临床检验中培养基对药敏试验的影响

临床检验中培养基对药敏试验的影响

闫淑华

黑龙江省逊克县人民医院（154500）闫淑华

【关键词】培养基细菌药敏试验

随着抗菌药物的逐年增加和细菌耐药性、敏感谱的变化，临床医生越来越重视以药敏试验结果来选择用药，以避免用药不当产生耐药菌株[1]。

细菌对抗生素的敏感性可分3种类型，他的各型定义是：敏感：表示被测细菌引起的感染，除禁忌证外，可用该抗生素常用剂量而达到治疗目的。中介：表示被测细菌可通过提高剂量受到抑制，或在药物被生理性浓集的部位受抑制。由于微小的技术因素失控可以对结果解释错误，所以这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”。抑菌环落入中介范围，其意义不明确，如果没有其他可以替代的药物，应重复或再以稀释法测定最低抑菌浓度。耐药：被测细菌不能被该抗生素的常用剂量在组织内或血液中的浓度达到抑制作用，且不论其剂量大小或细菌所在部位。

细菌药敏试验的准确性受到诸多方面的影响，根据多年来的工作经验，培养基对细菌药敏试验的影响是其中一个重要因素，现将影响药敏试验的因素总结如下。

1试验操作过程中的影响因素

1.1细菌的纯度由于各种菌对药物的敏感性不同，产生的抑菌环大小不同，如果菌种不纯，试验中所产生的抑菌环大小与该菌种在纯培养状态下产生的抑菌环大小存在较大的差异，影响判断结果的准确性。所以必须提纯各种致病菌，分别对其进行不同的药敏试验。临床医生才能综合药敏试验结果选择用药[2]。

1.2菌液浓度进行药敏试验时，必须将提纯的菌种配制成一定浓度的菌液。根据WHO组织制定的标准，要求菌液浓度在1.5亿/ml左右。如果菌液浓度过高，该菌将对所有药物产生耐药；相反，菌液浓度过低，将出现该菌对所有药物均敏感。

1.3菌液在培养基上的分布药敏试验中，必须将菌液均匀地涂在培养基上，使细菌分布均匀，否则可能使试验结果产生较大的偏差。涂菌后一般要求15min才能贴药敏纸片。因为在涂菌后，细菌要有一定的适应过程，但时间不能太长，否则会使细菌产生耐药。贴完后10～20min放入孵育箱。

1.4贴药敏纸片时，每取一种药敏纸片必须烧一下镊子口，避免药敏纸片之间相互混淆，以提高药敏的准确性。药敏纸片要等距离贴在平皿的周围，因为平皿的中央部位培养基的厚度不足4mm。

2培养基对药敏试验的影响

2.1培养基种类进行细菌药敏试验所用的培养基种类较多。在大多数情况下，采用WHO组织统一要求的M—H培养基进行的药敏试验效果较好，因为在这种培养基中含有的低胸腺嘧啶是与磺胺类药物竞争的物质；另外，还有适量的Ca、Mg离子，在培养基中起到触酶的作用。但是，有些细菌对培养基中的成分有特殊的要求。也就是特殊的菌要用特殊的培养基，否则不能进行药敏试验。例如：淋球菌的药敏试验必须用巧克力淋球菌培养基；流感嗜血杆菌的药敏试验必须用巧克力培养基。

2.2培养基的质量细菌药敏试验要求培养基的厚度为4mm左右，如果培养基制作太厚，会使细菌出现耐药；如果厚度小于4mm，本应耐药的易出现敏感。所以，试验时切记不要把药敏纸片放在中央部位上，应均匀排布在平皿周围的培养基上。

3药敏纸片质量的影响

3.1药敏纸片的药量和pH值用未饱和法制作的药敏纸片含药量一般为10µg，饱和法药敏纸片含药量为20µg。药敏纸片的pH值一般要求为中性，这样适合药的活度。

3.2药敏纸片的规格药敏纸片的厚度要求在1mm左右，这样适合药物的扩散速度和细菌的生长。药敏纸片的直径为6.00～6.35mm。如果纸片的厚度过厚或过薄，药敏纸片直径过大或过小将影响药敏试验的结果。

3.3含药纸片保存和片间差含药纸片的质量是做好药敏试验的关键。有的药敏纸片一买来抑菌环就偏大或偏小。纸片之间又存在着很大的片间差。因此，纸片在用前必须检验其片间差和准确度。只有都达到标准要求后方可使用。同时应注意纸片的保存，因有的纸片如青霉素类在保存中因受潮湿的影响易降低其药物活性。因此，纸片应放低温下（—10℃）保存，避免潮湿，以保持抗菌药物的活性。盛纸片小瓶自低温处取出应在室温平衡至少10min后再打开，避免冷凝水影响药效。另外，一个平板最好贴六张纸片，以保持纸片周围浓度梯度相对稳定，避免不同药物相互干扰。

3.4药敏纸片应用标准菌株定期监测是否失效。监测时是根据所形成的抑菌环大小是否发生变化来判定的。

以上所述，是细菌药敏试验中几个比较主要的影响的因素，培养基在试验中是一很重要的影响因素，应正确对待，并给予重视。这样方能为临床提供准确的药敏试验结果。

参考文献

[1]杨文杰，陶家驹，张宾，等．大型综合医院524株细菌的分离鉴定及其耐药性分析[J].中国全科医学，2001，4(10)：781-783.

[2]董亮，吴大玮，孙恩华，等．临床疗效及药敏试验研究[J]．中国全科医学，2004，7(7)：451.