应性考察

以乙腈-水（18：82）为流动相进行梯度洗脱，从0至60分钟，乙腈浓度由18%梯度上升至40%，流速：1.0ml/min；检测波长为226nm。按照上述条件，分别准确吸取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品溶液及经膜浓缩后的溶液5μL，以0.45μｍ微孔滤膜过滤，注入HPLC色谱仪，制作了穿心莲提取液或浓缩液的HPLC指纹图谱，其代表性色谱图如图1所示。样品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯与相邻的色谱峰的分离度大于1.5,理论塔板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯计，不低于2000。

图1穿心莲提取液及其经过蒸发浓缩和膜分离浓缩后的HPLC代表性色谱图

（图中，“１”穿心莲内酯，“２”脱水穿心莲内酯；A图为穿心莲提取液色谱图，B图为蒸发浓缩后穿心莲提取液色谱图；C图为膜浓缩后穿心莲提取液色谱图）

2.4穿心莲提取液膜浓缩前后穿心莲內酯的含量变化

按照上述条件，制作穿心莲提取液、膜浓缩液及蒸发浓缩液的HPLC指纹图谱，并测定穿心莲內酯和脱水穿心莲內酯的含量。HPLC含量分析的结果表明（如表１所示），穿心莲提取液经膜组合浓缩后，穿心莲內酯的损失少，在工艺过程中的转移率高，转移率达95.6%。而穿心莲提取液经旋转蒸发热浓缩后，穿心莲內酯损失较大，损失率达35.6%。

表1样品中穿心莲內酯和脱水穿心莲內酯的含量（n=3）

2.5穿心莲提取液膜浓缩前后的指纹图谱比较

图1的结果表明，穿心莲提取液或浓缩液的指纹图谱中，均以穿心莲內酯和脱水穿心莲內酯为主要色谱峰。膜浓缩液的HPLC指纹图谱与穿心莲提取液的指纹图谱相似度极高，穿心莲内酯的色谱峰显著高于脱水穿心莲内酯的色谱峰。而提取液经蒸发浓缩工艺后，与原提取液的指纹图谱相比，穿心莲內酯和脱水穿心莲內酯色谱峰的相对比例发生了改变，脱水穿心莲內酯的色谱峰显著高于穿心莲內酯的色谱峰。

3.讨论

3.1膜分离浓缩工艺广泛应用于中药有效成分提取分离、低温、低耗浓缩等领域。它是利用膜的选择性分离功能实现待分离溶液中不同组分的分离、纯化和浓缩的。膜的选择、组合和工艺参数的优化，是膜技术有效浓缩中药提取液之关键步骤。膜浓缩工艺的应用可以达到中药浓缩工艺的高效可控、节能、低运行成本，以适应中药现代化制药工艺的要求。

3.2膜浓缩工艺参数是否适合，常常应用指纹图谱技术方法进行评价，指纹图谱技术能够给从整体上反映样品中化学成分的特点。本论文即采用指纹图谱技术对膜浓缩工艺、常规的热蒸发浓缩工艺和未浓缩前的穿心莲溶液进行了质量比较和评价。发现，膜浓缩后样品的指纹图谱和原提取液的指纹图谱保持高度一致，其化学成分组成与穿心莲提取液相比，没有发生改变。但热蒸发浓缩后溶液的指纹图谱却与原提取液的指纹图谱有较大的差别。这说明膜分离浓缩技术适合于穿心莲提取液的浓缩，在浓缩过程中穿心莲化学成分的变化很小。

3.3应用指纹图谱技术，还可以对其活性成分进行定量分析，从数量上反映这两个活性成分穿心莲內酯和脱水穿心莲內酯在浓缩工艺前后的变化情况及转移率的高低，从而对整个工艺的合适度进行评价。本文的分析结果表明，穿心莲提取液经膜组合分离浓缩后，穿心莲內酯和脱水穿心莲內酯的转移率非常高，分别达95.6%和99.1%，这说明膜组合分离浓缩技术适宜于穿心莲提取液的浓缩。

参考文献

[1]国家药典委员会，《中华人民共和国药典》（一部）[M],p251-252，中国医药科技出版社,2010.

[2]黄海波，徐鸿华.穿心莲规范化栽培技术.广东科技出版社，2003

[3]杨东升，陈松光欧阳惠芳，等.穿心莲流膏中穿心莲内酯类成分在烘干过程中的变化情况探讨[J].中成药，2003,（11）:8-10.

[4]叶勇，张永波.复方中药膜分离工艺和节能性研究[J].时珍国医国药，2008,(8）：1884-1885.

[5]王子尧，陈彦，孙文秀．超滤法分离丹皮多糖的研究[J]．膜科学与技术，2009，29(4)：98-99.

[6]林蔚兰，曾令杰，梁惠瑜等.不同产地穿心莲药材HPLC指纹图谱初步研究，中成药,2007,29(5):730-733.

[7]曾令杰，梁晖，林蔚兰.穿心莲各生育期的药材质量和干物质积累动态研究[J].中成药，2007,29(6):870-872.

基金项目：广东省科技计划项目（2009B030801348）