亚洲鼻炎丸质量标准研究

亚洲鼻炎丸质量标准研究

罗洪顺李华娣黄志骢李莉

罗洪顺李华娣黄志骢李莉（东莞市亚洲制药有限公司广东东莞516100）

【摘要】建立亚洲鼻炎丸（防风、甘草等）的质量控制方法。方法采用TLC法对防风和甘草进行定性鉴别；采用HPLC去对升麻素苷进行定量分析。色谱柱为AgelatechnologiesC18（4.6×150mm5μm），流动相：以甲醇-水（27:73）；体积流量为1.0ml/min,检测波长为254nm。结果薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰；升麻素苷进样量在0.0424～0.424μg范围内线性关系良好（r=1.0000），平均加样回收率为102.3％，RSD为1.15％。结论所建立的方法能准确可靠地进行定性、定量检测，重复性好，可作为本品的质量控制方法。

【关键词】亚洲鼻炎丸防风甘草升麻素苷TLC；HPLC质量控制

【中图分类号】R927.11【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）03-0124-03

【Abstract】AIMToestablishthequalitycontrolmethodsofYazhouBiyanWan(SaposhnikoviaeRadlx,GlycyrrhizaeRadixEtRhixomaetc.).METHODSTLCwasprformedtidentifySaposhnikoviaeRadlx,GlycyrrhizaeRadixEtRhixomainGukangcapsules.HPLCwasusedtodtrminethecontentsofPrim-O-glucosylcimifugin.ThegradintelutiouwasperformedonaAgelatechnologiesC18column(4.6×150mm5μm);withmethanol-water(27:73).Theflowwas1.0mL/min.thedetectionwavelengthwassetat254nm.RESULTSThespotsonTLCplateswereclearwithoutinterference.Thecalibrationcurvewaslinearwithintherangeof0.0424～0.424μgforPrim-O-glucosylcimifugin,andtheaveragerecoverywas102.3%(RSDwas1.15%).CONCLUSIONThemethodsaresimple,reliable,accurate,reproducible,andsuitableforthequalitycontrolofGukangcapsules.

【Keywords】YazhouBiyanWanSaposhnikoviaeRadlxGlycyrrhizaeRadixEtRhixomaPrim-O-glucosylcimifuginTLCHPLCqualitycontrol

亚洲鼻炎丸是由辛夷、薄荷、紫苏叶、甘草、广藿香、苍耳子、鹅不食草等十五味药组成的中药复方制剂，具有祛风清热，清炎解毒的功效，用于治疗鼻炎（包括过敏性鼻炎，慢性鼻炎等），神经性头痛，感冒流涕，鼻塞不通。在原质量标准中，仅有鹅不食草、防风的显微鉴别，以及鹅不食草、鱼腥草的薄层鉴别。为了更好地控制产品质量，对质量标准进行了提高，新增了防风、甘草的薄层鉴别，新增了升麻素苷含量测定（高效液相色谱法）。

1仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪：Agilent1100系列，包括二极管阵列检测器和化学工作站（美国安捷伦公司）。天平：AG135,AL204(瑞士梅特勒)。超声波发生器：PTS/1002（深圳波达超声工程设备有限公司）。

1.2试药升麻苷（批号1522-200001供含量测定用）、防风对照药材（批号为947-9201）、甘草对照药材（批号为904-9103），均购于中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。硅胶GF254薄层板（自制）；碱性硅胶G板（自制，用1%氢氧化钠溶液制备）。亚洲鼻炎丸：为亚洲制药有限公司生产，批号：201102012011020220110203；缺防风阴性：按亚洲鼻炎丸处方自制缺防风阴性样品。

2薄层色谱鉴别

2.1防风的薄层鉴别取本品10g，研细，加丙酮60ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取防风对照药材2g，同法制成对照药材溶液。取缺防风的阴性样品10g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各10µl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干忧（见图1）。

2.2甘草的薄层鉴别取本品10g，研细，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去滤液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；取甘草对照药材1g，同供试品方法制成对照药材溶液。取缺甘草的阴性样品10g，同供试品方法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各1µl，分别点于同一1%氢氧化钠溶液制备的碱性硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水（15∶1:1:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘至显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干忧（见图2）。

