非小细胞肺癌中EML4-ALK融合基因的研究现状

非小细胞肺癌中EML4-ALK融合基因的研究现状

魏琼英

魏琼英福建医科大学附属协和医院呼吸内科

【摘要】肺癌已是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤[1]。其中NSCLC约占85%。针对其异常基因的靶向治疗是目前研究热点。2007年发现的EML4-ALK融合基因，是肺癌特异性较高的分子标记物，已开始引领新的临床靶向治疗。本文就非小细胞肺癌中EML4-ALK融合基因的研究现状进行综述。

【关键词】非小细胞肺癌；EML4-ALK融合基因；靶向治疗【中图分类号】R817.5【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-04-372-01

一、EML4-ALK融合基因的发现及结构特征2007年Soda等[2]从一名男性吸烟肺腺癌患者手术切除的标本中扩增出一个DNA片段，该基因可以编码一个蛋白质，由于该蛋白的氨基酸组成特点，推测这一基因是由EML4基因和ALK基因融合而成。进一步研究证实，这基因是由分别位于人类2号染色体的p21基因片段EML4和p23基因片段ALK倒位融合重排而成，导致异常酪氨酸激酶表达。2008年Soda建立了肺泡上皮细胞特异性表达EML4-ALK融合蛋白的转基因小鼠模型[3]，证实了EML4-ALK融合基因在肺腺癌的发生中起到关键作用。EML4属于棘皮动物微管相关蛋白样蛋白质家族成员[4]，ALK为跨膜受体，均与细胞增殖、存活、迁移密切相关，其异常可导致肿瘤形成[5]。目前已发现20多种EML4-ALK融合基因的变异体[6]。Soda等[4]的体外转化实验表明，不同的变异体均具有恶性转化和致瘤能力，不同变异体其酪氨酸激酶活性程度有明显差异，猜测可能对临床用药剂量具有一定的指导价值，但还有待进一步的研究。

二、EML4-ALK融合基因的检测方法FISH被认为是“金标准”，采用探针特异性标记细胞核中ALK断裂点来检测重排的ALK，分离的荧光信号提示存在ALK重排[7]。其优点是敏感性和特异性均相对较高。但标本固定时间长、烤片温度过高等因素会影响信号的强弱。而且该法不能区分变异体，且价格昂贵等，都限制了其临床应用。RT-PCR是最早用于该基因检测的方法，具有快速、敏感性高的特点，可以发现新亚型。但此种方法需要高纯度的mRNA，限制了临床应用。而且该技术对实验室要求高，所以也难以普及其使用。IHC是最常用的检测方法。通过检测肿瘤特异性抗原的表达，从而确定有无融合基因存在，做到快速筛选。但其不能分辨出具体的亚型，而且由于肿瘤组织中ALK蛋白的表达微弱和局限，其检测的敏感性相对较低。当其对检测阳性不能确定时，需用FISH等技术来验证。RACE-偶联PCR方法敏感度高，可检测EML4与ALK的融合、明确变异体，还能发现新的融合基因[8]。采用显色原位杂交法[7]敏感性高、稳定性好。后两种方法因其独特的优点，但能否广泛用于临床诊断还需进一步研究明确其与现有诊断方法的一致性。

三、EML4-ALK融合基因阳性NSCLC患者的临床生物学特征Wong等[9]研究发现了EML4-ALK融合基因更常见于不吸烟、年轻和EGFR、K-ras野生型的肺癌患者中。2009年Shaw等[10]进行了针对性的研究，结果显示较年轻、不吸烟或少量吸烟患者阳性率较高，而且在EGFR和K-ras均为野生型且非吸烟患者中，阳性率更高。张楚等[11]研究结果提示EML4-ALK融合基因阳性多见于不吸烟的年轻女性腺癌患者，多为伴有黏液产生的腺泡样结构，不同时合并EGFR和K-Ras突变。孟丽娟等[12]研究结果提示在不吸烟或少吸烟的肺腺癌患者中，经EGFR基因状态筛选可提高EML4-ALK融合基因检测阳性率。多项临床研究已经证实：EML4-ALK融合基因典型的临床特征为：男性、既往不吸烟或少吸烟史、年轻、腺癌或以腺癌细胞为主的病理类型、通常与EGFR突变和K-ras突变不共存。

四、针对EML4-ALK融合基因的临床靶向治疗Soda等[13]在裸鼠肿瘤模型实验中发现，小分子ALK抑制剂能够显著抑制小鼠肿瘤结节的生长。随后针对ALK融合基因抑制剂的研究被陆续报道，典型代表是克唑替尼。克唑替尼是全球第一个小分子ALK和c-Met双靶点口服抑制剂。它通过选择性竞争ATP，抑制ALK激酶区异常激活，阻断下游信号通路，达到抑制肿瘤细胞生长存活的目的。推荐剂量为250mg（po，Bid）。

克唑替尼的I期[14]/II期[15]临床试验结果均证实了该药抗癌效果满意，安全性好。因此，美国FDA批准其直接进入III期临床试验，并且在缺乏III期临床研究结果的情况下，于2011年8月批准其用于治疗ALK阳性的局部晚期或转移性NSCLC。Profile-1007是克唑替尼的首个III期临床试验[16]，比较了克唑替尼与培美曲塞或多西他赛二线化疗方案的疗效和安全性，结果表明，克唑替尼较化疗组患者的PFS、ORR高，安全性良好。鉴于上述研究结果，2012年欧洲内科肿瘤学会和2014年NCCN指南均推荐，克唑替尼用于包括一线治疗在内的ALK阳性晚期NSCLC患者的治疗。我国2013版“晚期非小细胞肺癌分子靶向治疗专家共识”指出，对于ALK融合基因阳性的晚期NSCLC患者，推荐使用克唑替尼治疗。

五、小结及展望EML4-ALK融合基因现已成为晚期NSCLC临床治疗的新靶点。

其中腺癌、少吸烟或不吸烟、年轻、男性、EGFR与K-ras野生型的患者阳性检出率较高。推荐按照K-ras，EGFR，EML4-ALK的顺序，依次核实患者基因突变情况来指导临床用药。ALK抑制剂的出现及应用，给该基因阳性患者带来了希望。但其耐药性是该靶向治疗的新难题。继续进行更加深入的实验和临床研究来解决耐药等问题，才能进一步提高患者靶向治疗的疗效。

参考文献：[1]钱桂生.为提高我国呼吸系统疾病的诊治水平而努力[J/CD].中华肺部疾病杂志：电子版，2012，5（1）：1-3.[2]张楚，王琳，等.13例EML4-ALK融合基因阳性非小细胞肺癌的临床病理分析[J].临床肿瘤性杂志.2013，18（5）：438-441.[3]孟丽娟，王峻，等.经选择的肺腺癌患者中EML4-ALK融合基因发生率的研究[J].实用老年医学.2013，27（10）：819-822.