桑皮止咳颗粒剂对咳嗽变异性哮喘豚鼠血清和肺泡灌洗液中组胺和白三烯含量的影响

桑皮止咳颗粒剂对咳嗽变异性哮喘豚鼠血清和肺泡灌洗液中组胺和白三烯含量的影响

魏环白晓红关丽君

（1.辽宁中医药大学辽宁沈阳110032；2.辽宁中医药大学附属医院辽宁沈阳110032；

3.沈阳市儿童医院辽宁沈阳110032）

摘要：目的探讨桑皮止咳颗粒剂对咳嗽变异性哮喘豚鼠血清和肺泡灌洗（BALF）中组胺和白三烯水平的影响。方法将48只豚鼠随机分为：正常组、模型对照组、西药对照组及桑皮止咳颗粒剂低、中、高剂量组，共6组，每组各8只。通过卵蛋白腹腔注射致敏和雾化吸入激发咳嗽复制咳嗽变异性哮喘的豚鼠模型。观察豚鼠的血清和BALF中组胺和白三烯的水平。结果模型组血清及BALF中组胺和白三烯含量明显高于其它各组，差异有统计学意义（P<0.05）；西药组、止咳剂中、高剂量组相互之间组胺和白三烯含量差异无统计学意义（P>0.05），但是止咳剂低剂量和西药组及中、高剂量组中组胺和白三烯含量差异有统计学意义（P<0.05）。结论桑皮止咳颗粒剂能有效的缓解气道炎症反应，可能与参与免疫调节的炎症介质组胺和白三烯的水平有关，但需要达到足够的剂量时才能更为有效的发挥作用。

关键词：桑皮止咳颗粒剂；咳嗽变异性哮喘；组胺；白三烯

咳嗽变异性哮喘，又称过敏性咳嗽（coughvariantasthma，CVA），是指以咳嗽为主要或唯一临床表现的一种特殊类型的哮喘，在学龄前和学龄期儿童慢性咳嗽中十分常见。而中医认为其病机与“哮证”相似，是一种介于外感和内伤之间的虚实夹杂性咳嗽。近年来相关资料研究显示，在我国慢性咳嗽病因诊断中有14%为CVA，钟南山等调查发现慢性咳嗽首要病因CVA（29.9%）[1]。桑皮止咳颗粒是《小儿药证直决》中泻白散和《医学心悟》中止咳散合方基础上结合临床经验加减而成，本实验选用桑皮止咳颗粒与本病临床常用西药（孟鲁斯特咀嚼片）在不同剂量下，分别作用不同组别豚鼠进行对比，观察其疗效作用，现将实验汇报如下。

1材料

1.1动物

选用48只健康纯系豚鼠，雄性，SPF级，体重200±20g，购自辽宁长生生物技术有限公司，合格证号：SCXK（辽）2010-0001。

1.2药物及试剂

桑皮止咳颗粒剂（以下为图表中使用方便简称止咳剂），由桑白皮、地骨皮、桔梗、牛蒡子、甘草等药物组成，购自辽宁中医药大学附属医院颗粒药局；孟鲁斯特咀嚼片（顺尔宁），规格10mg/片，杭州默沙东制药有限公司分装，批号：K005999。卵蛋白（OVA），美国Sigma公司生产，＃A5503-1g，纯度>98%；氢氧化铝，北京鼎国生物技术有限公司提供，批号：120701；注射用环磷酰胺，山西普德药业股份有限公司生产，批号：04130204。豚鼠组胺（HA）酶联免疫试剂盒，武汉优尔生生物技术有限公司生产，批号：L141007002；豚鼠白三烯（LTB4）酶联免疫试剂盒，武汉优尔生生物技术有限公司生产，批号：L141007059。

