前列腺癌组织中基膜聚糖的表达及其相关性研究

前列腺癌组织中基膜聚糖的表达及其相关性研究

梁博何俊杨平刘军曾阳关奉友刚刘泓键

（遂宁市中心医院泌尿外科四川遂宁629000）

【摘要】目的：探讨基膜聚糖（Lumican）在前列腺癌组织中的表达情况与临床意义。方法：收集2007年6月至2013年6月44例前列腺癌组织和15例前列腺增生患者的正常前列腺组织标本，采用免疫组化染色方法检测Lumican在前列腺癌组织及正常前列腺组织中的表达情况，分析其在前列腺癌组织中的表达情况与临床病理学特征的关系。结果：Lumican在前列腺癌组织中表达的阳性率分别正常前列腺组织与为40.0%（6/15）和75.0%（33/44）；在低分化前列腺癌组织中表达的阳性率高于高分化前列腺癌组织，差异均有统计学意义（P<0.05）；Lumican在Ⅰ期+Ⅱ期和Ⅲ期+Ⅳ期前列腺癌组织中表达的阳性率分别为42.1%（8/19）和76.0%（19/25）；在有远处转移和无远处转移前列腺癌组织中表达的阳性率分别为85.7%（12/14）和53.3%（16/30），差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：Lumican在前列腺癌中的表达与Gleason评分、临床分期及是否存在远处转移密切相关，其可能是前列腺癌发生和发展中的重要参与者。

【关键词】基膜聚糖；前列腺癌；免疫组织化学

【中图分类号】R730【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）28-0151-03

TheexpressionofLumicanandtherelationshipinprostatecancer

LiangBo,HEJun,YangPing,LiuJun,ZengYangguan,FengYougang,LiuHongjian,JiangMingdong.

DepartmentofUrology,SuiningCentralHospital,Suining,Sichuan629000,P.R.China

【Abstract】ObjectiveToexaminetheexpressionofLumicaninnormalprostatetissueandprostatecancer,andexploretherelationshipbetweenLumicanexpressionandprostatecancer.MethodsImmunohistochemicalstainingwasperformedonparaffinembeddedsectionstodetecttheexpressionofLumicanin44casesprostatecancerand15normalprostatetissue,betweenJune2007andJune2013.SimilarimmunohistochemicalstainingaboutLumicanwasperformed.TheexpressionofLumicanindifferenttissueanditsrelationshipwiththeclinicpathologicalwerefurtheranalyzed.ResultsThepositiverateofLumicaninprostatecancergroup(75.0%,33/44)washigherthanthatinnormalprostatetissuegroup(40.0%,6/15)(P<0.05).ThepositiverateofLumicaninpoorly-differentiatedprostaticcancerwashigherthanthatinhigh-differentiatedprostaticcarcinoma(P<0.05).ThepositiverateofLumicaninthestageⅢtoⅣprostaticcarcinomawas76.0%(19/25),whichwashigherthanthatinⅠtoⅡ42.1%(8/19)(P<0.05).ThepositiverateofLumicaninprostaticcarcinomawithfree-distantmetastasiswas85.7%(12/14),whichwashigherthanthatwithfree-distantmetastasis53.3%(16/30)(P<0.05).ConclusionTheexpressionsofLumicanhadhighcorrelatedwithGleasonscore,stageanddistantmetastasis.Lumicanplayanimportantroleintheoccurrenceanddevelopmentofprostatecancer,andcouldbeanimportanttherapeutictargetinthetreatmentofprostatecancer.

