1155例HIV感染者外周血中T淋巴细胞亚型的结果分析

1155例HIV感染者外周血中T淋巴细胞亚型的结果分析

李巧清陈艳芝

李巧清陈艳芝(云南省保山市人民医院检验科678000)

【摘要】目的：研究艾滋病病毒感染对外周血T淋巴细胞亚型的影响。方法：采用流式细胞计数仪检测我市1155例HIV感染者外周血中T淋巴细胞亚型的变化。结果：HIV感染者CD4细胞百分数和CD4/CD8比值显著降低，CD8细胞百分率明显升高，差异有统计学意义（p<0.01).感染者年龄不影响其表达，差异有统计学意义（p>0.05）。结论：HIV感染者T淋巴细胞亚群的检测，对判断病情和评估疗效均有重要的临床价值。

【关键词】FCMHIVT淋巴细胞亚群

中图分类号：R512.91文献标识码：B

AnalysisofTlymphocytephenotypeof1155HIVinfectedpersonsinperipheralbloodLiqiaoqingChenyanzhiPeople′shospitalofBaoshanYunNanProvince678000China

[Abstract]Objective:TostudyHIVinfectiononTlymphocytesubtypeofperipheralblood.Methods:TheperipheralbloodTlymphocytephenotypechangesof1155HIVinfectedpersonsdetectedbyFlowCytometricinourcity.Results:percentageofCD4cellandratioofCD4/CD8HIVinfectedsignificantlydecreased,percentageofCD8cellwassignificantlyhigher,thedifferencewasstatisticallysignificant(p<0.01).TheagedifferenceofHIVinfectedpersonsdoesnotaffecttheexpressionofCD4/CD8,thereisnostatisticallysignificant(p>0.05).Conclusion:ThedetectionofTlymphocytesubsetsinHIVinfectedpersonsforjudgingtheconditionsofpatientandassessmentofeffectofcuringdiseasehasimportantclinicalvalue.

[Keywords]FCMHIVTcellsubsets

准确可靠的CD4+T淋巴细胞检测是评价HIV感染者免疫功能状况，预测病程进展，确定疾病分期和治疗时期，评价抗病毒药物治疗效果和估测预后的主要指标。进行性CD4+T淋巴细胞损耗可能与临床上出现严重症状有关，也预示可能预后不良。世界卫生组织（WHO）和欧美等国家均推荐HIV感染者每3－6个月监测一次CD4+T淋巴细胞水平，并以该指标作为开始预防间质性浆细胞肺炎和其它机会性感染，以及开始抗逆转录病毒治疗的因素。我院按照国家抗病毒治疗的相关规定执行，我科HIV检测实验室为抗病毒治疗提供及时、准确的数据。

1资料与方法

1．1临床资料

1155例患者均为我市HIV抗病毒治疗病人，男688例，女467例。最大年龄75岁，最小年龄2岁，平均年龄（36.5±13.87）岁。

1．2仪器与试剂

仪器为美国BDFACSCalibur流式细胞分析仪

使用BDCaliBRITE微球，运行FACSComp软件进行仪器的质量控制。

定期进行仪器校准，做好室内质量控制，参加实验室能力验证。

使用MultiSET软件及配套三色试剂CD3CD4CD8来获取和分析T淋巴细胞亚群。

1.3流式细胞术计数法原理

流式细胞术(FCM)是对细胞和微粒进行快速、灵活、定量分析分类的高精技术，它融合了激光、电子计算机、单克隆抗体、荧光素化学、细胞化学染色等技术的优点。其基本原理是以激光为光源，将被检细胞用荧光标记抗体结合后输入流式细胞仪，通过高速流动系统对细胞排列成行，一个一个的流经检测区，当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声振荡搅动液流，使液流断裂成一连串均匀的小滴，每滴内最多只含有一个细胞，细胞经荧光探针的光反应和标记物的光散射能力中获取信息，由光电倍增管接收并转化成脉冲信号，并进行增强，数据经电脑处理、分辨细胞的类型从而检测出各类淋巴细胞。

1．4检测方法

标本使用抗凝全血，在Falcon流式进样管内加入20ulT淋巴细胞CD3CD4CD8抗体和反向加样50ul全血，轻轻充分混匀，置室温避光处放置15min，加入10倍稀释FACS溶血素450ul，置室温避光处放置15min。用MultiSET自动软件获取15000个淋巴细胞，自动分析T淋巴细胞免疫亚型，报告CD4+,CD8+T淋巴细胞百分率CD4+,CD8+T淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+比值。