2.3曾以甲苯－乙酸乙酯（19：1）为展开剂，摸索薄荷的薄层鉴别。以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（9:0.5:1:0.5）为展开剂，摸索紫苏叶的薄层鉴别。以正丁醇-冰乙酸-水（4:1:5）为展开剂，摸索仓耳子的薄层鉴别。以环己烷-三氯甲烷-甲醇（24：3：4）为展开剂，摸索山白芷的薄层鉴别。以正丁醇-冰乙酸-水（19:5:5）为展开剂，摸索板蓝根的薄层鉴别。以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰乙酸-水（1：15：1:1:2）为展开剂，摸索菊花的薄层鉴别。结果六者因阴性对照有干忧，未能列入正文。

3升麻苷HPLC法测定

3.1色谱条件

色谱柱（1）AgelatechnologiesC18（4.6×150mm5μm）；（2）KromasilC18（中科院大连化学物理研究所5μm）；（3）AgilentEclipseC18色谱柱（4.6mm×150mm5μm）。流动相：以甲醇-水（27:73）；检测波长为254nm。理论板数按升麻苷峰计算应不低于2500。

3.2对照品溶液的制备

取升麻苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含约20μg的溶液，即得。

3.3供试品溶液的制备

3.3.1提取溶剂的选择

取同一批样品（批号20110201），研细，取约2g，精密称定，置50ml容量瓶中，各加入30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、甲醇适量，振摇，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，分别用30％甲醇、50％甲醇、70％甲醇、甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，测定升麻苷含量，结果见表1。

表1不同提取溶剂测定结果

溶剂升麻苷（mg/g）

30％甲醇0.5301

50％甲醇0.6013

70％甲醇0.6238

甲醇0.7034

结果显示，以甲醇为提取溶剂时所得的升麻苷含量最高，因此选择甲醇为提取溶剂。

3.3.2提取方法的选择

取同一批样品（批号20110201），研细，取约2g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入甲醇适量，振摇，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min或加热回流提取1h，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，测定升麻苷含量，结果见表2。

表2提取方法的选择

提取方法升麻苷（mg/g）

超声提取0.7078

回流提取0.7147

结果显示，超声与回流提取对测定结果影响不大，考虑到考虑到超声提取简单方便，故选择超声提取。

3.3.3超声提取时间的选择

取同一批样品（批号20110201），研细，取约2g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入甲醇适量，振摇，超声处理（功率250W，频率40kHz）15、30、45min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，测定升麻苷含量，结果见表3。

表3不同超声时间测定结果

时间（min）升麻苷（mg/g）

150.6467

300.7048

450.7122

结果显示，超声30分钟、45分钟的提取效果相差不大，考虑到提取效率，选择超声30min。

3.3.4供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约2g，精密称定，置50ml容量瓶中，加入甲醇适量，振摇，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5ml置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

3.4阴性样品溶液的制备

按亚洲鼻炎丸处方、工艺，制取缺防风的阴性样品，照供试品溶液的制备方法，制得阴性样品溶液。

3.5专属性试验

分别取升麻苷对照品溶液、亚洲鼻炎丸样品溶液和缺防风阴性样品溶液，进样，测定，结果见色谱图1-3。结果表明，对照品溶液、供试品溶液及缺防风阴性样品溶液的分离良好，阴性无干扰。

3.6线性关系

取升麻苷对照品（浓度为0.0212mg/ml），分别精密吸取2、5、10、15、20μl注入液相色谱仪中，记录升麻苷峰面积，以进样量为x，峰面积为y，得线性回归方程y＝1521.7x+0.3072，R2=1(n=5)。

