病毒性心肌炎患者血浆microRNA-21表达变化及其临床意义

病毒性心肌炎患者血浆microRNA-21表达变化及其临床意义

梁磊李秀红王毅闫丽酉鹏华

病毒性心肌炎患者血浆microRNA-21表达变化及其临床意义

梁磊李秀红王毅闫丽酉鹏华

（陕西省人民医院陕西西安710068）

[摘要]:目的检测病毒性心肌炎患者（VMC）血浆中microRNA-21（miR-21）的表达水平变化，并初步探讨其临床意义。方法选择45例VMC患者及45例健康体检者，RT-PCR检测血浆中miR-21的表达水平，分析其与肌钙蛋白T（cTnT）水平的相关性。结果VMC患者血浆中miR-21表达水平明显高于正常对照组，差异具有统计学意义（P<0.01）；miR-21表达水平与cTnT水平呈明显正相关（P<0.05）。结论VMC患者血浆中miR-21水平增高，miR-21可能参与了VMC的病理过程。

[关键词]：病毒性心肌炎；微小RNA；肌钙蛋白T

微小RNA（microRNA，miRNA，miR）在炎症、肿瘤、自身免疫性疾病等多种病理过程中，均发挥重要作用[1]。近年有学者研究发现，miR-21在病毒性心肌炎（viralmyocarditis，VMC）动物模型及患者心肌组织中表达异常，提示miR-21可能参与了VMC发病过程[2]。本研究检测了VMC患者血浆中miR-21的表达变化，并初步探讨其临床意义。

1材料与方法

1.1研究对象

选取2014年1月-2015年2月在我院心内科住院确诊的VMC患者45例。排除标准：恶性肿瘤、风湿性心肌炎、中毒性心肌炎、缺血性心脏病、肺纤维化、感染性疾病、自身免疫性疾病、妊娠或哺乳期妇女。45例同期健康体检者作为对照组。两组研究对象在年龄、性别构成的比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1样本采集所有实验对象空腹12h后采静脉血，室温下离心后收集上清至无RNA酶的EP管中，-80℃保存。

1.2.2.RT-PCR检测血浆中miR-21水平采用miRNA分离试剂盒取血浆总RNA，根据文献[1]的步骤合成miR-21及内参照及PCR引物，根据miScriptReverseTranscription试剂盒说明书进行逆转录反应。基因表达水平采用2-△△Ct进行分析，ΔΔCt=实验组ΔCt(目的基因Ct-内参基因Ct)-对照组ΔCt(目的基因Ct-内参基因Ct)。

1.2.3血清中肌钙蛋白T（cTnT）水平的检测所有实验对象采集血标本，常规检测cTnT水平。

1.3.统计学方法所有数据采用SPSS16.0软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，两样本均数比较采用t检验，相关性分析采用Pearson相关法。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1miR-21水平的比较

RT-PCR检测结果发现，VMC患者血浆中miR-21表达水平为（1.87±0.63），明显高于正常对照组的（0.82±0.31），差异有统计学意义（t=10.031，P<0.01）。

2.2miR-21水平与cTnT水平的关系

统计分析结果显示，VMC患者血浆中miR-21表达水平与cTnT水平呈明显正相关（r=0.647，P<0.05）。

3讨论

自从miRNA-lin-4首次于1993年在线虫中被发现，目前在多种生物体内鉴别出大量的miRNAs，miRNA在生理病理过程均发挥重要的调控作用。人miR-21基因定位于17q23.2，与蛋白编码基因VMP1、编码RNAU6基因及人类乳头状瘤病毒16的整合位点的位置重叠。研究表明，miR-21在多种实体瘤及血液系统肿瘤中呈高表达，还参与了肺纤维化、系统性红斑狼疮等病理过程[1,2]。

miR-21在心肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞及血管平滑肌细胞中均有表达。但有关miR-21与VMC的研究刚刚起步。Liu等[2]利用miRNA芯片技术检测发现，CVB3诱导的小鼠心肌炎模型心脏组织中miR-21表达上调，下调miR-21的表达可以减轻心肌炎。但国内学者在人的心肌炎右心室室间隔组织中检测miR-21的表达水平没有变化[3]，在CVB3诱导的小鼠心肌炎模型心肌组织中miR-21的表达水平甚至下调[3]。这可能与实验所选择的动物模型、检测方法、检测时间及采样部位不同等因素有关。由于miRNA长度较短且具有较强的抵抗RNA酶降解的作用，miRNA可以与蛋白质结合在血液中稳定存在，血液中的miRNA可以作为疾病的早期诊断、判断预后的指标[4]。为了进一步研究miR-21在VMC中的作用，我们采用RT-PCR方法检测了VMC患者血浆中miR-21表达水平，结果发现VMC患者血浆中miR-21表达水平明显高于正常对照组（P<0.01），统计分析发现VMC患者血浆中miR-21表达水平与cTnT水平呈明显正相关（P<0.05）。上述结果与国外他人研究结果相一致[2]。

综合国内外研究及我们的实验结果，VMC患者无论是心肌组织中还是外周血中miR-21表达水平增高，且与cTnT水平呈明显正相关，提示miR-21可能参与了VMC的发生发展过程。但miR-21在VMC中的具体作用机制尚需进一步研究。随着miR-21与VMC的研究不断深入，miR-21有望成为VMC早期诊断、判断预后及作为VMC治疗的靶标。

参考文献

[1]黄丽颖,肖宗慧,姚海兰,等.小鼠外周血心肌特异性microRNAs的变化与病毒性心肌炎相关关系初探[J].现代生物医学进展,2012,12(20):3831-3834.

[2]LiuYL,WuW,XueY,etal.MicroRNA-21and-146bareinvolvedinthepathogenesisofmurineviralmyocarditisbyregulatingTH-17differentiation[J].ArchVirol,2013,158(9):1953-1963.

[3]何进,董春升,岳艳,等.CVB3诱导病毒性心肌炎小鼠模型中相关miRNA表达谱分析[J].现代免疫学,2013,33(1):12-17.

[4]SayedAS,XiaK,SalmaU,etal.Diagnosis,prognosisandtherapeuticroleofcirculatingmiRNAsincardiovasculardiseases[J].HeartLungCirc,2014,23(6):503-510.