人免疫缺陷病毒阳性者免疫印迹试验带型分析

人免疫缺陷病毒阳性者免疫印迹试验带型分析

张玲1，李申江2吴林伯3，王廷杰4

张玲1，（通讯作者）李申江2吴林伯3，王廷杰4

1达州市通川区妇幼保健院；四川达州635000

2达州市中心医院检验科；四川达州635000

3达州市中心医院输血科；四川达州635000

4达州市中心医院内科四川达州635000

摘要：目的通过用免疫印迹实验对人免疫缺陷病毒（HIV）特异蛋白抗体的检测，探讨WB带型在HIV感染者和艾滋病患者中的临床关系。方法：对省、市疾控中心确诊的HIV者118例作带型分析。结果：HIV感染者和艾滋病患者WB带型分析基本上都能测出gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p31、p24、p17共9个区带。其中HIV感染者39例检出P17条带31例（79.49%），p55条带17例(43.59%);艾滋病患者79例检出P17抗体46例（58.23%），p55条带17例(21.52%).HIV感染者的WB带型主要有5种类型，艾滋病患者WB带型主要有13种类型；两组病例中HIV感染者WB带型9个区带较为齐全，而艾滋病患者WB带型有P17、P55带缺失，P17和P55均缺失以及严重的p24缺失。结论：艾滋病患者的P17和P55条带的检出率显著低于HIV感染者（P<0.01）；HIV感染者的WB带型主要有5种类型，而艾滋病患者的WB带型则有13种不同的类型，是HIV感染者的2.6倍。艾滋病患者9个区带齐全的检出率显著低于HIV感染者，而除P55带缺失、P17缺失及P17和P55均缺失两组间无显著差异外，艾滋病患者出现其他各种区带的发生率显著高于HIV感染组（P<0.01）。

关键词：HIV感染者；艾滋病患者；免疫印迹法WB带型

随着艾滋病毒感染的不断上升，虽然HIV检测的实验也较多，但免疫印迹实验（westernblot,WB，）仍然是首选的确诊HIV感染的重要实验，HIV感染后的免疫反应可使抗体在不同时期出现不同的血清学反应，这对病原检测和诊断具有非常重要的意义。为此我们通过用免疫印迹实验（westernblot,WB）对HIV（+）特异蛋白抗体的检测，探讨WB带型在HIV感染者和艾滋病患者中的临床关系。

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1病人：达州市中心医院因症住院的HIV(+)患者，通川区妇幼保健院的疑似送检患者然后确诊HIV(+)患者，以及门诊检查被确诊为HIV(+)患者。首先经本院输血科作初筛实验，初筛HIV(+)阳性患者.再采血送省市疾控中心作确诊实验，确诊实验阳性患者纳入本文观察分析的例数。所有病例的诊断符合2008年制定的卫生行业《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》[。其中男86例，女32例，平均年龄44.53岁，最大80岁，最小19岁。

1.2仪器与试剂

1.2.1仪器：奥地利Tecan公司免疫印迹仪，型号：Profiblot48.

1.2.2试剂：MP生物医学亚太私人有限公司北京市西美杰科技有限公司人类人免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗体检测试剂盒（免疫印迹）。

1.3方法：我们根据HIV（+）者有无临床症状将其分为HIV无症状感染组和有症状艾滋病患者组，其中HIV感染组中还包括来院门诊检查被确诊为HIV(+)患者；然后按组分析HIV感染者和艾滋病患者的WB带型，分别统计其各类带型的检出百分比（%），并作卡方分析及显著性检验。

1.4统计学处理：分别统计其各类带型的检出百分比（%）。组间比较用X2检验，统计应用SAS6.12软件处理。

2结果

2.1HIV感染者和艾滋病患者的各WB带型分析的比较见表2-1,由表2-1可见，

表2-1HIV感染组与艾滋病组的各WB带型分析的比较

注：两组别比较P17带型*：p＜0.01；p55带型*：p＜0.01。

2.2HIV感染者和艾滋病患者的WB带型变化分析见表2-2、表2-3，由表2-2可见，HIV感染者的WB带型主要有5种类型，由表2-3可见艾滋病患者的WB带型则有13种不同的类型，是HIV感染者的2.6倍。

