薄层扫描法测定肝毒清胶囊中小檗碱含量的方法学研究

薄层扫描法测定肝毒清胶囊中小檗碱含量的方法学研究

张剑1张珩2焦韵苹3

张剑1张珩2焦韵苹3（1陕西医药控股集团有限责任公司710075)(2陕西省妇幼保健院陕西西安710003)(3陕西省第二人民医院陕西西安710001）

【摘要】目的建立肝毒清胶囊中小檗碱的含量测定方法。方法采用硅胶G薄层板，展开剂为正丁醇—乙酸—水（7:1:5）取上层，在366nm下进行薄层扫描测定小檗碱含量，并进行测定方法学的研究。结果小檗碱的含量测定线性范围为0.048～0.240μg，回归方程为Y=635.7X+184.8（r=0.9991，n=5），平均加样回收率为99.96%（RSD=2.6%，n=6），其他成分对样品测定无干扰。结论本方法简便易行、准确可靠、重复性好，可作为肝毒清胶囊中小檗碱含量测定的方法。

【关键词】薄层扫描小檗碱含量测定

引言

肝毒清胶囊为中药复方，益气健脾，疏肝解毒，主治各种病毒性肝炎，尤其慢性病毒性肝炎引起的肝损伤。其按君、臣、佐、使配伍，处方中君药为黄柏，臣药为栀子、大黄，佐使之药为板蓝根、黄芩、柴胡、人参、白术。本研究首选其君药黄柏的有效成分小檗碱作为含量测定指标，采用薄层扫描法[1]为中药复方肝毒清胶囊建立有效成分含量测定的标准，并进行含量测定方法的方法学考察。

1仪器与试药

1.1仪器

TLCSCANNERⅢ型薄层色谱扫描仪（瑞士CAMAG，配CATS4.05软件）；KQ-500DE数控超声仪（昆山市超声仪器）；BSA124S电子天平（德国赛多利斯）；RE-52型旋转蒸发仪（上海青浦）。

1.2试药

肝毒清胶囊（自制）；盐酸小檗碱标准品（中国药品生物制品检定所）；黄柏对照药材（中国药品生物制品检定所）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；其他生药材均购于西安怡康医药超市，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品及供试品溶液制备

2.1.1供试品溶液

精密称取肝毒清胶囊粉末0.7000g，加70%乙醇30.0mL，32kHz、60℃条件下超声提取30min，4000r?min-1离心5min，取上清液减压浓缩至合适体积，甲醇定容至5mL，即得。

2.1.2对照品溶液

小檗碱对照品溶液精密称取盐酸小檗碱标准品1.2mg，甲醇溶解并定容至25mL容量瓶中，即得0.048mg?mL-1的对照品溶液。

肝毒清胶囊阴性对照液按处方比例称取除黄柏外的其他药材，模拟肝毒清胶囊制备工艺制备缺黄柏的阴性样品，再按2.1.1方法制备阴性对照液。

黄柏对照药材溶液取黄柏对照药材，按2.1.1方法制备黄柏对照药材溶液。

2.2薄层扫描条件及测定

2.2.1薄层分离条件[2]

薄层板为硅胶G板，厚500μm，0.5%羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂；展开剂为正丁醇—乙酸—水（7:1:5）取上层。

2.2.2薄层扫描条件

采用单波长线性扫描，光源为氘灯，检测波长λ＝366nm，线性仪CH=2、SH=3，扫描速度20mm?min-1，狭缝宽度1.0×5.0mm。

2.2.3标准曲线的制备

分别精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0和5.0μL（含小檗碱0.048、0.096、0.144、0.192和0.240μg）点于同一薄层板上，展开，按2.2.2项下进行扫描，纪录扫描图谱,测定峰面积,以峰面积对对照品进样量（μg）进行线性回归,计算回归方程为：Y＝635.7X+184.8，r＝0.9991。结果表明：在0.048～0.240μg范围内，小檗碱峰面积值与进样量线性关系良好。

2.2.4供试品含量测定[3]

用微量进样器分别取小檗碱对照品溶液4μL、供试品溶液2μL交叉点于同一薄层板上，按2.2.2项下扫描测定，并按下式计算供试品中小檗碱含量：

其中：A对，对照品峰面积积分值；A供，供试品峰面积积分值；m对，对照品点样量。

2.3干扰性试验

分别吸取黄柏对照药材溶液、小檗碱对照品溶液、肝毒清胶囊供试品溶液及缺黄柏的阴性对照溶液，点于同一硅胶G薄层板上，按2.2项下进行测定。扫描结果显示，供试品在与黄柏药材对照品和小檗碱对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照对照液则无相应斑点，说明本测定方法无阴性干扰，专属性好。

2.4精密度试验

2.4.1同板精密度试验

精密吸取供试品溶液2μL共5份，点于同一薄层板上，按照2.2项下进行扫描测定，各斑点的面积依次为3044.914、3074.034、3133.106、3126.269、3143.453，测得RSD为1.4%。

2.4.2异板精密度试验

精密吸取同一供试品溶液2μL，分别点于6块薄层板上，按照2.2项下测定含量，其结果为0.0485、0.050、0.0495、0.0480、0.0475和0.0490mg?mL-1，测得RSD为1.9%。

2.5重复性试验

取同一批号肝毒清胶囊样品6份，按2.1.1项下制备供试品溶液，按2.2项下扫描测定，样品含量平均值为0.1745%，RSD为1.6%，结果表明本测定方法重现性良好。

2.6稳定性试验

对已展开的同一对照品和供试品斑点每隔30min扫描一次，共扫描6次，供试品和对照品峰面积的RSD分别为1.5％和1.1％。结果表明在2.5h内本测定方法稳定。

2.7回收率试验

精密称取已知含量（0.17%）的样品共6份，分别置50mL锥形瓶中，并加对照品溶液1.0、1.0、1.2、1.2、1.4和1.4mL，按2.1.1项下制成加样回收供试品溶液，按2.2项下进行测定，结果见下表1。

表1回收率试验结果（n=6）

由表1可知，本方法测定结果的加样回收率为91～106%，平均回收率为99.96%，RSD为2.6%，试验结果表明加样回收率良好。

2.8肝毒清胶囊样品测定

分别精密称取4份样品适量，按2.1.1项下方法制备供试品溶液，按2.2项下测定，结果样品含量平均值为0.1739%，RSD为1.8%。

3结论

本方法中所用供试品处理方法操作简单、效率高，样品薄层扫描测定条件温和，小檗碱分离良好，未见杂质干扰。检测方法误差小，精度高、重复性好，可用于肝毒清胶囊中小檗碱的含量测定。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版一部[M].北京:化学工业出版社,2010.

[2]毛爱英,汪经环.利川产黄连须中小檗碱薄层扫描法的含量测定[J].湖北中医杂志,2000,22(3):49-50.

[3]陈强,何艳玲,刘振民,等.黄连及其制剂中小巢碱的薄层扫描法定量[J].沈阳药学院学报,1994,11(1):34-37.