野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用

野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用

呙敏谭殷

邵阳市中医医院湖南邵阳422000

摘要：目的：探讨野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制效果。方法：本研究采用CCK－8法及Annexin－V/PI双染色法分别测定对照组中野菊花总黄酮和研究组中野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制效果，并对两组的抑制作用进行分析比较。结果：野菊花总黄酮联合顺铂组细胞抑制率为（43.49±2.82）%，凋亡率为（51.93±1.92）%，野菊花总黄酮组细胞抑制率为（25.91±2.48）%，凋亡率为（36.36±1.85）%，结果表明，研究组细胞抑制率及凋亡率均显著高于对照组，差异比较具有统计学意义（P<0.05）。结论：野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制效果显著，并能促进其凋亡，值得进一步研究，在临床上推广及应用。

关键词：野菊花；野菊花总黄酮；顺铂；人骨肉瘤；MG-63细胞；抑制作用

骨肉瘤是临床上常见的恶性骨肿瘤，发病人群主要集中在青少年，发展于间质细胞系，肿瘤通过软骨期形成肿瘤骨样组织，造成肿瘤生长迅速[1]。临床上一般应用西药治疗，但是用药过多会出现耐药性，降低疗效。西药结合中药是一种新模式，用一种无毒的具有增敏作用中药成分与化疗药物结合使用，在保证化疗药物杀灭肿瘤细胞效果的同时降低化疗药物的使用剂量，进一步降低化疗药物所带来的不良反应。近几年来，部分学者针对如何抑制人骨肉瘤MG-63细胞做了大量的研究探索，发现比较有效的成分有野菊花总黄酮，能够显著地抑制人骨肉瘤这种恶性肿瘤[2]。本研究，探讨了野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制效果，现总结报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

人骨肉瘤MG-63细胞来自中国医学科学院基础医学研究所，DMSO溶解野菊花总黄酮（本实验室库存）后制成400mg/mL母液[3]，顺铂注射液选自江苏豪森药业，血清选自PAA公司，CCK－8细胞增殖检测试剂盒购自日本同仁化学研究所，细胞凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术公司，研究组和对照组各配制30组实验测定液。

1.2实验方法

1.2.1CCK－8法测定细胞生长抑制率

将处于对数生长期的MG－63细胞接种于96孔细胞培养板上，密度为4×103个/孔，每孔体积100ul。细胞培养1天后，每孔加20ulCCK－8试剂，避光反应2h，采用酶联免疫检测仪测定每个孔的吸光度，波长为490nm，重复3次实验结果取平均值。

1.2.2Annexin－V/PI双染色法测定细胞凋亡

细胞种板同细胞生长抑制率测定相同，加药物培养1天，胰酶消化终止培养，PBS洗3次，避光，每孔加入5ulPI染液，在室温下反应半个小时，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率，重复3次实验结果取平均值。

1．3统计学处理

数据均通过SPSS19.0软件处理，计量资料用t检验，计数资料用卡方检验，当P<0.05时表示数据间比较差异具有统计学意义。

2结果

2．1两组细胞抑制效果的比较

野菊花总黄酮联合顺铂组细胞抑制率为（43.49±2.82）%，凋亡率为（51.93±1.92）%；野菊花总黄酮组细胞抑制率为（25.91±2.48）%，凋亡率为（36.36±1.85）%，研究组细胞抑制率及凋亡率均显著高于对照组，差异比较具有统计学意义。具体数据见表1。

3讨论

人骨肉瘤是导致青少年恶性肿瘤死亡率居高不下的主要原因[4]，人骨肉瘤患者5年生存率只有50%多，由于其局部湿润严重，早期容易转移，一旦转移后生存率降到20%多。目前除了手术之外最常用的治疗方式是术后化疗，不过目前的一些化疗方案，往往会带来很多严重的不良反应，如过敏反应、骨髓抑制、损伤肝肾等，虽然化疗能够使肿瘤细胞生长得到控制，但是上述这些副反应会加重患者身体与心理上的痛苦，使生活质量大大降低，甚至被迫终止治疗，寻找高效安全的治疗药物显得尤为重要。