表2-2HIV感染者的WB带型变化分析

表2-3艾滋病患者的WB带型变化分析

2.3两组病例中，各种WB带型的检出率比较见表2-4，艾滋病患者9个区带齐全的检出率显著低于HIV感染者，而除P55带缺失、P17缺失及P17和P55均缺失两组间无显著差异外，艾滋病患者出现其他各种区带的发生率显著高于HIV感染组（P<0.01）。

表2-4艾滋病组与HIV感染者各种WB带型检出率的比较

注：两组比较出现A型*：p＜0.01出现其它*：p＜0.01。

3讨论

HIV感染已成为各国严重的社会问题及医学难题，其危害难以估计[1-2]。据WHO统计2007年末中国就有84万人感染HIV病毒，并处于流行的高速增长期[3]，能准确检测出HIV病毒就非常重要，尤其是HIV的检测要提高AHI阶段（只体内病毒迅速复制，病毒量猛增，但抗体尚不可检测的阶段）的检出率。特别是受血者一旦接触了未检测出的HIV病毒血，就会100%的楷率感染[4]，从而不断的寻求更特异，灵敏的检测各阶段的特异性物质还是长期的目标。目前感染了HIV可以通过HAART方案治疗来提高CD4+T淋巴细胞的数量来提高免疫力[5]，同时根据病程来指导用药剂量，能准确诊断HIV感染和判断其病程从而为防止其传播和指导用药就尤为重要。尽管国内彭庭海[6]报道：一般人群中ELISA检测与WB实验阳性符合率分别达到了89.93%和93.39%，但不能准确判断病情发展情况。目前已有罗氏、生物梅里埃、西门子等多家知名企业研制出通过免疫印迹技术检查HIV特异性抗体的试剂，来检测针对HIV病毒各结构蛋白的抗体,从而达到病情进程的判断。按照HIV抗原从大到小的顺序排列有：gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p31、p24、p17.其中p24和gp160抗体首先出现，随着病情的进展，针对HIV不同组分的抗体也陆续出现并持续整个潜伏期。当病程进展到AIDS期时，病毒大量复制消耗了大量的p24抗体，这些变化均可在WB的试验带型中反映出来。

观察结果表明：1、HIV感染者和艾滋病患者有不同类型的WB带型变化，艾滋病者的P17和P55条带的检出率显著低于HIV感染无症状期（P<0.01），与李燕等报道的P31阳性率也有显著差异不符，可能是感染的途径比例不同[7]。2、HIV感染者的WB带型主要有5种类型，而艾滋病患者的WB带型则有13种不同的类型，是HIV感染者的2.6倍，这些差别可能与李桂英[8]等报道的人免疫缺陷病毒具有适应环境和免疫逃逸的高度变异的特点相关。3、艾滋病患者9个区带齐全的检出率为15.19%，与朱荣华[9]等报道的21.45%相近，显著低于HIV感染者的41.02%，而除P55带缺失、P17缺失及P17和P55均缺失两组间无显著差异外，艾滋病病例中P24缺失者仅6例，出现其他各种区带的发生率显著高于HIV感染组（P<0.01）。

有临床观察认为，只出现gp160和p24是HIV早期感染[10]的重要信息；全带型或基本全带型，提示当时的受检者均处于HIV感染期，且感染时间大致相同。高凯[11]等也报道p24在HIV-1感染者的血清转换期出现的楷率为38%左右。通过我们调查出现p24缺失的受检者6例已3死，因此p24缺失是AIDS期的重要标志之一。

观察可见，抗gp160与抗gp120持续存在於疾病的各阶段，偶有（1/79例）艾滋病患者gp120和gp41缺失者，而抗p17，p24、p51、p55抗体及抗gp4l的检出率，随着病情变化，呈明显下降；并出现多种WB带型。带型的变化，主要见于HIV病毒的核心和基质蛋白产物及POL逆转录酶与内源性核酸酶抗体等结构基因产物的不同程度的缺失，提示病情的进展，包括env抗病毒外壳蛋白产物，gag病毒核心和基质蛋白产物及POL逆转录酶与内源性核酸酶抗体等3个结构基因产物的各种缺失，应当是艾滋病病情和病程的反映，探索WB带型与临床的关系，有利于对病程和病情的判断，指导临床对艾滋病的诊治。

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