染色体异常、AZF基因微缺失与患者无少精、重型畸精的关系分析

染色体异常、AZF基因微缺失与患者无少精、重型畸精的关系分析

乔伶俐陈亚军曾宪琪黄丽婵

乔伶俐陈亚军曾宪琪黄丽婵

(韶关市妇幼保健院新生儿疾病筛查中心广东韶关512026)

【摘要】目的：通过回顾性分析讨论染色体异常和AZF基因缺失与患者无少精和重型畸精是否有直接或间接的关系。方法：收集161例男性无少精和重型畸精患者血液样本，提取DNA，采用PCR技术进行基因（AZFa、AZFb、AZFc和SRY）微缺失的检测；制备染色体并进行核型分析。结果：在161例患者中发现8例AZF基因缺失，7例47，XXY，7例染色体异常，8例常染色体多态，17例Y染色体多态（14例大Y加3例小Y），3例Y染色体臂间倒位。结论：AZF基因缺失、克氏综合征、染色体多态和异常与患者无少精和重型畸精有一定的关系，临床医生应高度重视。

【关键词】无少精；重型畸精；AZF基因微缺失；染色体多态；染色体异常

【中图分类号】R394【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）12-0070-02

TitleTherelationshipanalysisofchromosomeabnormalities,AZFgenedeletionandthezoospermia,oligospermia,severeteratospermiaofpatients

【Abstract】ObjectiveTodiscusswhetherthereisadirectorindirectrelationshipbetweenchromosomeabnormalities,AZFgenedeletionandthezoospermia,oligospermia,severeteratospermiaofpatientsthroughtheretrospectiveanalysis.MethodsBloodsamplesfrom161malepatientswithzoospermia,oligospermiaorsevereteratospermiawerecollectedandtheDNAwasextractedfromtheblood.GenesofAZFa、AZFb、AZFc、SRYwereamplifiedthoughPCR,andtheAZFgenedeletionwasdetected.Thechromosomeswerepreparedforkaryotypinganalysis.Results8casesofAZFgenedeletion,7casesof47,XXY,7casesofchromosomeabnormalities,8casesofautosomalpolymorphism,17casesofYchromosomepolymorphism(including14casesoflargeYand3casesofsmallY)and3casesofpericentricinversionofYchromosomeweredetectedfromthe161patients,respectively.ConclusionThereisacertainrelationshipbetweenAZFgenedeletion,Klinefelter'ssyndrome,chromosomepolymorphism,chromosomeabnormalitiesandthezoospermia,oligospermia,severeteratospermiaofpatients,whichshouldbeattachedgreatattentiontoclinicians.

【Keywords】Zoospermiaandoligospermia;Severeteratospermia;AZFgenedeletion;Chromosomepolymorphism;Chromosomeabnormalities

全世界大约有15%的育龄夫妇不育，不育夫妇中大约有50%与各种因素导致的男性精子发生障碍有关，其中30%的男性精子发生障碍是由染色体异常和基因突变、缺失等遗传因素造成的[1]。在男性不育患者中，常见的情况是无精症（azoospermia）、少精症（oligospermia）和重型精子畸形。畸形精子是指头，体，尾的形态变异：头部畸形有巨大头、无定形和双头等；体部畸形有体部粗大、折裂、不完整等；尾部畸形有卷尾、双尾、缺尾等。在精子发生障碍引起的男性不育患者中，AZF基因缺失发生率仅次于Klinefelter’ssyndrome（克氏综合征），是居于第二位的遗传因素[2]。但是目前越来越多的研究发现染色体多态对精子发生和精子质量也有重要影响，是造成男性不育的重要因素之一[3，4]。因此，研究我国男性不育人群中染色体多态的类型及其与精液质量的关系对男性不育的病因研究、诊断和男性生育能力。

1.材料与方法

1.1对象

来自韶关市妇幼保健院生殖中心的2013年度161例男性少弱精和重型畸精患者，在患者知情同意的情况下抽取肝素钠抗凝和EDTA抗凝血各2ml，用于染色体核型分析和AZF基因检测。

