食源性致病菌监测质控考核结果分析

食源性致病菌监测质控考核结果分析

徐红陈丽

徐红陈丽(彭州市疾病预防控制中心四川彭州611930)

【中图分类号】R195【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）26-0062-02

【摘要】目的对质控考核样品进行检测，分离鉴定沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，并分析其中特别的生物学现象。方法按照《食品安全国家标准食品微生物学检验（GB4789.4-2010）》对考核检样进行检测。结果分离出都柏林沙门氏菌而未分离出金黄色葡萄球菌，并在检验过程中观察到特别的生物学现象。结论沙门氏菌在沙门氏菌属显色培养基上并非都一致显紫色，极个别有时也显示蓝色。

【关键词】分离鉴定都柏林沙门氏菌金黄色葡萄球菌生物学现象

AnalysisforAssessmentResultsofSurveillanceand

Quality-controlofFoodbornePathogenicBacteriaXuhongChenLi

（PengzhouCentreforDiseaseControlandPreventionPengzhouSichuan611930China)

【Abstract】Object:Assessmentofquality-controlsampleswereexaminedtoisolateandidentifysalmonellabesidesstaphylococcusaureusandanalysebiologicalphenomenonswithinthesamples.Methods:AssessmentsampleswereevaluatedaccordingtotheNationalStandardsforFoodSafety:MicrobiologyExaminationforFoods,GB4789.4-2010Edition.Results:Salmonelladublinratherthanstaphylococcusaureuswasisolated,andunusualbiologicalphenomenonswereobservedduringtheexamination.Conclusions:Salmonelladoesn’talwaysappearinpurpleonthechromogenicmediumofsalmonella,whereasextremeinpidualsalmonellashowsblueincolorsometimes.

【Keywords】isolateandidentifysalmonelladublinstaphylococcusaureusbiologicalphenomenon

沙门氏菌中最早被发现的是猪霍乱沙门氏菌，为肠杆菌科，沙门氏菌属，革兰氏阴性无芽孢杆菌，多为动物致病菌，但也可通过污染食品或水源等途径感染人类，成为人类的条件致病菌。金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，为革兰氏阳性球菌，多存在于人和动物的鼻腔、咽喉、皮肤及外界相通的腔道，属于人畜共患病原菌。本次质控考核样本是模拟受污染的奶粉028号，要求对样本进行沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分离鉴定。

一实验准备

1、仪器设备：恒温培养箱（编号：PZCDC/YQ—083）电子天平，显微镜等。

2、培养基及试剂：缓冲蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、亚硫酸铋琼脂（BS）、HE琼脂、沙门氏菌属显色平板、三糖铁琼脂（TSI）、赖氨酸脱羟酶培养基（LD）、尿素酶琼脂（U）、V-P半固体琼脂（VP）、吲哚培养基（I）、氰化钾培养基（KCN）、丙二酸钠培养基（M）、沙门氏菌属诊断学清、7.5%氯化钠肉汤、血平板、Baird-Parker琼脂、营养琼脂斜面（NA）、营养肉汤、沙门氏菌标准菌株CMCC(B)50115、金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC(B)2600、冻干兔血浆、革兰氏染色液、灭菌生理盐水等。

以上培养基及试剂均购自北京陆桥生物制剂有限公司，并都在有效期内。

二实验步骤

先分别复苏标准菌株；在考核样品（028）中加入10ml营养肉汤，混匀待检。

（一）沙门氏菌检测

1、前增菌：以无菌操作取混匀的质控检样（028）营养肉汤1ml加到10ml缓冲蛋白胨水中，置恒温培养箱35.9℃培养18h，同时做CMCC(B)50115阳性对照。

2、增菌培养：取1ml样品的BPW培养液，加入10mlTTB试管中，另取1ml加入10mlSC试管中，TTB置42℃培养20h，SC置35.9℃培养20h，同时做阳性对照。

