张剑1张珩2焦韵苹3(1陕西医药控股集团有限责任公司710075)(2陕西省妇幼保健院陕西西安710003)(3陕西省第二人民医院陕西西安710001)
【摘要】目的建立肝毒清胶囊中小檗碱的含量测定方法。方法采用硅胶G薄层板,展开剂为正丁醇—乙酸—水(7:1:5)取上层,在366nm下进行薄层扫描测定小檗碱含量,并进行测定方法学的研究。结果小檗碱的含量测定线性范围为0.048~0.240μg,回归方程为Y=635.7X+184.8(r=0.9991,n=5),平均加样回收率为99.96%(RSD=2.6%,n=6),其他成分对样品测定无干扰。结论本方法简便易行、准确可靠、重复性好,可作为肝毒清胶囊中小檗碱含量测定的方法。
【关键词】薄层扫描小檗碱含量测定
引言
肝毒清胶囊为中药复方,益气健脾,疏肝解毒,主治各种病毒性肝炎,尤其慢性病毒性肝炎引起的肝损伤。其按君、臣、佐、使配伍,处方中君药为黄柏,臣药为栀子、大黄,佐使之药为板蓝根、黄芩、柴胡、人参、白术。本研究首选其君药黄柏的有效成分小檗碱作为含量测定指标,采用薄层扫描法[1]为中药复方肝毒清胶囊建立有效成分含量测定的标准,并进行含量测定方法的方法学考察。
1仪器与试药
1.1仪器
TLCSCANNERⅢ型薄层色谱扫描仪(瑞士CAMAG,配CATS4.05软件);KQ-500DE数控超声仪(昆山市超声仪器);BSA124S电子天平(德国赛多利斯);RE-52型旋转蒸发仪(上海青浦)。
1.2试药
肝毒清胶囊(自制);盐酸小檗碱标准品(中国药品生物制品检定所);黄柏对照药材(中国药品生物制品检定所);硅胶G(青岛海洋化工厂);其他生药材均购于西安怡康医药超市,其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1对照品及供试品溶液制备
2.1.1供试品溶液
精密称取肝毒清胶囊粉末0.7000g,加70%乙醇30.0mL,32kHz、60℃条件下超声提取30min,4000r?min-1离心5min,取上清液减压浓缩至合适体积,甲醇定容至5mL,即得。
2.1.2对照品溶液
小檗碱对照品溶液精密称取盐酸小檗碱标准品1.2mg,甲醇溶解并定容至25mL容量瓶中,即得0.048mg?mL-1的对照品溶液。
肝毒清胶囊阴性对照液按处方比例称取除黄柏外的其他药材,模拟肝毒清胶囊制备工艺制备缺黄柏的阴性样品,再按2.1.1方法制备阴性对照液。
黄柏对照药材溶液取黄柏对照药材,按2.1.1方法制备黄柏对照药材溶液。
2.2薄层扫描条件及测定
2.2.1薄层分离条件[2]
薄层板为硅胶G板,厚500μm,0.5%羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂;展开剂为正丁醇—乙酸—水(7:1:5)取上层。
2.2.2薄层扫描条件
采用单波长线性扫描,光源为氘灯,检测波长λ=366nm,线性仪CH=2、SH=3,扫描速度20mm?min-1,狭缝宽度1.0×5.0mm。
2.2.3标准曲线的制备
分别精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0和5.0μL(含小檗碱0.048、0.096、0.144、0.192和0.240μg)点于同一薄层板上,展开,按2.2.2项下进行扫描,纪录扫描图谱,测定峰面积,以峰面积对对照品进样量(μg)进行线性回归,计算回归方程为:Y=635.7X+184.8,r=0.9991。结果表明:在0.048~0.240μg范围内,小檗碱峰面积值与进样量线性关系良好。
2.2.4供试品含量测定[3]
用微量进样器分别取小檗碱对照品溶液4μL、供试品溶液2μL交叉点于同一薄层板上,按2.2.2项下扫描测定,并按下式计算供试品中小檗碱含量:
其中:A对,对照品峰面积积分值;A供,供试品峰面积积分值;m对,对照品点样量。
2.3干扰性试验
分别吸取黄柏对照药材溶液、小檗碱对照品溶液、肝毒清胶囊供试品溶液及缺黄柏的阴性对照溶液,点于同一硅胶G薄层板上,按2.2项下进行测定。扫描结果显示,供试品在与黄柏药材对照品和小檗碱对照品溶液色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而阴性对照对照液则无相应斑点,说明本测定方法无阴性干扰,专属性好。
2.4精密度试验
2.4.1同板精密度试验
精密吸取供试品溶液2μL共5份,点于同一薄层板上,按照2.2项下进行扫描测定,各斑点的面积依次为3044.914、3074.034、3133.106、3126.269、3143.453,测得RSD为1.4%。
2.4.2异板精密度试验
精密吸取同一供试品溶液2μL,分别点于6块薄层板上,按照2.2项下测定含量,其结果为0.0485、0.050、0.0495、0.0480、0.0475和0.0490mg?mL-1,测得RSD为1.9%。
2.5重复性试验
取同一批号肝毒清胶囊样品6份,按2.1.1项下制备供试品溶液,按2.2项下扫描测定,样品含量平均值为0.1745%,RSD为1.6%,结果表明本测定方法重现性良好。
2.6稳定性试验
对已展开的同一对照品和供试品斑点每隔30min扫描一次,共扫描6次,供试品和对照品峰面积的RSD分别为1.5%和1.1%。结果表明在2.5h内本测定方法稳定。
2.7回收率试验
精密称取已知含量(0.17%)的样品共6份,分别置50mL锥形瓶中,并加对照品溶液1.0、1.0、1.2、1.2、1.4和1.4mL,按2.1.1项下制成加样回收供试品溶液,按2.2项下进行测定,结果见下表1。
表1回收率试验结果(n=6)
由表1可知,本方法测定结果的加样回收率为91~106%,平均回收率为99.96%,RSD为2.6%,试验结果表明加样回收率良好。
2.8肝毒清胶囊样品测定
分别精密称取4份样品适量,按2.1.1项下方法制备供试品溶液,按2.2项下测定,结果样品含量平均值为0.1739%,RSD为1.8%。
3结论
本方法中所用供试品处理方法操作简单、效率高,样品薄层扫描测定条件温和,小檗碱分离良好,未见杂质干扰。检测方法误差小,精度高、重复性好,可用于肝毒清胶囊中小檗碱的含量测定。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版一部[M].北京:化学工业出版社,2010.
[2]毛爱英,汪经环.利川产黄连须中小檗碱薄层扫描法的含量测定[J].湖北中医杂志,2000,22(3):49-50.
[3]陈强,何艳玲,刘振民,等.黄连及其制剂中小巢碱的薄层扫描法定量[J].沈阳药学院学报,1994,11(1):34-37.