1.2试剂

染色体核型分析采用达晖生物技术有限公司和启贸易有限公司的淋巴细胞培养液进行双线培养，AZF基因检测采用亚能生物技术有限公司生产的Y染色体微缺失基因检测试剂盒。

1.3方法

1.3.1染色体核型分析：抽取患者静脉血量约2ml,采用外周血淋巴细胞培养，常规制备染色体，应用G显带技术进行核型分析，计数中期分裂相20个，分析3个核型。核型分析按人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN2005）进行。若怀疑嵌合体，则计数100个分裂相。

1.3.2AZF基因检测：抽取患者静脉血量约2ml，使用EDTA抗凝。按照QIAGEN公司全血DNA提取试剂盒说明书提取DNA。采用多重PCR技术扩增患者AZFa、AZFb、AZFc和SRY基因，用2%琼脂糖凝胶电泳来分离PCR产物，在凝胶成像分析系统下观察结果。

2.结果

表1：161例男性患者标本中有51例异常，结果分析如下：

3.讨论

无少精和重度畸精是男性不育的重要原因之一，与遗传因素有密切关系，尽管尚未证实与某一特定基因有直接关系，但经过多年努力已在Y染色体上确定出部分候选基因，这些基因可能共同参与了生精过程，如果其中一些重要的基因发生变异或缺失就可能导致生精功能异常。已有研究表明Y染色体AZF基因的微缺失与男性原发性无少精和重度畸精密切相关，本实验AZF基因微缺失占异常比例为15.7%，可表明与男性无少精和重度畸精直接相关。克氏综合征的患者临床表现为严重的少精子或无精子且有睾丸小，输精管的玻璃样变性、生精细胞和睾丸间质细胞畸形等特点[5]。本次实验克氏综合征患者占异常比例达13.7%，表明和男性无少精和重度畸精有直接关系。近年来研究发现在不育男性中染色体多态比例明显高于一般人群，其对精子发生的影响及临床病理意义尚存在争议。在本次实验中Y染色体多态的共有17例患者，占异常比例高达33.3%，可以认为Y染色体多态和无少精和重度畸精症存在一定的关系，但仍需要大样本进一步验证。常染色体多态在本次实验中占异常比例为11.8%，Yakin等[6]的研究发现9qh+和16qh+虽然对精子密度无明显影响，但是精子常发生非整倍体异常和畸形，从而影响受精、胚胎着床和妊娠。可提示常染色体多态与无少精和重度畸精有一定的间接关系。由于染色体多态在人群中发生率较高，且临床病理意义不明确，告知患者染色体多态的诊断可能引起不必要的恐慌，因此对患者提供遗传咨询尤为重要。综上所述，AZF基因缺失、克氏综合征、染色体多态和异常与患者无少精和重型畸精有一定的关系，临床医生应高度重视。

【参考文献】

[1]HoppsCV,MielnikA,GoldstdeinM,etal.DetectionofsperminmenwithYchromosomemicrodeletionsoftheAZFa,AZFb,andAZFcregions[J].HumRepord,2003,18(8):1660.

[2]M．Simoni,E.BakkerandC.Krausz.EAA/EMQNbestpracticeguidelinesformoleculardiagnosisofy-chromosomalmicrodeletions.Stateoftheart2004.JAndrology,2004,27:240-249.

[3]Kent-FirstM,MullemA,ShultzJ,etal.DefiningregionsoftheYchromosomeresponsibleformadeinfertilityandindentificationofafourthregion(AZFd)byYchromosomemicrodeletiondetection[J].MolReprod,1999,53(1):27-41.

[4]MadonPF,AthalyeAS,ParikhFR.Polymorphicvariantsonchromosomesprobablyplayasignificantroleininfertility.ReprodBiomedOnline.2005;11(6):726-732

[5]MinocherhomjiS,AthalyeAS,MadonPF,etal.Acase-controlstudyidentifyingchromosomalpolymorphicvariationsasformsofepigeneticalterationsassociatedwiththeinfertilityphenotype.FertilityandSterility.2009;92(1):88-95