1.3仪器

超声雾化器：型号402AI，江苏鱼跃医疗设备股份有限公司；酶标仪：BENCHMARK，BIO-RAD；高速离心机：TGL-16B，中国。

2方法

2.1分组与造模

将48只豚鼠经适应性喂养3天，平均分为正常对照组、模型对照组、西药对照组、止咳剂低剂量组、止咳剂中剂量组、止咳剂高剂量组，共6组，每组各8只。按文献记载的经典的过敏性咳嗽的造模方法[2]进行造模：正常组在豚鼠腹腔注射同等量的生理盐水，其余各组第1天腹腔注射30mg/Kg的环磷酰胺免疫抑制剂，2天后腹腔注射含有2mg卵蛋白和100mg氢氧化铝的混悬液1ml，3周后再次腹腔注射含有0.01mg卵蛋白和100mg氢氧化铝的混悬液1ml以加强免疫，豚鼠致敏。再3周后给予豚鼠10%的卵蛋白溶液，将其置于4L的玻璃钟罩内，雾化吸入60s激发咳嗽。灌胃期间隔日雾化1次。除正常组外，其余各组均出现呼吸加快、不同程度的咳嗽、腹肌收缩现象，说明本次造模成功。

2.2给药

6周后第1次激发咳嗽后，按照动物剂量换算表计算豚鼠灌胃量，西药组1mg/kg，止咳剂低中高剂量组分别为5g/kg，10g/kg，20g/kg。模型组和正常组灌胃同等剂量的生理盐水，每日灌胃1次，连续10天。

2.3标本采集与检测

用10%的水合氯醛（剂量3.3ml/kg）腹腔注射麻醉各组豚鼠，夹板固定后进行解剖。血清的收集：打开腹腔，进行腹主动脉取血3ml放入采血管中，室温中凝固30min，然后1000g离心10min，收集血清，-20℃冰箱冷冻保存，用于ELISA检测。BALF的收集：打开胸腔，迅速结扎右主支气管，将气管及双肺剪下后，称重，按左肺重量：生理盐水冲洗量=1：2的比例收集肺泡灌洗液，然后2000g离心10min留取上清液，-20℃冰箱冷冻保存，用于ELISA检测。测定豚鼠血清及肺泡灌洗液中组胺和白三烯的含量采用采用双抗夹心法ABC-ELISA法。操作步骤依据试剂盒说明书的步骤依次进行。测定各孔OD值（用在酶标仪450nm处），X轴为标准品OD值，Y轴在半对数纸上画出标准曲线为浓度。根据样品OD值在该曲线图上查出相对应的豚鼠组胺和白三烯的含量。

2.4统计学处理

实验数据结果采用17.0SPSS统计软件进行处理分析，以（±s）表示，组间差异使用单因素方差分析（F检验），两两比较方差齐性采用LSD法，P<0.05说明差异存在统计学意义。

3结果

3.1桑皮止咳颗粒剂对豚鼠血清及BALF中组胺含量的影响

模型组血清及BALF中组胺含量明显高于其它各组，差异有统计学意义（P<0.05）；西药组、止咳剂中、高剂量组相互之间组胺含量差异无统计学意义（P>0.05），但是止咳剂低剂量和西药组组胺含量差异有统计学意义（P<0.05）；止咳剂低剂量组和中、高剂量组比较组胺含量差异有统计学意义（P<0.05）。

注：与正常组比较，＃P<0.05；与模型组比较，*Δ☆◇P<0.05；与西药组比较，ΔP<0.05，☆◇P>0.05。

4讨论

咳嗽变异性哮喘的主要临床表现为慢性咳嗽，其主要病理基础就是气道炎症。组胺和白三烯对气道也有着不同的刺激作用，都是形成气道炎症的重要炎性介质，两者相互作用又可促使气道高反应（AHR）产生或加重，形成CVA的病理特征。抗组胺类药物能够选择性的与H1受体相结合，可有效的抑制人体内嗜碱性粒细胞和肥大细胞中介质的释放，从而阻止前者向炎症部位的游走和聚集，减少内皮细胞黏附分子的表达以及改变炎症因子[3]。白三烯受体拮抗剂则能有效降低AHR，改善气道痉挛，减少血浆渗透，从而缓解患儿咳嗽症状。目前西医治疗过敏性咳嗽主要使用β2受体激动剂、磷酸二酯酶抑制剂、抗组胺药、白三烯受体拮抗剂等药物。顺尔宁是迄今为止证实有效的一种特异性半胱氨酰白三烯受体拮抗剂（cysLT1），因此本次实验选其作为西药对照组药物。相关人士测定了哮喘发作期患儿尿中半胱酰胺白三烯的水平明显高于健康儿童，说明其参与了哮喘发作的过程，变应原刺激机体时，导致肥大细胞和嗜酸性粒细胞等脱颗粒和释放介质，其中新合成的介质中含有白三烯，也为临床和实验的应用提供了理论依据[4]。本次实验结果显示西药组的指标含量均较模型组降低，说明顺尔宁能够阻断cysLT1与白三烯受体结合，其释放的介质白三烯含量水平亦随之下降，最终减轻气道炎症，从而改善症状。