【Keywords】Lumican;Prostatecancer;Immunohistochemistry

蛋白聚糖（PGs）在肿瘤环境中发生异常表达，并与肿瘤的增值、凋亡、侵袭、迁徙有密切的关系[1]。此外，蛋白聚糖还具有促进血管形成、诱导轴突生长以及参与信号传递等多种生物学作用。目前lumican在肿瘤的发生与发展机制中的表达及作用机理已经成为研究的新热点，研究发现其在多种肿瘤中存在着异常表达的的现象，然而在前列腺癌组织中lumican的表达及与预后的关系尚无报道，需进一步研究阐明。Lumican是富含亮氨酸蛋白聚糖家族之一，与肿瘤侵袭和转移密切相关。Lumican在各种肿瘤中均有报道。lumican的表达与肿瘤细胞的生长有关。但许多研究对lumican的潜在的生物学功能的报道截然不同。目前尚不清楚，lumican在肿瘤间质中的表达提高是否意味着肿瘤浸润及不良预后。2007年6月至2013年6月我们应用免疫组化方法检测检测Lumican在前列腺癌组织和正常前列腺组织中的表达情况，探讨其在前列腺癌中表达的相关性，以及其表达情况与患者临床病理特征的关系。

1.材料与方法

1.1实验材料

1.1.1标本：收集我院44例前列腺癌患者的手术标本，所有前列腺癌患者均未接受放疗、化疗及内分泌治疗。年龄为51～79岁，平均为（63.2±11.7）岁。44例均经病理诊断为前列腺癌，病理分级使用Gleason评分系统计分：G1（2～4）10例，G2（5～6）16例，G3-4（7～10）18例；按2002美国肿瘤联合委员会（AJCC）推荐的TNM分期系统对前列腺癌进行临床分期：Ⅰ期+Ⅱ期19例，Ⅲ期+Ⅳ期25例；其中14例前列腺癌者有远处转移。15例正常前列腺组织选取前列腺增生切除手术的患者，年龄为53～75岁，平均为（56.4±13.3）岁。

1.1.2试剂：兔抗人Lumican多克隆抗体浓缩液（英国Abcam公司）。以下用品均购于北京中杉金桥生物技术有限公司，超敏通用型PV6000二步法检测试剂盒和DAB显色试剂盒，EDTA抗原修复液0.01MpH6，PBS缓冲液0.01MpH7.2～7.4。

1.2实验方法

应用免疫组化超敏型S-P法分别检测Lumican在前列腺癌组织和正常前列腺组织中的表达情况。所有标本均经10%的甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4μm连续切片。组织切片脱蜡、水化；置入柠檬酸盐缓冲液中，微波炉抗原修复，3％H2O2孵育，阻断过氧化物。滴加一抗，湿盒4℃孵育过夜；滴加通用型二抗，湿盒37℃温箱孵育30min。滴加DAB溶液显色；苏木素复染，分化、返蓝、脱水、透明、中性树胶封片。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，用已知的蛋白表达组织片作阳性对照。

1.3结果判定

Lumican染色结果判定[2]：主要为细胞质和间质组织着色，以细胞质和间质出现黄色或棕黄色颗粒状、团块状或均质染色为阳性。染色强度依次为缺失或轻微染色为阴性表达（-），阳性表达着色值为（1分，轻度着色；2分，中度着色；3分，为强着色）。其阳性细胞比例评分标准为：随机选取每张切片10个高倍镜视野（×400）下的阳性细胞占细胞总数的百分比，再计算出10个高倍镜视野中阳性细胞的平均百分比，阳性细胞<25%为0分，26%～50%为1分，51%～75%为2分，＞75%为3分，其结果计算指数值。计算公式为指数值=着色值×阳性细胞比例（%）。综合评分0分为阴性（-），1-2分为弱阳性表达（+），3～4分为阳性表达（++），6-9分为强阳性表达（+++）。

1.4统计学方法

采用SPSS19.0统计软件对数据进行分析处理，应用χ2检验分析Lumican与前列腺癌临床病理特征间的关系，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

Lumican在正常前列腺组织与前列腺癌组织中表达的阳性率分别为40.0（6/15）和75.0（33/44），差异有统计学意义（P＜0.05）(见表1)。此结果提示lumican表达的增加与前列腺癌的发生有关。