顺铂属于抗肿瘤药物，在肿瘤细胞的M期发挥作用，是一种细胞周期的特异性药物[5]。临床上主要治疗肺癌、骨肉瘤等恶性肿瘤，疗效显著。其作用机制主要是结合肿瘤细胞的DNA碱基，抑制DNA的复制，抗肿瘤作用较广，但常会引起骨髓抑制等一系列不良反应。野菊花性微寒，具有消肿解毒，疏散风热的功效，临床常用于治疗咽喉肿痛、疔疮痈肿、风火赤眼等疾病，其主要化学成分是黄酮类化合物。黄酮类为野菊花的主要药效成分，含量达70%以上，主要有芹菜素、槲皮素、木犀草素、金合欢素、刺槐素苷及木犀黄酮苷等[6-7]，野菊花总黄酮可抗氧化、抗炎、调节免疫、降压降脂，抗肿瘤作用独特，相比化学药物价格便宜，毒副作用小，方便取材。不少研究报道结果指出，部分抗肿瘤药物主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡，包括促、抗凋亡基因。其中p21为促凋亡基因，能够诱导细胞S、M期阻滞，进一步诱导肿瘤细胞凋亡。而bcl-2相反则是常见的抗凋亡基因[8]，可以稳定线粒体外膜，对释放线粒体细胞色素C发挥抑制作用，进而抗肿瘤细胞凋亡。从我们的研究结果来看，野菊花总黄酮联合顺铂组细胞抑制率为（43.49±2.82）%，凋亡率为（51.93±1.92）%，野菊花总黄酮组细胞抑制率为（25.91±2.48）%，凋亡率为（36.36±1.85）%，研究组细胞抑制率及凋亡率均显著高于对照组，差异比较具有统计学意义。发现在顺铂中加入野菊花总黄酮，相比于单用顺铂而言，有利于上调p21基因，下调bcl-2基因，细胞抑制效果更佳，说明野菊花总黄酮可以增强MG－63细胞对顺铂的敏感性，二者联合用药可以发挥协同效果。无论是抑制肿瘤细胞增殖还是诱导肿瘤细胞凋亡，其作用均明显优于单药效果，两者之间协同效应的产生可能与两者相互增强彼此杀伤肿瘤细胞的能力或两者相互降低肿瘤细胞对彼此抵抗能力相关。

由此可知，顺铂联合野菊花总黄酮细胞抑制率及凋亡率均明显优于单用顺铂，值得临床进一步研究探讨。

参考文献：

[1]魏强强，殷明，邬亚华，等.3种植物总黄酮对人成骨肉瘤Saos-2细胞系作用的研究[J].中成药，2013，35（7）：1363-1367.

[2]陈晓宇，李俊，姜辉，等.野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及caspase-3表达的影响[J].解剖学报，2009，39（6）：906-909.

[3]VBabuB，KKonduruN，NakanishiW，etal.Experimentalandtheoreticaladvancesinfunctionalunderstandingofflavonoidsasanti-tumoragents[J].AntiCancerAgentsMedChem，2013，13（2）：307-332.

[4]ShenKH，HungSH，YinLT，etal.Acacetin，aflavonoid，inhibitstheinvasionandmigrationofhumanprostatecancerDU145cellsviainactivationofthep38MAPKsignalingpathway[J].MolCellBiochem，2010，333（1/2）：279-291.

[5]MartinouJC，YouleRJ.Mitochondriainapoptosis：Bcl-2familymembersandmitochondrialdynamics[J].DevCell，2011，21（1）：92-101.

[6]尹军强，谢显彪，贾强，等.槲皮素对人骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300增殖和凋亡的影响及其机制研究[J].中国中药杂志，2012，37（5）：611-614.

[7]张伟然，张斌，刘博文，等.芹菜素诱导乳腺癌MDAMB-231细胞系非P53依赖性凋亡的研究[J].中国肿瘤临床，2013，40（3）：134-139.

[8]LiX，WangJ，etal.Oridoninup-regulatesexpressionofP21andinducesautophagyandapoptosisinhumanprostatecancercells[J].IntJBiolSci，2012，8（6）：901-912.