表4橙皮苷进样量与峰面积的关系（n=5）

进样量μg0.04240.1060.2120.3180.424

峰面积64.824215161.90647322.350175484.48627645.86249

由上表可知，升麻苷进样量在0.0424～0.424μg之间时与峰面积有良好的线性关系。

3.7中间精密度

取同批亚洲鼻炎丸（20110201批）细粉，3人用同一设备照含量测定项下方法操作，测定大黄素的含量，结果见表5，结果表明该方法中间精密度良好。

表5中间精密度试验结果（n=6）

操作人取样量（g）平均

峰面积含量

（mg/g）平均含量（mg/g）

12.0565214.3659550.70490.7086

2.0468215.637570.7124

22.1662226.270980.71000.7076

2.1754225.665780.7051

32.0065213.5766500.70980.7112

2.0073214.520150.7126

3.8重复性试验

取同批亚洲鼻炎丸（20110201批）2g6份，照含量测定项下方法操作，测定升麻苷的含量，结果见表6，结果表明该方法重复性良好。

表6重复性试验结果（n=6）

样品取样量（g）峰面积含量（mg/g）总平均含量（mg/g）RSD（%）

12.0565214.3659550.70490.70560.82

22.0468215.637570.7124

31.9904206.161110.7004

42.1006220.4173450.7096

51.9875205.006850.6975

62.0312212.9822750.7090

3.9稳定性考察

取同一供试品溶液，分别于0、1、4、8、12小时测定峰面积，计算RSD%为1.36%。结果表明供试品溶液在12小时内稳定。结果见表7。

表7稳定性结果

日期及时间时间间隔（小时）供试品峰面积RSD（%）

(2.27)10:39/AM0272.564451.36

11:02/AM267.62436

11：47/AM1260.4347

12:09/AM266.0404

2:46/PM4263.98914

3:08/PM262.43066

6:29/PM8264.7628

6:52/PM266.9154

10：42/PM12269.64542

11:05/PM268.69180

3.10加样回收率试验

取同一批样品（批号20110201）约1.0g，共6份，精密称定，分别精密加入升麻苷对照品溶液2ml（C=0.368mg/ml），制备供试品溶液，进样测定，计算回收率，结果见表8：

表8升麻苷回收率试验结果（n=6）

样品号称样量/g原有量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%

11.09680.76780.73601.5208102.3102.31.15

21.07240.75070.73601.5153103.9

31.09390.76570.73601.5116101.3

41.11050.77740.73601.5329102.7

51.08590.76010.73601.5173102.9

61.09110.76380.73601.5040100.6

3.11样品的测定

取亚洲鼻炎丸10批，制备供试品溶液，进样测定，每份样品测定2次，取其均值，结果分别见表9。

表9样品中升麻苷含量测定结果

批号升麻苷含量（mg/g）

样品1样品2平均

201102010.70290.70550.7042

201102020.71090.70280.7068

201102030.70410.71230.7082

201102040.68010.68930.6847

201102050.71690.70640.7117

201103010.71490.70400.7094

201103020.71900.72160.7203

201103030.72220.71030.7162

201103040.71940.72230.7208

200905050.72990.72020.7251

4讨论

4.1薄层色谱鉴别在确定薄层色谱鉴别方法时，从样品制备、展开剂组成及比例的选择、点样量、不同品牌薄层板等方面，对几味药材的薄层色谱条件进行了优化，选择了最佳的试验条件。

4.2测定波长的选择参考《中国药典》2010年版一部防风药材升麻苷含量测定检测波长为254nm。故选择波长254nm为升麻苷的检测波长。

4.3流动相的选择参考了《中国药典》2010年版一部防风药材升麻苷含量测定流动相（甲醇-水40：60）。实验过程中发现流动相甲醇-水（27：73），升麻苷对照品峰峰形无改变，对称性好，无拖尾现象，供试品中升麻苷峰能基线分离，保留时间约为18分钟，理论板数按升麻苷计为6847，分离度为13.23，阴性样品无干扰，所以确定此条件为升麻苷的检测条件。

4.4色谱柱的比较比较了3种不同品牌色谱柱，即AgelatechnologiesC18（4.6×150mm5μm）、KromasilC18（中科院大连化学物理研究所5μm）和AgilentEclipseC18色谱柱（4.6mm×150mm5μm），结果供试品溶液在这3种色谱柱上均能得到较好分离，且RSD均小于2％，表明方法对C18柱品牌无特定要求，耐用性好。

参考文献

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