西洛他唑联合阿斯匹林对老年ACS患者血小板聚集功能及PKB活性变化的影响的临床研究

西洛他唑联合阿斯匹林对老年ACS患者血小板聚集功能及PKB活性变化的影响的临床研究

苗磊刘培良

苗磊刘培良（辽宁省金秋医院心血管病急诊中心辽宁沈阳110016）

【中图分类号】RA【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）42-0052-01

大量研究表明〔1〕，老年急性冠状动脉综合症（ACS）冠脉内血栓形成的发生率为80％一85%，其中血小板活性异常增高是ACS血栓形成机制重要的病理生理基础。ACS患者冠状动脉不稳定斑块破裂后，血小板激活，导致血小板粘附聚集，血栓形成。蛋白激酶B(PKB）是一种丝氨酸／苏氨酸类蛋白激酶（PKB/AKT)，在血小板聚集中起十分重要的作用，可能有维持血小板活化的功能〔2〕。但目前国内有关PKB的资料不多，应用药物干预PKB功能的研究亦少见报道。本研究通过观察老年急性冠状动脉综合症（ACS）患者使用西洛他唑（Cilostazol,CS）治疗前后PKB活性的变化，旨在探讨CS对血小板功能的影响，为抗血小板治疗提供新的理论基础。

1.资料与方法

1.1病例选择

2012年6月一2014年2月入院治疗的老年急性冠状动脉综合症（ACS）患者48例，男27例，女21例，年龄67一75岁，平均（70.4士5.6）岁。ACS诊断标准按美国心脏病学会（ACC）、美国心脏病协会（AHA）制定的标准〔3〕。48例ACS患者既往均未系统服用抗血小板药物，随机分两组，CS组26例，阿斯匹林（Aspirin,AS）组22例；在常规抗凝治疗（静脉持续泵入肝素钠1000U/h）的同时给予抗血小板治疗，即CS组给予西洛他唑（天津大塚公司生产，商品名：培达）100mg/d口服；AS组给予阿斯匹林（德国拜耳公司生产，商品名：拜阿斯匹灵）300mg/d口服。各组间年龄、发病时间均无统计学差异（P＞0.05）。26例健康老年人作对照组(NC组)，男17例，女9例，平均年龄（67.5士6.9）岁，均为我院健康查体病人，除外冠心病、糖尿病、高血压、血液病及肾病等病史。检查前2W内未服用影响血小板功能的药物。

1.2血样本采集和测定方法

用药组于用药前10min及用药7天后的（从当日晨起服药时开始计时）3.5、6、24h分别采肘静脉血15ml、对照组清晨空腹采肘静脉血15ml，立即按常规方法分离新鲜血小板、红细胞。将其悬于粉碎缓冲液中(含2mmol/LEDTA，10mmol/LEGTA，20mmol/LTris/HClpH7.5，0.25mmol/L蔗糖)超声粉碎，100000×g离心60分钟，取上清为胞液组份。沉淀部分悬于含1%TritonX-100的上述缓冲液中，超声粉碎后置放12小时，再经100000×g离心60分钟，上清为可溶性膜组份。测定血小板聚集率和PKB的活性。应用北京普利生BY一NJ2四通道血小板聚集仪采用比浊法〔4〕测定血小板最大聚集率，诱导剂二磷酸腺苷（ADP）由Sigma公司提供，终浓度为4.0μmol/L。PKB活性测定：以HistoneH2B为底物，反应总体积为50μl。30℃反应10min点样、烤干，测定放射活性数。酶活性表示为30℃时每毫克蛋白质每分钟催化多少（pmol）γ-32P掺入底物蛋白。参考Lowrry法进行蛋白定量测定。

1.3统计学处理数据以x±s，表示，组间比较用t检验。

2结果

2.1所有ACS患者血小板最大聚集率均明显增加，与NC组对比，有显著差异（P<0.01）。口服CS、AS后3.5小时血小板最大聚集率均较用药前明显降低（P＜0.01),6h时下降最明显，但24h时CS对血小板聚集仍有较强的抑制作用，而AS对血小板聚集的抑制作用基本消失（P＞0.05）。结果见表1。

2.2ACS患者血小板胞膜PKB表达较NC组明显增高（P＜0.01)，而胞浆PKB表达则显著降低（P＜0.01）。口服CS6h后UAP组患者血小板胞膜PKB活性较用药前明显下降（P＜0.01)；而胞浆PKB表达则已明显升高；6h时AS组两指标虽有所变化，但用药前后比较无显著差异。24h时CS组患者血小板PKB活性与用药前比较无显著差异（P＞0.05）。结果见表2。

