金花茶多糖对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化小鼠的影响

金花茶多糖对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化小鼠的影响

李磊翟锦霞阿迪亚尔卢少义魏剑莹陈琳

（长沙医学院基础医学院湖南长沙市410000）

摘要：目的研究金花茶多糖对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化小鼠的影响。方法正常对照组（10只，生理盐水），将肝纤维化小鼠分为模型组对照组（10只，生理盐水），秋水仙碱阳性对照组（10只，0.12mg/kg），金花茶多糖高剂量组（10只，300mg/kg），金花茶多糖中剂量组（10只，200mg/kg），金花茶多糖低剂量组（10只，100mg/kg），喂养30天，分别测定小鼠的AST，ALT，MDA，SOD水平的变化，结果高、中剂量组金花茶多糖可以不同程度降低肝纤维化小鼠的血清AST，ALT，MDA水平，提高肝纤维化小鼠血清SOD活性水平。结论金花茶多糖对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化小鼠具有保护作用，其保肝机制可能与其抗氧化应激密切相关。

肝纤维化的发生发展是多种慢性肝病如非酒精性脂肪肝、慢性肝炎、酒精性肝病和自身免疫性肝病等发展到肝硬化的一个共同病理过程。有研究已初步显示金花茶多糖具有保肝功效，但尚未深入研究，为了深入研究其多糖成分在保肝、护肝方面的药效，本实验采用二甲基亚硝胺诱导小鼠肝纤维化模型，观察金花茶多糖对肝纤维化小鼠相关生化指标和病理变化的影响，探讨其可能的作用机制，为金花茶多糖在制备抗肝纤维化药物的应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1动物和材料

（1）实验动物健康雌雄各半小鼠60只，体重为20~40g。

（2）药物与试剂二甲基亚硝胺（DMN），谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒

1.2实验方法

（1）金花茶多糖制备：从干燥的金花茶叶粗粉中提取药物金花茶多糖。

（2）模型的建立、小鼠分组及给药：将60只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱（0.12mg/kg）阳性对照组、金花茶多糖高剂量组（300mg/kg）、中剂量组（200mg/kg）、低剂量（100mg/kg）6组，每组10只，除正常对照组腹腔注射相应体积生理盐水外，其余组均按1.5ml/kg腹腔注射0.5％DMN溶液，隔天1次，以此建立肝纤维化小鼠模型。建模后，秋水仙碱阳性组和金花茶多糖各剂量组均按相应剂量给药，1天1次，共30天。实验期间观察并记录小鼠的活动、体质量、外观及毛发变化情况，末次给药后，禁食不禁水16h，随后眼球取血，收集血清及肝脏，观察指标。

（3）相关指标及测定方法采用生化法检测各组小鼠血清ALT、AST、MDA、SOD水平，并通过HE染色进行肝组织病理学检查。

1.3统计学分析

用SPSS22.0对数据库分析，计量资料用（）描述，组间比较用独立样本F检验。计数资料用N（%）描述，比较用卡方检验。

2结果

2.1六组小鼠血清中AST、ALT、MDA、SOD含量的比较

六组小鼠血清中AST、ALT、MDA、SOD含量的比较，与正常对照组相比，模型对照组血清中ALT、AST明显增高，与模型对照组相比，秋水仙碱组与金花茶多糖（300mg/kg，200mg/kg）血清中AST、ALT含量呈现不同程度的降低。对血清中MDA、SOD含量的影响，与正常对照组相比，模型对照组血清中SOD活性水平显著降低，MDA含量显著升高，与模型对照组相比，秋水仙碱组与金花茶多糖剂量组（300mg/kg，200mg/kg）血清中SOD活性水平升高，MDA含量降低。

表1六组小鼠血清中AST、ALT、MDA、SOD含量的比较（）

注：与模型对照组相比，*P<0.05，#P<0.01

2.2对肝组织病理形态学的影响

镜下观察正常对照组小鼠肝脏肝小叶结构清晰，结构完整，肝细胞以中央静脉为中心呈现放射状排列，大小均匀，无坏死、变性等病理变化，未见炎症细胞浸润。二甲基亚硝胺模型组小鼠肝脏肝小叶结构被严重破坏，肝细胞严重坏死，可见炎细胞浸润。金花茶多糖剂量组（300mg/kg，200mg/kg）小鼠肝脏肝小叶结构较完整，肝细胞坏死程度明显减轻，炎症细胞明显减少，肝组织炎症得到显著改善，而金花茶多糖100mg/kg剂量组小鼠肝脏病变情况无明显改善。

3讨论

二甲基亚硝胺主要通过其自由基代谢物引起的氧化应激反应来破坏肝细胞膜，使细胞膜通透性增高，从而引起肝损伤[1]。ALT、AST主要分布于细胞质中，细胞膜通透性增高会使ALT、AST溢出，从而导致血浆ALT、AST升高[2]，因此，血浆ALT、AST升高可以被认为是判断急性肝损伤严重程度的重要指标。本实验中，经二甲基亚硝胺处理后，模型组与正常对照组相比，小鼠血清ALT和AST显著升高，病理切片显示肝组织严重受损，肝细胞普遍肿胀，变性，坏死或细胞核固缩溶解，大量炎细胞浸润，表明本研究急性肝损伤模型建立成功。本实验结果显示，金花茶多糖组小鼠血清中的ALT与AST含量低于模型组，且显微镜显示，金花茶多糖组小鼠肝细胞坏死程度较模型组有显著改善，提示金花茶多糖能够有效改善急性肝损伤小鼠的肝功能。

二甲基亚硝胺作用机体后，可产生参与脂质过氧化反应的自由基，并最终形成脂质过氧化反应的终产物MDA，其可严重破坏细胞膜结构致细胞肿胀、坏死[3]。正常情况下机体的抗氧化防御系统可以发挥清除自由基，抑制自由基产生，修复损伤及诱导抗氧化酶如SOD等分泌的功能[4-5]。当化学药物致肝损伤后，除引起SOD抗氧化物质活力下降外，也引起了组织MDA含量增加[6]。金花茶多糖能改善肝损伤小鼠所引起的MDA增多，SOD活性降低，其保肝机制可能与抗氧化应激密切相关。

参考文献

[1]张可锋，黄思茂，陈毅飞，韦日明.七味净肝灵对二甲基亚硝胺诱导肝纤维化大鼠的保护作用及其作用机制[J].中药材，2018，41（2）：451-454.

[2]李伟伟，高海丽，宋新文，申保生.吡咯烷二硫代氨基甲酸酯在二甲基亚硝胺诱导肝纤维化大鼠中的作用及机制[J].中华实用诊断与治疗杂志，2018，32（1）：5-9.

[3]高雅，韦日明，黄思茂，曹后康，张可锋.基于TGF-β_1/Notch信号通路研究杠板归对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的作用机制[J].中国医院药学杂志，2017，37（23）：2318-2321.

[4]黄思茂，曹后康，高雅，蒋志敏，张可锋.金花茶多糖对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制的研究[J].中药药理与临床，2016，32（6）：117-120.

[5]张萍.金花茶的花提取物降血脂作用研究[D].大连理工大学，2015.

[6]邹登峰，张可锋，谢爱泽.金花茶多糖抗小鼠免疫性肝损伤作用的研究[J].华西药学杂志，2014，29（5）：525-527.

作者简介：李磊（1996年9月-），男，湖南衡阳，本科，长沙医学院在校生

通讯作者：陈琳（1984年3月-），女，湖南长沙，硕士，讲师，研究方向肿瘤生物化学。项目基金：长沙医学院大学生研究性学习和创新性试验计划项目-长医教[2018]77号-206。