乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定性能研究

乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定性能研究

刘培龙

刘培龙

江苏省南通市第二人民医院226000

摘要：目的研究胶体金免疫层析法血清快速测定乙型肝炎表面抗原的性能。方法选取2014年3月—2015年2月在我院门诊、住院部以及体检中采集的待测血清标本300份，应用酶联免疫吸附法（ELISA）和胶体金免疫层析法（GICA）同时对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）定值血清和300份待测血清标本进行测定，分析并评价GICA法的测定结果。结果ELISA法对HBsAg的最小检出量为0.5ng/ml，GICA法对HBsAg的最小检出量为1.0ng/ml，因此，GICA法对HBsAg的敏感性低于ELISA法；ELISA法HBsAg的阳性检出率为22.67%，GICA法HBsAg的阳性检出率为20.33%，两种检测方法的阳性检出率差异不显著（P＞0.05）；而两种检查方法对HBsAg阳性检出的符合率为97.1%。结论胶体金免疫层析法与酶联免疫吸附法对HBsAg的阳性检出的符合率较高，且检测速度快，准确率较高，因此，胶体金免疫层析法适用于急诊HBsAg检测、初筛检查以及标本量相对较少的基层医疗机构和个体诊所，但由于其敏感性较低，所以，不适用于大批量的HBsAg检测。

关键词：乙型肝炎；乙肝表面抗原；胶体金免疫层析法；酶联免疫吸附法

乙型肝炎是由乙肝病毒引起的，主要变现为乏力、食欲减退、恶心、厌油、肝功能异常等，少数患者的病程迁延，可以转为慢性肝炎，部分可发展为肝硬化和肝癌。乙肝有抗原、核心抗原和表面抗原三种抗原，其中，表面抗原（HBsAg）在血液中的含量相对较多，是免疫检验乙肝病毒感染的主要标志。乙肝对人类的健康造成了严重的威胁，我国乙肝病毒的感染率比较高，表面抗原在一般人群中的阳性检出率为9.09%[1]。为了研究胶体金免疫层析法血清快速测定乙型肝炎表面抗原的性能，本文应用ELISA法和GICA法同时对HBsAg定值血清和300份待测血清标本进行了测定，报道如下：

1资料与方法

1.1研究对象：选取2014年3月—2015年2月在我院门诊、住院部以及体检中采集的待测血清标本300份，所有标本均在空腹状态下抽取，且在1h内分离出血清进行检测。

1.2研究所用的仪器和试剂：研究中所用的全自动酶免分析仪是由美国伯乐公司提供的。检测HBsAg所用的GICA试纸和ELISA试剂盒是由北京万泰生物药业有限公司生产，均在有效期内。HBsAg定值血清的含量分别为0.5ng/ml、1.0ng/ml和2.0ng/ml，均统一从卫生部临床检验中心采购而来。

1.3检测方法：

ELISA法：首先，用一次性血红蛋白微量吸管于相应的孔中加入质控品、待测血清标本、阴性及阳性的对照血清，并做标记；之后于每个空中加入酶标抗体，混匀并在37℃的条件下放置1h；然后按照说明添加底物，在37℃避光的条件放置15min后加终止液，停止反应。HBsAg定值血清的检测与待测血清标本相同。

CICA法对300份待测血清标本的检测严格按照说明书进行：首先，将试纸条固定在操作卡上，其次用一次性血红蛋白微量吸管吸取20ul的待测血清，在试纸条的加样区加样，加样后10～30min在光线充足的环境中对结果进行判读。HBsAg定值血清的检测与待测血清标本相同。

1.4结果的判读[2]：ELISA法：若S/CO≥1.0，为阳性，若S/CO≤1.0，为阴性。GICA法：加样10～30min内，检测带出现红色反应则为阳性，否则为阴性。

1.5统计学方法：

应用SPSS13.0统计分析软件对实验结果进行统计分析，计数资料以率表示，采用X2校验进行比较；对两个变量间的关系比较作相关数据分析后，P<0.05，则差异显著，具有统计学意义；P>0.05，则差异不显著，无统计学意义。

2结果

2.1两种检查方法对HBsAg定值血清的检测结果：3中含量不同的HBsAg定值血清中，ELISA法的最小检出量为0.5ng/ml，GICA法的最小检出量为1.0ng/ml，由此可知，GICA法对HBsAg的敏感性低于ELISA法。

见表1。

表1：ELISA法与GICA法对HBsAg定值血清的检测结果：

HBsAg定值血清（ng/ml）ELISA法GICA法

0.5阳性阴性

1.0阳性阳性

2.0阳性阳性

2.2两种检查方法对300份待测血清标本的检测结果：ELISA法HBsAg的阳性检出率为22.67%，GICA法HBsAg的阳性检出率为20.33%，两种检测方法的阳性检出率差异不显著（P＞0.05）。而两种检查方法对HBsAg检出情况的符合率为97.1%。见表2。

表2：两种检查方法对300份待测血清标本检测结果的比较

检测结果ELISA法GICA法

阳性6861

阴性232239

总计300300

3讨论

目前临床上检测乙型肝炎病毒血清学标志物的要方法以免疫学检测法和分子生物检测法为主，本次试验中的ELISA法和GICA法均属于免疫学方面的检测。ELISA法在临床上使用的时间比较长，对HBsAg的检测结果也较为可靠，但由于操作繁琐、结果需要较长的时间才能得出，因此，临床应用有一定的局限性[3]。而GICA法是近年来新起的一项检测技术，凭借其操作简便、检测速度快、随到随测以及试剂稳定等优势在临床上得到了广泛的应用[4]。本次研究中，应用ELISA法和GICA法同时对HBsAg定值血清和300份待测血清标本测定后，ELISA法对HBsAg的最小检出量为0.5ng/ml，GICA法对HBsAg的最小检出量为1.0ng/ml，得出GICA法对HBsAg的敏感性低于ELISA法；ELISA法HBsAg的阳性检出率为22.67%，GICA法HBsAg的阳性检出率为20.33%，两种检测方法的阳性检出率差异不显著（P＞0.05）；而两种检查方法对HBsAg阳性检出的符合率为97.1%。说明胶体金免疫层析法能为与酶联免疫吸附法对HBsAg的阳性检出的符合率较高，且检测速度快，准确率较高，因此，胶体金免疫层析法适用于急诊HBsAg检测、初筛检查以及标本量相对较少的基层医疗机构和个体诊所，但有其敏感性低，所以，不适用与大批量的HBsAg检测。

参考文献：

[1]简敏华，张健，陈慧英等.乙型肝炎病毒血清标志物GICA检测性能的比对分析[J].检验医学，2013，（11）：1040-1043.

[2]孟峻，张保平，王永祥等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原应用评价[J].中国病案，2013，14（11）：封2，2.

[3]马光.乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估[J].中国实用医药，2014，（26）：142-143.

[4]廉凤芝.测定乙肝表面抗原（HBs-Ag）酶联免疫法与胶体金免疫层析法的临床比较分析[J].中国民族民间医药，2011，（16）：106.