3、分离培养：将各管增菌培养液摇匀，以无菌操作分别划线BS、HE和沙门氏菌属显色平板，于35.8℃培养24h。

4、观察菌落特征：详见下表：

表1不同选择性琼脂平板上菌落特征

特别的是，CMCC(B)50115标准菌株在沙门氏菌属显色培养基上呈现蓝色。

5、染色镜检：挑取BS上黑色菌落，HE上蓝绿色及中心黑色菌落，沙门氏菌属显色培养基上紫色菌落分别作革兰氏染色镜检，结果都为G-无芽孢杆菌，CMCC(B)50115标准菌株也为G-无芽孢杆菌。

6、生化试验：挑取典型可疑菌落转种TSI和NA，于35.8℃培养24h。挑取NA上纯培养物作赖氨酸、靛基质、尿素、KCN、V-P、丙二酸钠试验，结果如下表：

表2生化鉴定试验

(注：K：产碱，A：产酸；+：阳性，-阴性）

以上生化试验符合沙门氏菌特征，可做血清学试验。

7、血清学试验:将质控检样和阳性标准菌株CMCC(B)50115纯培养物用标准血清做玻片凝集试验，同时做生理盐水对照。结果，质控检样：A～F多价O血清+++，因子血清O9,12+++，Hg,p+++；阳性标准菌株CMCC(B)50115：A～F多价O血清+++；因子血清O4,12+++；Hi++，H1,2++；生理盐水-。

9、结果：综合以上生化试验和血清学鉴定结果，可判定检出沙门氏菌属—都柏林沙门氏菌。

(二)金黄色葡萄球菌检测

1、增菌培养：无菌操作取1ml营养肉汤检样至盛有10ml7.5%氯化钠肉汤中，摇匀，于35.9℃培养20h，同时做金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC(B)26003阳性对照。

2、分离培养：将上述培养物分别划线接种到血平板和Baird-Parker琼脂平板上，35.9℃培养24h，观察菌落特征。

表3不同琼脂平板上菌落特征

4、镜检：挑取以上不同平板上较可疑菌落作革兰氏染色镜检，结果质控检样（028）的血平板上白色菌落为G-无芽孢杆菌，Baird-Parker琼脂平板上黑色菌落为G＋较长杆菌，CMCC(B)26003为G＋葡萄状球菌。

5、结果：综合观察菌落特征和革兰氏染色镜检结果，可以判定未检出金黄色葡萄球菌。

三结论

检出都柏林沙门氏菌；未检出金黄色葡萄球菌。

四讨论

本次实验我们检出肠杆菌科沙门氏菌属都柏林沙门氏菌，而未检出金黄色葡萄球菌。实验中，做沙门氏菌检测时，我们看到质控检样和沙门氏菌标准菌株（CMCC(B)50115）在镜检、生化试验和血清学试验上都符合沙门氏菌特征，所以得出结论是检出沙门氏菌属都柏林沙门氏菌。在做金黄色葡萄球菌检测时，质控检样在菌落特征和镜检结果上都不符合标准金黄色葡萄球菌的特征，所以得出结论是未检出金黄色葡萄球菌。另外，特别要提的是，沙门氏菌在沙门氏菌属显色培养基上一般显示紫色，此次实验所检测的质控检样正是呈现紫色，显色非常典型；而所用沙门氏菌标准菌株（CMCC(B)50115）在沙门氏菌属显色培养基上显示蓝色，通常大肠菌群在该显色培养基上也显示蓝色，挑选菌株时很难将两者相区别。此次实验说明沙门氏菌显色有时并不稳定。所以提醒各位同仁在做沙门氏菌的分离鉴定中，不仅要注意沙门氏菌属显色培养基上典型的紫色菌落，对在沙门氏菌属显色培养基上呈现蓝色的菌落也要重视。建议先做革兰氏染色镜检及生化初筛实验（三糖铁琼脂、赖氨酸脱羧酶试验），若符合，就用A-F多价O血清作玻片凝集试验，若凝集，再作进一步的生化实验和血清学鉴定，以此提高沙门氏菌的检出率，防止漏检。

参考文献

[1]《食品安全国家标准食品微生物学检验(GB4789.4-

2010)》[S].

[2]食品卫生微生物检验标准检验手册（中国标准出版社）[M]34—44.

[3]齐小秋.病原生物学检验—细菌（卫生部病原生物学检验教材编写组）[M]276—286.