不同标本巨细胞病毒DNA检测在小儿巨细胞感染中的应用

不同标本巨细胞病毒DNA检测在小儿巨细胞感染中的应用

王敬衍王斌

青岛大学266000

摘要：目的用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法定量检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染婴儿血液、尿液及对应母亲乳汁中的HCMV-DNA，评估三者在不同年龄组内辅助诊断HCMV感染的意义。方法选择2014年1月-2015年2月金乡县人民医院收治的180例疑似HCMV感染婴儿，根据年龄分为两组：新生儿组（<28d，n=49）和28d-5个月组（n=131），分别收集血液、尿液及母乳，分别检测HCMV-DNA。结果新生儿组血液、尿液及母乳HCMV-DNA阳性检出率分别为59.8%、20.4%和83.7%，28d-5个月组三者检出率分别为64.9%、87.8%和74.0%，28d-5个月组尿液检出率显著高于新生儿组（P<0.01），而母乳检出率却显著低于新生儿组（P<0.01）。结论不同年龄组尿液及母乳中HCMV-DNA检出率不同，根据年龄选择合适的送检标本对提高检出率具有重要意义。

关键词：人巨细胞病毒；血液；尿液；乳汁

【Abstract】：ObjectiveToquantifyhumancytomegalovirus（HCMV）DNAinthebloodandurineofinfantsofdifferentageswithsuspectedHCMVinfection，andinthebreastmilkoftheirmothers。MethodsAtotalof180infantsfromJinXianghospitalwithsuspectedHCMVinfectionwerepidedintogroupsA（<28days；n=49）andB（28daysto5months；n=131）accordingtotheirages.Bloodandurinewerecollectedfromtheinfants，andbreastmilkwascollectedfromtheirmothers.ResultsIngroupA，HCMVDNAdetectionratesinblood，urineandbreastmilkwere59.8%，20.4%and83.7%respectively.IngroupB，HCMVDNAdetectionratesinblood，urineandbreastmilkwere64.9%，87.8%and74.0%respectively.HCMVDNAdetectionrateinurineingroupBwassignificantlyhigherthaningroupA（P<0.01），however，HCMVDNAdetectionrateinmothers'breastmilkingroupBwassignificantflylowerthaningroupA（P<0.01）.ConclusionsHCMVDNAdetectionratesinurineandbreastmilkaredifferentamonginfantsofdifferentages，souseofsuitablespecimensaccordingtoageisofgreatsignificanceforimprovingdetectionrate.

Keywords：Humancytomegalovirus；；Blood；Urine；Breastmilk；

巨细胞病毒（CMV）感染广泛存在，发病率高，危害大，尤其是孕妇、婴儿以及器官移植者[1]。因此，选择快速、灵敏、特异的检测方法，对CMV感染患者早期、准确诊断，指导临床治疗以及判断预后非常重要。本文应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测怀疑CMV感染婴儿血、尿及对应母乳CMV-DNA，评估三者在不同年龄组内辅助诊断HCMV感染的研究，现报道如下。

1资料与方法

1.1研究对象

180例疑似HCMV感染婴儿，为金乡县人民医院医院2014年1月至2015年2月门诊及住院患儿，其中男105例，女75例，年龄3d至5个月。将疑似患儿根据年龄分为两组：新生儿组（<28d，49例）和28d-5个月组（131例）。1.2方法

1.2.1标本收集在接受治疗前，抽取患儿静脉血4mL于2个灭菌干燥管，同时留取中段晨尿约2mL于灭菌干燥管，同时留取患儿母亲乳汁5mL于干净无菌试管中，立即送检或置于4℃冰箱保存。

1.2.2CMVDNA检测采用FQ-PCR法，试剂盒由广州达安基因诊断有限公司提供。

1.3统计学方法

采用SPSS（11.5）软件进行统计分析。计数资料以百分率表示，计量资料以均数±标准差（x±s）表示。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组患儿血液、尿液及母乳HCMV-DNA检出率比较新生儿组49例疑似HCMV感染婴儿中，母乳检出率最高，血液次之，尿液最低（血液与尿液比较，χ2=19.321，P<0.001；血液与母乳比较，χ2=11.138；P=0.001；尿液与母乳比较χ2=47.281，P<0.001）。28d-5个月组131例疑似HCMV感染婴儿中，尿液检出率最高，血液和母乳检出率差别无统计学意义（血液与尿液检出率比较，χ2=31.480，P<0.001；尿液与母乳比较，χ2=16.584，P<0.001；血液与母乳比较，χ2=1.685，P=0.177）。将两组间血液、尿液及母乳HCMV-DNA检出率分别进行比较，结果显示28d-5个月组尿液检出率明显高于新生儿组（P<0.001），而母乳检出率则显著低于新生儿组（P=0.005）；两组间血液检出率差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3讨论

CMV感染人体后，可长期或终身潜伏在体内，在免疫正常的个体中多表现为无症状性感染，当免疫功能低下时，病毒可被激活而发生显性感染。

本研究是国内首次根据婴儿年龄进行分组，分别检测两组婴儿血液、尿液及母乳中HCMV-DNA。结果显示新生儿组母乳检出率最高，28d~5个月组尿液检出率最高，这为临床提供了参考，可以根据疑似患儿的年龄选择送检标本，以提高检出率，做到早诊断早治疗。新生儿组尿液检出率明显低于母乳检出率，随着患儿年龄增长，尿液的检出率增高，而母乳检出率降低，可能是由于初乳较为浓缩，而新生儿肾脏浓缩功能还不健全，导致母乳中病毒拷贝数相对较高而尿液中病毒含量非常低，而随着年龄增长，患儿肾脏浓缩功能逐渐健全而母乳逐渐稀释导致尿液检出率增高母乳检出率降低。这一发现提示对于有症状的疑似新生儿，若尿液HCMV-DNA阴性者，不应排除HCMV感染，应同时检测患儿的血液和母乳，以免漏诊。

本研究中，虽然两组内血液中HCMV-DNA的检出率均不是最高的，但不能忽视血液的检测，因为本研究中有3例患儿，尿液和母乳检测均为阴性而血液检测为阳性。因此，若患儿标本不易留取，应优先选择检出率高的标本，若条件允许，应同时留取血液、尿液及对应母亲的乳汁，以提高HCMV-DNA的检出率，防止漏诊，做到早诊断，早治疗。另外，由于HCMV的间歇性排毒性质，处于不排毒状态时检测的标本会产生与临床诊断不符合的现象，需反复、连续、多次检查HCMV-DNA，以提高检出率[2]。

参考文献：

[1]阮强，何蓉.人巨细胞病毒感染的实验室检测与诊断[J].实用儿科临床杂志，2012，27（10）：729-731.

[2]中华医学会儿科学分会感染消化学组，《中华儿科杂志》编委会.巨细胞病毒感染诊断方案[J].中华儿科杂志，1999，37（7）：441.