耐甲氧西林金黄色葡萄球菌同源性分析及耐药性研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌同源性分析及耐药性研究

李娅1李祎1王忠平1戴路明2

李娅1李祎1（通讯作者）王忠平1戴路明2(1云南省昆明市延安医院呼吸二科云南昆明650011)(2云南省昆明医学院第一附属医院云南昆明650011)

【摘要】目的为了解MRSA的院内感染流行及耐药情况，我们分析了住院病人临床标本分离到的32株MRSA进行同源性分析及耐药性研究。方法收集昆明市延安医院2006年8月-2007年2月32株MRSA，采用Kerby-Bauer纸片扩散法测定32株MRSA对16种抗菌药物的敏感性，采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析其同源性。结果32株MRSA对万古霉素耐药率为0，对复方新诺明的耐药率为39%，对其他抗菌药物耐药率在80-100%之间。经同源性分析32株细菌图谱完全不相关。有2株同源性很高证实为同一病人不同时间所采集的不同标本。此次所采集MRSA菌株无同源性，未引起MRSA院内暴发流行。我院2006年MRSA检出率为30.1%，但调查期间32株MRSA检出率为50.8%，显著高于全年平均水平。提示我院此期间抗生素选择压力大。结论我院调查期间检出的MRSA均为多重耐药菌，集中发生于ICU等重症感染患者较多的科室，其对万古霉素的敏感率为100%，万古霉素可作为MRSA感染的首选。调查期间MRSA检出率较高，提示这些单元抗生素选择压力大，临床必须严格规范合理使用抗生素，并严格监测院内感染，避免交叉传播。

【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳细菌耐药

细菌耐药目前已成为全球关注的热点，耐药细菌所致的感染性疾病已构成对新世纪抗感染治疗的新挑战。及时准确掌握细菌耐药机制，对指导临床合理用药和新的抗生素的研制具有重要意义。我们分析了延安医院2006年8月-2007年2月住院病人临床标本分离到的32株MRSA菌株进行同源性分析及耐药性研究。现报道如下：

1材料与方法

1.1材料

1.1.1菌株来源收集2006年8月～2007年2月本院28位住院病人临床标本分离到的32株MRSA菌株，同一患者连续两次的标本采集时间最短的间隔32天、最长的间隔73天。32株MRSA来自口痰标本28株，分泌物、血液各1株，咽拭子2株。

1.1.2质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923。

1.1.3主要试剂药敏纸片:青霉素G、苯唑西林、氨卞西林、头孢呋辛、头孢西丁、克林霉素、阿莫西林/克拉维酸钾、庆大霉素、红霉素、复方新诺明、左氧氟沙星、环丙沙星、氯霉素、利福平、四环素为英国OXIOD公司产品，万古霉素购自美国BD公司。培养基：MH培养基购于法国生物梅里埃公司。

1.2方法

1.2.1药敏试验所有菌株均经抗菌药物筛选试验和mecA基因检测鉴定为MRSA菌株。

1.2.2药敏方法采用Kerby-Bauer纸片扩散法:测定所有菌株对青霉素G、苯唑西林、氨卞西林、头孢呋辛、头孢西丁、克林霉素、阿莫西林/克拉维酸钾、庆大霉素、红霉素、复方新诺明、左氧氟沙星、环丙沙星、氯霉素、利福平、四环素、万古霉素的耐药性。在MH平板上涂布0.5麦氏单位的待检细菌后，用药敏纸片专用加样器将药敏纸片均匀分散放置在平板上，35℃培养18h-24h。精确量取抑菌圈直径，结果参照NCCLS规定的标准。统计学处理：所有数据用WHO推荐的WHONET5.3.SPSS10.0统计软件进行分析。两组间比较采用t检验作统计学处理。

1.2.3脉冲场凝胶电泳分析(pulse-fieldgelelectrophoresis,PFGE)。

2结果

我们对32株MRSA进行同源性分析，32株细菌图谱完全不相关。两株电泳泳道条带完全一致，为同一菌株，取自同一病人相隔73天分离的不同标本，其余30株均为不同菌株。有2株同源性很高证实为同一病人不同时间所采集的不同标本。如将由单一菌株在3个月内同一病区引起≥3例MRSA医院感染定义为暴发(outbreak)[1],在3个月内同一病区引起2例MRSA医院感染定义为聚集性病例(cluster),在3个月内同一病区引起1例MRSA医院感染定义为散发病例(single)。此次研究未发现MRSA院内暴发流行。我院2006年MRSA检出率占革兰阳性细菌百分比为30.1%，但调查期间32株MRSA检出率占同期革兰阳性细菌百分比为50.8%，显著高于全年平均水平，增高比例具有统计学意义（P<0.05）。

本研究中32株MRSA对青霉素、苯唑西林、阿莫西林／克拉维酸、氨苄西林、头孢西丁、环丙沙星、氯霉素、红霉素、庆大霉素、克林霉素、左氧氟沙星等15种抗生素产生耐药性，耐药模式与相关的报道相似[2]。对万古霉素100%敏感，对复方新诺明和四环素部分敏感（耐药率分别为39%和68%）。

3讨论

我院的MRSA对万古霉素耐药率为0，对复方新诺明的耐药率为39%，对其他临床常见抗菌药物耐药率在80-100%之间。MRSA所致医院感染已成为临床抗感染化疗的难题。

此次MRSA感染经PFGE同源性分析细菌图谱完全不相关，尽管短时间内（6个月）发生频率高，但未造成MRSA院内暴发流行。

我院调查期间检出的MRSA均为多重耐药菌，集中发生于ICU等重症感染患者较多的科室，其对万古霉素的敏感率为100%，未发现对万古霉素敏感性下降的菌株，万古霉素可作为MRSA感染的首选。其他药物可根据药敏结果选择。耐药情况同其他报道大致相似，略有差异为地域性差别及地区所选用抗生素压力不同所致。

调查期间MRSA检出率较高，提示我院抗生素选择压力大，临床必须严格规范合理使用抗生素，并严格监测院内感染，避免交叉传播。

参考文献

[1]GastmeierP,SohrD,GeffersC,etal.Occurrenceofmeti-cillin-resistantStaphylococcusaureusinfectionsinGermanintensivecareunits[J].Infection,2002,30(4):198-202.

[2]孙静娜，张征，武艳，张卫国，高志成，王国新.我院45株金黄色葡萄球菌临床分布及消毒剂耐药基因qacA的检测[J].山东医药，2009年2期.