表1CS、AS对血小板聚集率的影响（%，x±s)

与NC组比较：1)P<0.01，与用药前比较：2)P<0.01,3)P<0.05

3讨论

ACS是从不稳定型心绞痛到Q波心肌梗死之间的临床症候群，在诊断和病理生理上是一连续体。常导致猝死等严重后果〔1-5〕。其血管病理基础是动脉粥样硬化斑块破裂，局部伴有血栓形成或血小板活化等不稳定因素，因此易发展成血管闭塞，引发严重临床心脏事件甚至心肌梗死或碎死。血小板活化在ACS的病理生理过程中发挥重要作用〔6〕。PKB的活性变化是导致血小板聚集及维持血小板活化状态的重要基础，测定PKB的活性可反映血小板的活化程度及功能状态。本实验中所有老年ACS患者血小板最大聚集率均明显增加（P＜0.01)；血小板胞膜PKB表达明显增高（P＜0.01)；而胞浆PKB表达则显著降低（P＜0.01)，三者与对照组相比均有显著差异。PKB在老年ACS患者体内血小板胞膜和胞浆的不同变化，是导致血小板膜磷酸化，胞膜损害，血小板活性物质释放，加重血小板粘附聚集的关键步骤。说明在老年ACS患者体内血小板处于高度活化状态。因此，应用有效的抗血小板药物治疗对临床控制病情及预防并发症十分重要。

西洛他唑(cilostazol，CS)是一种新型合成的抗血小板药物，可抑制血小板聚集。其作用优于阿斯匹林、潘生丁。同时还能改善局部的血液供应〕，具有潜在的抗动脉硬化作用。CS通过抑制血小板内磷酸二脂酶的活性，使cAMP增加，在抑制血小板聚集的同时，还能抑制血栓烷素A2的产生，临床上具有扩张血管的作用。实验中发现口服CS、AS后3.5h血小板最大聚集率均较用药前明显降低（P＜0.01),6h时下降最明显，但24h时CS对血小板聚集仍有较强的抑制作用，而阿斯匹林（AS）对血小板聚集的抑制作用基本消失（P＞0.05）。这是由于AS的作用机制与CS不同，AS主要抑制血小板内及血液中的环氧化酶，进而抑制花生四烯酸向血栓素A转化，产生抗血小板聚集的作用。

文献报道应用肝素和阿司匹林6h后，体内达到最大抗凝效果，本实验中口服CS6h后ACS组患者血小板胞膜PKB活性较用药前明显下降（P＜0.01)；而胞浆PKB表达则已明显升高；但6h时AS组两项指标虽有所变化，用药前后比较却无显著差异。说明普通抗凝剂和AS的应用并不能有效地抑制血小板活化，老年ACS患者体内仍存在血小板的高度激活。CS不仅对血小板最大聚集率的抑制作用时间优于AS，而且对PKB亦能够有效抑制，这种作用在6h达到高峰，于24h消失。CS通过PKB途径抑制血小板活化的机制有待于今后进一步研究和证实。

参考文献

[1]胡大一黄元铸急性冠状动脉综合症1-16人民卫生出版社2001.05

[2]富萍，胡静，李廷富，等.老年冠心病患者血小板蛋白激酶B的活性变化〔J〕中华心血管病杂志，2003:31(4):301.

[3]ACC/AHAGuidelinesforthemanagementofpatientswithunstableanginaandnon–st-segmentelevationmyocardialinfarction.AreportOfAmericanCollegeOfCardiology／AmericanHeartAssociationTaskForceorPracticeGuidelines〔J〕.JAmCollCardiol.2000:36:970-1062

[4]郭美琦，黄繁始，吴维云，等西洛他哇对健康人血小板聚集功能及出血时间的影响〔J〕.中华内科杂志，1999:38(7):598-9

[5]GurbarzE,StegPG,VahanianA.Mostunstableanginapatientsbenefitfromanaggressiveapproachtoearlyintervention〔J〕EurHeartJ,1999:l:12-9

[6]ColomboA,HallP,NakamuraS,etal.Intracoronarystentingwithoutanticoagulationaccomplishedwithintravascularultrasound〔J〕Circulation,1995:91:1676-88