结肠癌组织中microRNA含量检测的临床意义

结肠癌组织中microRNA含量检测的临床意义

袁娅娟

袁娅娟

(第四军医大学第一附属医院检验科陕西西安710032)

【摘要】目的：研究并探讨结肠癌组织中microRNA含量及其临床意义。方法：选择结肠癌术中切除的结肠癌组织、癌旁组织以及远端正常的结肠组织标本，采用Stem-loopRT和realtime-PCR的方法检测以原癌基因和抑癌基因为靶点的microRNA的含量。结果：肿瘤组织中miR-7b、miR-143、miR145的含量明显低于正常结肠组织；相反，miR221和miR223的含量明显高于正常组织，并且TNM分期越差、miRNA含量变化越明显。结论：在结肠癌组织中miR-7b、miR-143、miR145含量明显减少、miR221和miR223的含量明显增加，并且miRNA的改变与肿瘤TNM分期密切相关。

【关键词】结肠癌microRNATNM分期

【中图分类号】R735.3+5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）13-0256-02

结肠癌是极为常见的消化道恶性肿瘤，并且发病率呈现逐年上升的趋势。结肠癌的发生和遗传、饮食、环境等多种因素引起的原癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。MicroRNA是近些年来分子生物学和表观遗传学领域的研究热点，它在体内发挥重要的生物学作用，参与细胞的增殖、分化、凋亡等过程。为了研究microRNA在结肠癌组织中的含量及其对疾病的早期诊断的临床价值，笔者进行了如下研究。

1.资料与方法

1.1一般资料

选择2007年3月-2014年3月在我院行手术切除治疗的260名结肠癌患者，TNM分期均在Ⅱ-Ⅳ期。收集在术中切除的结肠癌组织、癌旁组织以及远端正常的结肠组织标本，立即投入液氮保存，以备后续Realtime-PCR检测。

1.2检测方法

采用Trizol法(invitrogen公司)抽提结肠组织中的总mRNA、Stem-loopRTPCR的方法合成cDNA第一链。在miRBase中查找microRNA序列、并在stem-loop序列5’-gtcgtatccagtgcagggtccgaggtattcgcactggatacgacccttct-3’的3’端加上5-6个与目的microRNA序列3’端完全互补配对的碱基作为RT-PCR的特异性引物。

PCR扩增采用荧光定量PCR试剂盒(Takara公司),扩增条件:95。C、15s，60。C、30s，72。C、30s，40个循环。引物序列：U6：上游5’-GCTTAGGCAGCACATATAC3'，下游5'-TTCACGAATTTGCGTGTCAT-3'；miRNA:上游5个G或C、加上15个目的miRNA序列(U变为T)，下游引物采用固定序列5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’。

1.3含量分析方法

分别扩增同一样本的目的基因和看家基因，利用其ΔCt值进行相对定量。即用同组中每个样本目的基因的Ct值减去的U6的Ct值(ΔCt)，再用肿瘤组织中目的基因的ΔCt减去正常组织的△ct(ΔΔCt)，代入公式2－ΔΔCt计算即得到肿瘤组织相对正常组织PCR产物的浓度比值，以此来反映microRNA含量的变化。

1.4统计学方法

采用SPSS18.0对所得数据进行统计学分析，均以P＜0.05作为判断为具有统计学意义的标准。

2.结果

2.1不同结肠组织中microRNA含量(见表1)

表1：肿瘤组织、癌旁组织和正常组织中microRNA含量比较

2.2不同TNM分期肿瘤组织中microRNA含量(见表2)

表2：不同TNM分期肿瘤组织中microRNA含量比较

3.讨论

microRNA是一类进化上保守的非编码小分子RNA，具有在翻译水平调控基因表达的功能。miRNA通过碱基互补的方式与目标mRNA结合，阻止所结合的mRNA的翻译，导致相应基因表达水平的下降[1]。结肠癌作为消化道极为常见的恶性肿瘤，它的发生发展与原癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。

MicroRNA参与体内1/3以上基因表达的调控，其中就包括某些原癌基因和抑癌基因。当以原癌基因为靶向的microRNA含量下降时、以抑癌基因为靶向的microRNA含量增加时，就会导致原癌基因表达量增加和抑癌基因表达量减少，进而引起肿瘤的发生和发展[2]。体内与结肠癌发生发展相关的抑癌基因包括APC、PTEN、CDKN1C/p57，相关的原癌基因包括k-ras、erk、c-myc等[3]。通过Targetscan6.0查询可知，以这些原癌基因和抑癌基因为靶点的microRNA包括miR-7b、miR-143、miR145、miR221和miR223。

目前，诊断结肠癌的主要方法是结肠镜和病理活检。由于疾病缺乏特异性的症状和体征，也没有较为敏感的血液检查指标，这就使得结肠癌的早期诊断变得十分困难。为了探索和研究对于结肠癌的早期诊断具有较高价值的特异性指标，我们采用Stem-loopRT和realtime-PCR的方法检测结肠组织中以原癌基因和抑癌基因为靶点的microRNA的含量[4]。通过我们的研究可知，肿瘤组织中以原癌基因为靶点的miR-7b、miR-143、miR145的含量明显低于正常结肠组织，并且TNM分期越差、miRNA含量越低；相反，以抑癌基因为靶点的miR221和miR223的含量明显高于正常组织，并且TNM分期越差、miRNA含量越高。

由此我们可以总结，在结肠癌组织中miR-7b、miR-143、miR145含量明显减少、miR221和miR223的含量明显增加，并且miRNA的改变与肿瘤TNM分期密切相关。

参考文献

[1]于振涛，蔡星，尚晓滨等.microRNA在结肠癌组织的表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志，2008，25(7)：894-896.

[2]刘宏，张苏展，蔡善荣，等.microRNA143表达对结肠癌组织中细胞增殖的影响及其作用机制[J].中华肿瘤杂志，20087，30(7)：498-501.

[3]孙凯，王伟，雷尚通，等.MicroRNA221通过抑制CDKN1C/p57表达促进结肠癌细胞增殖[J].南方医科大学学报2011，31(1)：1885-1889.

[4]李娟，王翔，张有光.microRNA检测方法的研究进展[J].合肥工业大学学报，2010，8(33)：1234-1240.