ZBED6基因1043A/G多态性与直肠癌相关性的初步研究

ZBED6基因1043A/G多态性与直肠癌相关性的初步研究

何珊边伟袁鑫雷笑梁田田沈甜然

（包头医学院医学技术学院内蒙古包头014040）

【摘要】目的：验证ZBED61043位点基因单核苷酸多态性与直肠癌的相关性。方法：采用聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法，对81例随机直肠癌患者和同数量无亲缘关系健康对照者的ZBED6基因1043A/G多态性进行检测，并随机抽取患者及正常人样本各5例测序。结果：在81列直肠癌患者标本中未检测到ZBED61043位点存在基因多态性，均为AA型。结论：ZBED6基因1043A/G位点基因多态性与直肠癌发生的危险因素无相关性。

【关键词】直肠癌；ZBED6；基因多态性

【中图分类号】R735.3【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）36-0136-02

AssociationofZBED6genepolymorphismwithrectalcancer

HeShan,BianWei,YuanXin,LeiXiao,LiangTiantian,ShenTianran.

SchoolofMedicalTechnology,BaotouMedicalCollege,Baotou,InnerMongolia,014040China

【Abstract】ObjectiveTheaimistostudytheassociationofsinglenucleotidepolymorphism(SNP1043)oftheZBED6genewithrectalcancer.MethodsThedistributionofgenotypicandallelicfrequenciesat1043sitewasdetectedbypolymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphismmethodamong81patientswithrectalcancerandthesamenumberofunrelatedhealthycontrols,andverifiedbygenesequencinganalysis.ResultTherewasonlyonegenotypeAAat1043sitesin81patientswithrectalcancer.ConclusionThereisnocorrelationbetweenthe1043A/GpolymorphismofZBED6geneandtheriskfactorsofrectalcancer.

【Keywords】Rectalcancer;ZBED6;Singlenucleotidepolymorphism

ZBED6是在研究瘦肉型猪的影响因素时挖掘出来的一个转录因子，它结合在胰岛素样生长因子2（IGF2）的3号内含子区，抑制IGF2的表达量，从而影响猪的肉质[1-2]。随后展开了一系列对于ZBED6的深入研究，发现ZBED6基因主要参与细胞周期调控、发育及分化等事件，且其信号通路多与人类疾病有关[2]。敲减ZBED6后会使细胞增殖和迁移速率增加[3]。且ZBED6会影响人结直肠癌细胞的增殖和分化速率[4]。故本研究拟在直肠癌病例个体中进行ZBED6基因1043A/G位点基因多态性的研究，探讨其与直肠癌发病的相关性。

1.资料和方法

1.1研究样本

于包头市肿瘤医院收集直肠患者81例，彼此间无亲缘关系。其中男52例，女29例，年龄41～82岁。同数量健康对照来自同时期社区体检人群，均无癌症病史，其性别、年龄与患病组相匹配。

1.2聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测

（1）提取基因组DNA：提取EDTA抗凝管采集的外周血样本基因组DNA。（2）引物设计与合成：使用Primer5软件设计引物，引物序列F：TCAAGAGCTGTGTGTAATATATGTA，R：CTAACATAGGTTCATCTGAATCAGA。目的基因序列长280bp。（3）PCR扩增：反应体系总体积为25μl：模板3μl，2×TaqPCRMasterMix13μl，上下游引物各1μl，去离子水7μl。（4）基因分型和测序：酶切反应总体系为10μl，包括NlaⅢ内切酶0.2μl，10×限制性内切酶Buffer1μl，PCR产物4μl。37℃水浴15min，2%琼脂糖凝胶电泳，分析其基因型（GG型：280bp，AG型：205，280，75bp；AA型：205和75bp）随机选取10份PCR产物，送由北京六合华大基因科技有限公司测序，验证基因型。

2.结果

2.1ZBED6基因1043A/G位点基因分型

通过限制性内切酶NlaⅢ消化后电泳，结果显示ZBED6基因1043A/G位点只有AA，1种基因型，直肠癌患者与正常对照无差异。

2.2ZBED6基因1043A/G位点测序结果

随机选取直肠癌和正常对照PCR产物各5例测序，结果显示ZBED6基因1043A/G位点只有AA，1种基因型与酶切结果完全一致，直肠癌患者与正常对照无差异。

3.讨论

Laere等人2003年在Nature上的一篇报道提出猪IGF2基因内含子3的一个单碱基突变可增加猪3%～4%的瘦肉量，并发现在IGF2基因内含子3突变的区域内存在一个未知抑制因子[1]Markljung等将此新发现的抑制因子命名为ZBED6。随后展开了一系列对于ZBED6的深入研究，发现ZBED6定位于细胞核内，主要参与细胞周期调控、发育及分化，且其信号通路多与人类疾病有关[2]。敲减ZBED6后会使细胞增殖和迁移速率增加，且ZBED6会影响人结直肠癌细胞的增殖和分化速率[3-4]。ZBED6基因在哺乳动物中有高度的保守性[5]，现发现牛ZBED6存在3个SNP对于牛体重等胴体性状具有显著影响，说明不同的SNP对于细胞增殖速率具有不同影响[6]。这3个SNP中1043A/G位点与人最具同源性，而目前尚无报道人ZBED6基因多态性与直肠癌发病关系的研究，故本课题初步探讨了人ZBED6基因1043A/G位点多态性与直肠癌关系。实验结果显示在人ZBED6基因1043位点不存在突变，均为AA型。表明直肠癌发病与1043A/G位点是否突变无关。也可能包头地区人群在此位点不存在突变，或因标本数量不足出现偏倚，可在后续研究中选取其他人群进行研究分析。且本次实验只选择了一个SNP位点研究，今后可继续选择其他的SNP位点进行分析，继续探寻ZBED6基因多肽性与直肠癌发病的关系。已确证直肠癌发病是否与该基因某位点多态性相关。

【参考文献】

[1]Anne-SophieVanLaere,MinhNguyen,MartinBraunschweig,CarineNezer,etal.AregulatorymutationinIGF2causesamajorQTLeffectonmusclegrowthinthepig.Nature，2003,425:832-836.

[2]EllenMarkljung,LinJiang,JacobD.Jaffe,etal.ZBED6,aNovelTranscriptionFactorDerivedfromaDomesticatedDNATransposonRegulatesIGF2ExpressionandMuscleGrowth.PlosBiology，2009，7：e1000256.

[3]Yong-ZhenHuang,Liang-ZhiZhang,Xin-ShengLai,etal.TranscriptionFactorZBED6MediatesIGF2GeneExpressionbyRegulatingPromoterActivityandDNAMethylationinMyoblasts.ScientificReports，2014，4:4570-4581.

[4]MuhammadAkhtarAlia,ShadyYounis,OlaWallerman，etal.TranscriptionalmodulatorZBED6affectscellcycleandgrowthofhumancolorectalcancercells.PNAS,2015，25：7743-7748.

[5]MarkljungE,etal.ZBED6,anoveltranscriptionfactorderivedfromadomes-ticatedDNAtransposonregulatesIGF2expressionandmusclegrowth.PlosBiology,2009,7(12):e1000256.

[6]Yong-ZhenHuang,Ming-XunLi,JingWang,etal.A5′-RegulatoryRegionandTwoCodingRegionPolymorphismsModulatePromoterActivityandGeneExpressionoftheGrowthSuppressorGeneZBED6inCattle.Plosone,2013，8：e79744.