Lumican在前列腺癌组织中表达与临床病理特征的关系见表2，Lumican的表达与年龄无相关性（P＜0.05）。Lumican在低分化前列腺癌组织中表达的阳性率高于高分化前列腺癌组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。Lumican在Ⅰ期+Ⅱ期和Ⅲ期+Ⅳ期前列腺癌组织中表达的阳性率分别为42.1（8/19）和76.0（19/25），在有远处转移和无远处转移前列腺癌组织中表达的阳性率分别为85.7（12/14）和53.3（16/30），差异均有统计学意义（P＜0.05）。

表1Lumican在正常前列腺组织与前列腺癌组织中表达的阳性结果分析

3.讨论

前列腺癌（prostatecancer）是泌尿系统常见的恶性肿瘤，是严重威胁男性生命健康的恶性肿瘤之一[3]，其中以欧美地区最为多发，严重影响患者生活质量及预期寿命，世界范围内，前列腺癌的发病率及病死率分别位居男性恶性肿瘤的第2位及第5位[4]。随着我国社会经济的快速发展、人民生活水平的提高、人口老龄化的加剧以及饮食结构的改变，前列腺癌在我国的发病率呈现逐年增加的趋势[5]。随着诊断技术不断提高，仍有近40%患者就诊时已发展为进展期前列腺癌[6]。研究发现，患者出现症状时，表明可能已有局部浸润或远处转移，以骨骼和淋巴结转移为常见[7]。前列腺癌具有潜伏性，恶性程度较高，预后相对较差的特点。前列腺癌的分子生物学表明，多种癌基因及抑癌基因共同参与了前列腺癌的发生、发展过程，并与前列腺癌的发生机制及预后评价密切相关[8]。

Lumican也称为基膜聚糖，广泛表达于人类的各种组织器官中，如角膜、骨骼肌、肾脏、胎盘、血管、子宫、脑、肺、肝等[9]，是蛋白多糖（proteoglycans）的一种，为38kD的一种小分子蛋白多糖，存在于细胞周围基质，其核心蛋白含338个氨基酸，有5个N-糖基化（N-glycosylation）部位，其中4个位于富含亮氨酸区。Lumican基因位于10号染色体的远中区，它不含有常规基因所具备的TATA盒，但上游开始复制的位点含有独特的TATCA盒，编码的蛋白与其他富含亮氨酸者一样，与胶原有很强的交互作用。目前发现Lumican在多种恶性肿瘤均有异常表达，如乳腺癌，结肠癌，胰腺癌，恶性黑色素瘤等[10]。肿瘤学研究中有关Lumican在肿瘤中的表达有两种不同的观点，大多数学者认为Lumican基因在肿瘤发展与转移中所起的作用与肿瘤组织的特异性有关，但多数研究认为Lumican基因在恶性肿瘤中呈低表达。至于lumican准确的分子机制包括受体和信号通路目前尚未完全清楚。但许多具有组织特异性的受体及细胞信号传导通路或可介导lumican的表达。例如，lumican可抑制细胞增殖，通过Fas受体-Fas配体诱导凋亡。Lumican通过激活包含β2结合素途径，粘附于中性粒白细胞表明，增强细胞迁移能力。有研究表明前列腺癌细胞中Lumican表达下降[11]，Lumican可抑制前列腺癌的侵袭与转移，表达Lumican的前列腺癌细胞表现出细胞突起形成减少[12]。

本研究结果证实前列腺癌组织中Lumican的表达明显高于前列腺增生组织，它与前列腺细胞癌的组织学分级、临床分期、远处转移密切相关。可以认为前列腺癌组织中lumicna的表达增强预示着该癌组织的高侵袭倾向，即具有浸润生长、分化程度低、易发生转移等恶性特征。Lumican可能通过抗凋亡机制在前列腺癌的生物学特性中发挥着重要作用。由此可见，Lumican基因表达与前列腺癌的恶性程度呈正相关，与前列腺癌的发生、发展密切相关。

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基金项目：遂宁市中心医院科研基金