西药对于慢性咳嗽的治疗可有效缓解患儿临床症状，改善预后，但针对正处于生长发育期的儿童来说，临床副作用相对较多，且病情易出现反复在停药过后[5]近年来，随着中医药在儿童过敏性咳嗽治疗方面的快速发展。一些临床[6]及实验[7]研究证实，中药对于过敏性咳嗽的治疗在减少不良反应，缩短疾病疗程方面发挥了一定的优势。

桑皮止咳颗粒剂是以《医学心悟》的止嗽散和《小儿药证直诀》的泻白散化裁而来，重在清泄肺中伏火、降逆止咳。现代药理学和动物实验证明，止嗽散[8]和泻白散[9]均是治疗过敏性咳嗽的有效方剂。桑白皮为本方君药重用，首见于《神农本草经》，味甘，性寒，入肺经，具有清肺平喘、行水消肿的作用，现代药理[10]研究表明，桑白皮可镇痛、抗炎，亦可镇咳、祛痰和平喘。地骨皮，性寒、味甘，归肺、肝、肾经，具有清肺降火、凉血除蒸的作用，对肺热咳嗽的治疗效果甚好，现代药理[11]研究表明，地骨皮水煎剂即可调节免疫功能，又可抗微生物，作用广泛。杏仁为本方臣药，味苦、性微温，具有止咳平喘的功效。桔梗、牛蒡子为本方佐药，共同具有宣肺祛痰利咽的功效。甘草作为使药，能够祛痰止咳，又兼调和诸药，上述药物的共同作用，降逆止咳平喘，使得桑皮止咳颗粒剂具有清泻肺中伏火、清除肺中郁热的作用。实验结果显示，模型组与正常组和其他各用药组相比，一般情况加重、血清和BALF中组胺和白三烯的含量增多，说明咳嗽变异性哮喘的咳嗽症状与组胺和白三烯这些炎症介质导致气道炎症和气道高反应性有着一定的关联；此外，西药组只与止咳剂低剂量组中组胺和白三烯含量差异有统计学意义（P<0.05），止咳低剂量组中组胺和白三烯含量降低程度不如西药组和止咳中高剂量组的明显。可见桑皮止咳颗粒剂能减轻肺组织炎症、有效的缓解咳嗽症状，作用机制可能与调节参与免疫炎症反应的炎症介质组胺和白三烯的水平相关，但需要达到足够的剂量时才能更为有效的发挥临床药理作用。

今后，在中医儿科理论指导下，应进一步完善桑皮止咳颗粒剂的临床前药理研究及试验设计方案，为桑皮止咳颗粒剂提供更为科学、全面的临床使用理论依据。

参考文献

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[5]刘宁，单晓丽，刘光华.自拟中药方治疗小儿过敏性咳嗽临床疗效观察[J].大家健康，2014，8（19）：151.

[6]黄学英.中西医结合治疗小儿过敏性咳嗽的临床疗效观察[J].现代诊断与治疗，2014，13：2926-2927.

[7]邱忠民，刘琦，郭德华，等.缓激肽B2受体拮抗剂对致敏豚鼠模型咳嗽反应性的影响[J].中华结核和呼吸杂志，2002，25（2）：74-77.

[8]苗青，苗倩倩.基于止嗽散治疗咳嗽变异性哮喘的思路与方法[J].中医杂志，2011，52（19）：1643-1644.

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[10]杨乐，陈泣.桑白皮研究进展[J].江西中医学院学报，2007，19（3）：98-100.

[11]张秀云，周凤琴.地骨皮药理及临床应用研究进展[J].广州化学，2012，40（7）：48-49.

基金项目：辽宁省科技计划项目（2013226012）

第一作者：魏环（1991-），女，研究生，硕士，主要从事中西医结合临床（儿科学）研究。