1．5统计学处理

实验数据用SPSS13.0软件包处理，数据采用均数±标准差（x±s）表示。

2结果

2.1HIV感染者T淋巴细胞亚群结果如下：

HIV感染者CD4+细胞百分率，CD4+,CD8+T淋巴细胞绝对计数，CD4+/CD8+比值显著降低，CD8+细胞百分率则明显增加。结果见表1。

表1HIV感染者T淋巴细胞亚群结果如下：

2．2HIV感染者年龄，性别对细胞免疫功能的影响结果见表2。

表2不同性别、年龄T淋巴细胞亚群结果比较

2.3成人及青少年艾滋病分期标准（CDC，美国，1993年）

2.4判断HIV感染者发生临床合并症的可能性并进行预防

2.5确定抗HIV药物治疗开展的时机及进行疗效评价

CD4+T淋巴细胞计数在200-350之间，而且符合以下任何一条标准，

a)一年内CD4+T淋巴细胞计数下降超过30%，或者CD4+T淋巴细胞计数绝对数下降超过100/mm3

b)病毒载量在100,000拷贝/ml以上**

c)患者具有治疗意愿，并可以保证良好依从性；建议治疗

如果患者为女性，当使用含有NVP治疗方案时，建议推迟到CD4+T淋巴细胞<250/mm3以后再开始治疗***

注：*女性患者基线CD4+T淋巴细胞≥250/mm3时，不推荐使用含有奈韦拉平（NVP）的方案，因为奈韦拉平可以增加肝毒性

**有条件地区可以在开始抗病毒治疗前进行病毒载量检测

3讨论

3.1HIV是一种多嗜性病毒，能感染人体的许多细胞，细胞表面的CD4分子是HIV的主要受体，AIDS是HIV选择性感染CD4+T淋巴细胞的结果。HIV感染通过多种直接和间接的病理机制导致CD4+T淋巴细胞的损伤死亡。

3.2疾病进展的总体特点是人体血液中CD4+T淋巴细胞的数量逐渐减少以及病毒血症的增加。外周血中CD4+T淋巴细胞的数量对于确定HIV感染状况，是否进入发病期，判断HIV感染者的临床并发症，确定抗HIV药物治疗的时机及机会性感染的预防和治疗均具有极其重要的作用。

3.3当HIV感染者CD4+T淋巴细胞<200个/μl或百分率≤14％时，即进入艾滋病发病期。CD8+T淋巴细胞是机体抗HIV最主要的免疫细胞，在HIV感染初期，随着病毒量的增加，CD8+淋巴细胞的数量也随之上升，其数量与病毒量呈正相关［2］。CD4+/CD8+比值是反映细胞免疫平衡状态的敏感性指标，CD4+/CD8+比值的下降被认为是疾病严重和预后不良的重要指标之一［3］。

3.4在T淋巴细胞分类中，CD4代表T辅助细胞而CD8代表T抑制细胞和T杀伤细胞。CD4+T淋巴细胞是HIV感染的主要靶细胞，而其本身又是免疫反应的中心细胞；CD8+T淋巴细胞是免疫反应的效应细胞。正常人的CD4+T淋巴细胞约占总的T淋巴细胞的65%，CD8+T淋巴细胞约占35%。

3.5人体感染了HIV后，涉及的主要病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为：CD4+T淋巴细胞的丢失，绝对计数的减少，同时CD8+T淋巴细胞数量增加，CD4和CD8的比例失调。因此CD4+，CD4+T淋巴细胞计数作为直接测定免疫功能的方法，是提供HIV感染病人免疫系统损害状况最明确的指标。

3.6用于HIV感染者的疾病分期：凡CD4+T淋巴细胞＜200/mm3或CD4+T淋巴细胞的百分比＜14%的HIV感染者可归入艾滋病。

3.7判断HIV感染者的临床合并症（各种机会性感染与CD4+T淋巴细胞的相关性），如CD4+T淋巴细胞＜200/mm3时，很容易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞＜50/mm3的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞＞100/mm3的病人。帮助确定抗HIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，例如，当CD4+T淋巴细胞＜200/mm3时，应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗。

3.8通过检测1155例HIV感染者的T淋巴细胞亚群，结果显示：HIV感染者CD4+细胞百分率及CD4+/CD8比值显著降低，而CD8+细胞明显增高。其中CD4+细胞百分率≤14％者占26.6％，提示部分人已发展为AIDS。不同年龄的HIV感染者不影响T淋巴细胞亚群在外周血中的表达，但不同性别的HIV感染者3项指标均存在一定的差异，从结果分析看，男性CD4+细胞百分率和CD4+/CD8+比值下降比女性更显著。

3.9抗HIV药物疗效的重要判断指标

HIV感染是指人体感染HIV后直至发展为AIDS的全过程，时间长，临床表现错综复杂。随着对HIV抗病毒治疗工作的深入和发展，本院对我市1155例抗病毒治疗病人的T淋巴细胞亚群进行检测分析，结合HIV病毒载量检测和耐药监测，以了解HIV感染者T淋巴细胞亚群的特点及其与艾滋病病情的关系，对HIV感染病人进行临床分期，指导临床医生对抗病毒治疗药物调整，，指导艾滋病患者的抗病毒治疗，确定治疗时机，选择治疗方案，评价治疗效果，为我市的防艾工作提供科学有效的数据。总之，HIV感染者定期检测T淋巴细胞亚群，对制定最恰当的治疗计划，指导预防方案和进行临床治疗均有重要的临床意义。

【参考文献】

［1］周先志，赵敏.艾滋病诊疗新技术［M］.北京：人民军医出版社，2005：9-25

［2］PaulME,shcarcrWT,KozinctzCA,etal.ComparisonofCD8+Tcellsub－setsinHIVinfectedrapidProgressorchildrenversusNon-rapid.Pro-gressorchildren［J］.JAllergyclinlmmunol,2001,108(2):258-264

［3］肝硬化患者外周血及腹水T淋巴细胞亚群的变化及意义［J］.胃肠病学和肝病学杂志,2006,15(6):601-602

[4]全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）